刺梨提取物對小鼠免疫器官指數(shù)血液指標及抗氧化功能的影響

李夢云 ， 邱榮超 ， 楊建平 ， 姚國佳 ， 王彩鈴 ， 程 偉 ， 李婉濤

(河南牧業(yè)經(jīng)濟學院 動物科技學院 ， 河南 鄭州 450046)

刺梨(Rosa RoxburghiiTratt，RRT)是一種主要分布于貴州、云南、四川、重慶等南方地區(qū)的薔薇屬野生藥用植物，富含黃酮類、維生素C、微量元素、刺梨多糖等多種活性成分[1-2]，具有顯著的提高機體免疫力和抗疾病作用，對動物粥樣硬化[3]、胃癌[4]、卵巢癌[5]等疾病瘤具有明顯的抑制作用。同時，刺梨常用于促進機體健康和保健作用。因而推測可能具有抗氧化作用。目前刺梨在動物上的應用研究比較少，本課題組前期研究表明，刺梨提取物可提高皖西白鵝生產(chǎn)性能、調(diào)節(jié)血脂代謝和提高相關基因表達量[6]。本試驗主要研究刺梨提取物對小鼠免疫功能、血液指標和抗氧化功能的影響，為進一步研究其在動物上的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 刺梨及刺梨提取物的制備 刺梨樣品,購自開封市金維康野生植物開發(fā)有限公司。將刺梨干果粉碎，在 45 ℃條件下蒸餾水浸泡 2 h后，以料液比1∶10(40%乙醇)在超聲波裝置中超聲提取40 min(50 ℃、40 KHZ頻率)，然后在濃縮罐中(60 ℃，負壓-0.05～-0.08 MPa)進行濃縮，濃縮至相當于含原藥1 g/mL, 即為刺梨提取物，在4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實驗動物 試驗所用小鼠為5周齡健康的昆明系小鼠，體重22 g左右，購自河南省實驗動物中心。

1.3 試驗設計與試驗 動物選取經(jīng)飼養(yǎng)觀察的健康昆明系小鼠45只，隨機分成3組，即對照組、試驗1組和試驗2組，每組5個重復，每個重復3只小鼠。試驗1組和試驗2組每天分別灌服0.4 mL和0.6 mL刺梨提取物，灌胃劑量參照張曉芬等[7]在小鼠和李夢云等[6]在鵝上的試驗結果，對照組灌服生理鹽水。整個試驗期21 d。試驗結束后每個重復挑選1只小鼠，摘除眼球采血，用于分離血清檢測血液指標，再將小鼠脫頸致死，分離出脾臟、胸腺和肝臟備用。

1.4 飼養(yǎng)管理 試驗小鼠以籠為單位飼養(yǎng)，飼喂常規(guī)復合飼料，試驗期間每天9∶00斷水斷料， 下午15∶00 給試驗組小鼠灌胃刺梨提取物，對照組灌服生理鹽水。其他時間自由采食與飲水。試驗期間各組飼養(yǎng)管理條件一致，并觀察試驗小鼠日常健康狀況。

1.5 測試指標與方法

1.5.1 臟器指數(shù)的測定 將小鼠脫頸致死后，分離出脾臟和胸腺，用吸水紙擦干血液，并稱重，計算脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)。

臟器指數(shù)=臟器鮮樣(mg)/活體體重(g)

1.5.2 血液指標的測定 禁食后12 h摘眼球取血、靜置、凝固后置于離心機中以3 000 r/min 離心15 min，吸取上層血清置于EP管中，在-20 ℃保存，測定血清葡萄糖、總蛋白、白蛋白、球蛋白、尿素氮、高密度脂蛋白、總膽固醇和甘油三酯含量，所有血液指標送往鄭州市第五人民醫(yī)院檢驗科測定。

1.5.3 肝臟中抗氧化指標的測定 稱取1 g左右的肝臟放入9倍生理鹽水中，用高速均漿機以10 000 r/min的速度在冰水中勻漿，然后在2 500 r/min轉速下離心10 min，取上清液，用生理鹽水制成10%組織勻漿液，分別測定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量。SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測定， GSH-Px活性采用二硫代二硝基苯甲酸測定，MDA含量采用硫代巴比妥酸法測定。上述各指標具體測定方法均按南京建成研究所試劑盒說明書操作。

1.6 統(tǒng)計分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行方差分析，并采用LSD法進行多重比較。數(shù)據(jù)表示為平均數(shù)±標準差。

2 結果與分析

2.1 刺梨提取物對小鼠免疫器官指數(shù)的影響 表1結果表明，試驗2組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著高于對照組(P<0.05)，試驗1組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)也高于對照組(P>0.05)。這表明刺梨提取物對小鼠免疫器官指數(shù)的影響可能具有劑量效應。

表1 刺梨提取物對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

2.2 刺梨提取物對小鼠血液指標的影響 由表2可見，試驗2組的總蛋白、球蛋白、總膽固醇含量顯著高于對照組和試驗1組(P<0.05)，甘油三酯含量顯著低于對照組(P<0.05)。而血清中白蛋白、尿素氮和葡萄糖3組間無顯著差異(P>0.05)。

表2 刺梨提取物對小鼠血液指標的影響

2.3 刺梨提取物對小鼠抗氧化功能的影響 表3結果表明，肝臟中SOD活性3組間無顯著差異(P>0.05)。而3組間的GSH-Px活性差異顯著(P<0.05)，試驗1組和試驗2組MDA含量均顯著低于對照組(P<0.05)。

表3 刺梨提取物對小鼠抗氧化功能的的影響

3 討論

3.1 刺梨提取物對小鼠免疫器官指數(shù)的影響 脾臟和胸腺是動物重要免疫器官，脾臟是其最大的免疫器官，內(nèi)含大量的T和B淋巴細胞，在細胞免疫和體液免疫中非常重要；胸腺是重要的中樞免疫器官，具有誘導淋巴細胞增殖分化為免疫活性細胞的功能，是T細胞分化成熟的場所，因而二者均能反映機體免疫功能的狀態(tài)[8]。本試驗結果表明，給小鼠灌注0.6 mL的刺梨提取物可顯著提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，因而提高了其免疫功能。張曉芬等[7]給小鼠灌喂5日刺梨汁后(0.5 mL/d/只), 小鼠脾細胞NK活性以及IL-2、TNF-β水平顯著增強，表明提高了小鼠細胞免疫功能。植物提取物的免疫調(diào)節(jié)作用是多方面的，多糖、多酚類、黃酮類、精油和有機酸等活性物質(zhì)均可提高機體免疫力[9]，刺梨中的多糖可通過增加免疫器官的重量，增強免疫細胞的活性來發(fā)揮免疫增強的作用[10]。本試驗沒有檢測刺梨提取物中刺梨多糖含量，但檢測了黃酮和多酚的含量，刺梨提取物中活性成分含量復雜，因而對機體免疫功能的影響還需進一步研究。

3.2 刺梨提取物對小鼠血液指標的影響 血清總蛋白分為白蛋白和球蛋白，是反映動物機體營養(yǎng)水平、蛋白質(zhì)的吸收和代謝狀況以及機體免疫水平的重要指標，血清球蛋白與機體免疫功能息息相關，可反映機體的抵抗力[11]。本試驗結果表明，給小鼠灌服0.6 mL刺梨提取物顯著提高了血清中總蛋白和球蛋白含量，而白蛋白差異不顯著，說明總蛋白的增加主要是由于球蛋白的增加所致。這表明提高了機體的免疫功能。本試驗各組之間血清尿素氮含量無顯著影響，說明刺梨提取物對機體蛋白質(zhì)分解代謝影響不顯著。本試驗結果還表明，試驗各組間血糖無顯著變化，這與張曉玲研究結果較為一致，張曉玲[12]給大鼠灌胃4周的100 mg/kg RRT，發(fā)現(xiàn)血糖無顯著變化，表明刺梨提取物對機體血糖含量無顯著影響。

戴堯天等[13]給鵪鶉飼喂4周的刺梨汁，發(fā)現(xiàn)可顯著提高血漿TC水平，血漿TG水平也有增加的趨勢，說明刺梨提取物可影響機體血脂含量，其課題組論述刺梨對血脂含量的調(diào)控可能基于其富含黃酮類(60 mg/ g)活性物質(zhì)。張曉玲[12]檢測分析了刺梨中黃酮類成分及其含量，但發(fā)現(xiàn)灌胃100 mg/kg RRT 4周后正常大鼠的血清甘油三酯極顯著降低，本試驗結果表明，刺梨提取物可顯著提高小鼠肝臟中總膽固醇而顯著降低甘油三酯含量，造成這些結果不太一致的原因可能是動物種類、添加劑量以及試驗時間不同所致，李夢云[6]在鵝體身上的試驗就發(fā)現(xiàn),刺梨提取物對總膽固醇和甘油三酯含量無顯著影響(P>0.05)，但顯著提高血清高密度脂蛋白含量，刺梨提取物對血脂含量的影響還有待于進一步研究。

3.3 刺梨提取物對小鼠抗氧化功能的影響 鄭波等[14]最新有關小鼠的研究表明，刺梨汁可提高小鼠胃液中SOD活性，降低MDA含量，從而抑制脂質(zhì)過氧化反應，保護胃黏膜組織免受傷害。梁欣妍等[15]也發(fā)現(xiàn)超微粉碎的刺梨果渣可極顯著提高糖尿病小鼠肝臟T-AOC、SOD活性，并降低MDA(P<0.01)含量。因而有效改善機體抗氧化能力，改善發(fā)病癥狀。刺梨提取物具有較好的抗氧化特性的原因可能在于其還有的豐富的抗氧化成分如維生素C、多酚類、糖類等大量活性物質(zhì)[16]。植物中含有的多酚類化合物能發(fā)揮抗氧化作用的機理在于它們所具有的酚基官能團具有氧化還原特性，可以作為還原劑、供氫體來淬滅單氧自由基，通過增強機體抗氧化酶活性來增強機體抗氧化能力，緩解氧化應激[17]。楊江濤[18]發(fā)現(xiàn)從刺梨中分離出的粗多糖RRTP及RRTP-1 具有清除自由基的作用，提高衰老小鼠體內(nèi)抗氧化能力。張曉玲的研究[12]也表明，小鼠日糧中添加100 mg/kg的RRT能極顯著提高血清GSH活性，顯著和極顯著降低血清及肝臟MDA含量。

4 結論

本試驗結果表明，刺梨提取物可顯著提高小鼠的免疫功能和抗氧化功能，并影響體內(nèi)脂質(zhì)代謝，且0.6 mL的灌注量效果優(yōu)于0.4 mL的灌注量。