高氯酸滴定法與高效液相色譜法測定地巴唑片中地巴唑含量比較*

陸廣馬

（廣西壯族自治區(qū)百色市食品藥品檢驗所，廣西 百色 533000）

地巴唑是2-芐基苯并咪唑的鹽酸鹽，對血管平滑肌有直接松弛作用，臨床多用于治療輕度高血壓、心絞痛、腦血管痙攣[1-2]、胃腸平滑肌痙攣、脊髓灰質(zhì)炎后遺癥、外周顏面神經(jīng)麻痹等疾病，也可用于妊娠期高血壓綜合征的治療。片劑質(zhì)量直接關系用藥安全[3]，需進行檢測。常用的高氯酸滴定法和高效液相色譜（HPLC）法各有優(yōu)勢，前者的優(yōu)點是可快速得到結果，但對環(huán)境要求較高，濕度不能大，一定要是標定溫度，使用的器皿一定要干燥，而且不能邊滴定邊溶解；后者的優(yōu)點是分離效率高，選擇性好，檢測靈敏度高，操作自動化，應用范圍廣[4]，但分析成本較高，購買儀器及日常維護費用較高，且對操作人員技術要求高[5]?，F(xiàn)行質(zhì)量標準中地巴唑片的含量測定方法專屬性不強，不利于質(zhì)量控制。本研究中比較了高氯酸滴定法和HPLC法測定地巴唑片中地巴唑含量的效果。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2030C 3D型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；FA2004型電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；滴定管（50 mL，上?；茖嶒炂鞑挠邢薰荆环忠郝┒罚?50 mL）、移液管（25 mL）均購自泰州市姜堰區(qū)東方科教儀器廠；容量瓶（50 mL，上海壘固儀器有限公司）；GM-0.33A 0.22 μm微孔濾膜（深圳市三利化學品有限公司）。

1.2 試藥

地巴唑片（山西仟源醫(yī)藥集團股份有限公司，批號為C151201，規(guī)格為每片5 mg）；鹽酸地巴唑?qū)φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，批號為10042-201002，純度為98.9%）；高氯酸標準滴定液（上?；瘜W試劑研究所，批號為 2014-19，復標濃度為 0.101 9 mol/L）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 HPLC法

2.1.1 色譜條件

色譜柱：AgilentEclipseXDB-C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相：甲醇 -水 -三乙胺（80 ∶19.5 ∶0.5，V/V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：275 nm；柱溫：26 ℃；進樣量：10 μL[6-7]。

2.1.2 溶液制備

稱取鹽酸地巴唑?qū)φ掌?2.5 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得對照品貯備液[8]；取5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇并定容，即得對照品溶液。稱取樣品粉末適量，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。以溶劑作為陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗：取2.1.2項下3種溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定。結果理論板數(shù)以地巴唑峰計不低于2 000，詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別精密量取對照品溶液20，50，100，150，200 μL，加流動相定容至 200 μL，搖勻，制得系列對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=17 050X-5.142，r=0.999 9（n=5）。結果表明，地巴唑進樣量在 0.2 ～2.0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結果的RSD為2.45%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液適量，分別于室溫下放置 0，4，8，12，16，24 h 時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD為2.62%（n=6），表明供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復性試驗：稱取同一樣品適量，精密稱定，同法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果的RSD為2.64%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品適量，共6份，分別加入一定質(zhì)量濃度的對照品溶液，同法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

表1 地巴唑加樣回收試驗結果（n=6）

2.2 高氯酸滴定法

取樣品50片，精密稱定，置研缽中研磨，稱取適量（相當于地巴唑0.2g），精密稱定，置分液漏斗中，加10mL水，搖勻溶解，加氫氧化鈉5 mL，氯仿50 mL，振搖，萃取，分離出氯仿層。濾過，取續(xù)濾液20 mL，加1.5 mL甲基橙為指示液，用0.1 mol/L高氯酸溶液滴定，溶液呈桃紅色則指示滴定終點。

2.3 樣品含量測定結果

HPLC法的測定結果較高氯酸滴定法更滿意，詳見表2。

表2 樣品含量測定結果（%，n=5）

3 討論

現(xiàn)行藥品標準中采用堿提取非水滴定法測定地巴唑片的含量，操作煩瑣費時，不易掌握。傅應華等[9]應用一階導數(shù)光譜法測定地巴唑片含量，同時考察了樣品的含量均勻度，結果顯示，地巴唑溶液在72 h內(nèi)其一階導數(shù)光譜振幅基本不變，故此法可用于該制劑的質(zhì)量控制。李偉[10]采用陰離子表面活性劑滴定法對地巴唑進行了含量均勻度檢查，結果顯示操作可行。其他測定方法還有HPLC法及高氯酸滴定法，高氯酸滴定法為非水滴定法，原理為氫離子與早弱堿性基團結合，但該方法專屬性不高[11-12]。高氯酸滴定時，如樣品溶解不完全，粉末置分液漏斗時，易堵塞活塞，導致溶解困難[13]。HPLC法可很好地減少測定過程中雜質(zhì)對地巴唑的影響，地巴唑?qū)儆袡C銨鹽酸鹽，在甲醇-水流動相中會發(fā)生嚴重的拖尾現(xiàn)象，而加入0.5%三乙胺后，可很好地改善該情況[14]。

綜上所述，HPLC法相對于高氯酸滴定法能更好地減少雜質(zhì)對地巴唑含量測定的干擾，可更準確地測定含量。