N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 在甲狀腺癌中的表達(dá)及其意義研究

逵艷，陳潤(rùn)東

(南陽(yáng)市中心醫(yī)院肝膽普外科，河南 南陽(yáng)473000)

甲狀腺癌屬于臨床上最為常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，其往往以頸前無(wú)癥狀性腫塊或結(jié)節(jié)為主要臨床表現(xiàn)，部分患者存在頸部壓迫感、持久性咳嗽、呼吸困難或吞咽困難，少數(shù)病情嚴(yán)重患者則伴有不同程度的聲音變化、聲帶癱瘓、進(jìn)水嗆咳、咯血、腫塊快速增大、單側(cè)或雙側(cè)頸淋巴結(jié)腫大以及疼痛等相關(guān)臨床癥狀。大量臨床研究表明，甲狀腺癌廣泛分布于各個(gè)年齡段，并以?xún)和?0歲以下女性最為多見(jiàn)，腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程較為緩慢和局限，故進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)甲狀腺癌的早期診斷和治療意義重大而深遠(yuǎn)[1]。臨床研究顯示，預(yù)計(jì)到2019年，甲狀腺癌在美國(guó)將躍居女性癌癥的第三位，由此所產(chǎn)生的醫(yī)療支出將高達(dá)200億美金之巨，不論是對(duì)患者本人，還是對(duì)整個(gè)家庭甚至全社會(huì)都會(huì)造成沉重的經(jīng)濟(jì)壓力和負(fù)擔(dān)[2]。已有臨床研究證實(shí)，神經(jīng)型鈣粘附蛋白（N-cadherin）、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MT1-MMP）、解聚素-金屬蛋白酶 17（ADAM17）在多種癌癥的臨床診療過(guò)程中具有重要參考價(jià)值[3-5]。因此，本研究以2016年1月-2017年12月期間我院所收治的甲狀腺癌患者作為臨床研究對(duì)象，并就 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17在甲狀腺癌患者體內(nèi)的表達(dá)變化意義予以深入細(xì)致的研究和分析，現(xiàn)將臨床研究過(guò)程和結(jié)果報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2016年1月-2017年12月期間醫(yī)院行手術(shù)治療的103例甲狀腺癌患者術(shù)后甲狀腺癌組織標(biāo)本為觀(guān)察組，所有患者經(jīng)病理確診，其中男性71例，女性32例；年齡均處于22～68歲，病程均處于1個(gè)月～4年。另選取同期在我院行活檢的65例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫病灶旁正常甲狀腺組織標(biāo)本為對(duì)照組，所有患者經(jīng)病理證實(shí)無(wú)腫瘤細(xì)胞存在，其中男性44例，女性21例；年齡均處于23～69歲，病程均處于2個(gè)月～4年。兩組患者均自愿參與研究，并簽署知情同意書(shū)，且在性別、年齡及病程等一般資料方面比較，其差別均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），具有組間可比性，見(jiàn)表1。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人N-cadherin單克隆抗體、鼠抗人MT1-MMP單克隆抗體、鼠抗人ADAM17單克隆抗體、SP免疫組化相關(guān)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

表1 觀(guān)察組與對(duì)照組兩組患者一般資料

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組織化學(xué)技術(shù)En Vision 兩 步 法 分 別 檢 測(cè) N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的表達(dá)并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行判定分析。實(shí)驗(yàn)步驟：組織切片烤片，脫蠟、水化。抗原修復(fù)，滴加一抗工作液，滴加二抗。DAB顯色劑顯色，復(fù)燃，脫水，中性快干膠封片。采用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定 采用盲法顯微鏡下閱片，N-cadherin陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色顆粒，MT1-MMP陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)呈淺黃色直至棕褐色顆粒，MT1-MMP陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色顆粒。每張切片觀(guān)察10個(gè)200倍視野，綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行判定。N-cadherin陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞率＜5%為0分，5%～24%為1分，25%～50%為 2分，＞50%為 3分；N-cadherin染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；上述兩項(xiàng)評(píng)分相加則為最終評(píng)分結(jié)果：0～2分判為陰性，≥3分判為陽(yáng)性。MT1-MMP陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞率＜5%為 0分，5%～24%為 1分，25%～50%為2分，＞50%為3分；MT1-MMP染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；上述兩項(xiàng)評(píng)分相加則為最終評(píng)分結(jié)果：0～2分判為陰性，≥3分判為陽(yáng)性。ADAM17陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞率＜30%為1分，30%～70%為2分，＞70%為3分；ADAM17染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；上述兩項(xiàng)評(píng)分相加則為最終評(píng)分結(jié)果：0～2分判為陰性，≥3分判為陽(yáng)性。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 分別對(duì)觀(guān)察組和對(duì)照組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達(dá)情況，N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達(dá)與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行比較和分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用“Mean±SD”表示，兩組獨(dú)立，正態(tài)，方差齊資料組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分比表示，樣本率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀(guān)察組和對(duì)照組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達(dá)情況 觀(guān)察組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表 2。

2.2 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達(dá)與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 TNM分期中Ⅲ～Ⅳ期患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。浸潤(rùn)深度中浸及漿膜患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于未及漿膜，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。分化程度為低分化患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于中、高分化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于未發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率，明顯高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表 3。

3 討論

據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，目前全球甲狀腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)迅猛增長(zhǎng)的上升態(tài)勢(shì)[6]。臨床上根據(jù)病理類(lèi)型將甲狀腺癌分為乳頭狀癌、濾泡狀癌、髓樣癌、未分化癌，而其中又以甲狀腺乳頭狀癌最為常見(jiàn)，約占整個(gè)甲狀腺癌患病群體的85%。據(jù)文獻(xiàn)研究資料報(bào)道，雖然甲狀腺乳頭狀癌生長(zhǎng)緩慢，惡性程度低，預(yù)后較其他類(lèi)型腫瘤良好，但仍存在淋巴轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的臨床特征，從而使患者的生存時(shí)間和生活質(zhì)量受到極大的影響[7]。近年來(lái)，隨著對(duì)甲狀腺癌臨床研究的不斷深入，其相關(guān)癌基因的研究也隨之受到重視。因此，積極探尋更具代表性的腫瘤標(biāo)志物對(duì)于甲狀腺癌的臨床診治及判斷預(yù)后均具有十分重要的意義。

表2 觀(guān)察組和對(duì)照組患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達(dá)情況

表3 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達(dá)與甲狀腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系

N-cadherin作為一種介導(dǎo)細(xì)胞間黏附、遷移作用的Ca2+依賴(lài)性跨膜蛋白，其往往以參與細(xì)胞黏附、細(xì)胞凋亡、增殖和遷移、識(shí)別和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制為主要功能，并且與腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)增強(qiáng)和轉(zhuǎn)移之間存在密切關(guān)系[8]。已有研究證實(shí)，N-cadherin的異常表達(dá)則會(huì)增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能力，從而促進(jìn)細(xì)胞間的相互作用，進(jìn)而在腫瘤的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用[9]。臨床研究表明，腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移往往需要蛋白水解酶的參與，而其中尤以基質(zhì)金屬蛋白酶家族最具代表性[10]。MT1-MMP是膜型基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要成員，其能夠通過(guò)將多種細(xì)胞外基質(zhì)成分降解、促進(jìn)新生血管生成等機(jī)制來(lái)影響腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、遷移、凋亡等過(guò)程，也被認(rèn)為是膜型基質(zhì)金屬蛋白酶中與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的酶類(lèi)之一[11]。解聚素-金屬蛋白酶家族是一類(lèi)錨定于細(xì)胞膜表面的蛋白家族，在蛋白水解、生物活性因子釋放、細(xì)胞黏附、融合、遷移及信號(hào)傳遞等過(guò)程中均發(fā)揮著十分重要的作用[12]。ADAM17則是解聚素-金屬蛋白酶家族中的主要成員之一，廣泛表達(dá)于多種類(lèi)型的細(xì)胞之中[13]。大量臨床研究發(fā)現(xiàn)，ADAM17在人類(lèi)多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，充分反映了腫瘤的惡性程度，并促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲過(guò)程[14]。

本研究通過(guò)對(duì)甲狀腺癌患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達(dá)情況的觀(guān)察后發(fā)現(xiàn)，其甲狀腺癌組織 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于病灶旁正常甲狀腺組織，這與楊香山等的研究報(bào)道相一致[15]，表明N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽(yáng)性表達(dá)率在甲狀腺癌組織中均處于較高水平，從而為甲狀腺癌的臨床診斷和鑒別提供重要的參考依據(jù)。本研究通過(guò)對(duì) N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達(dá)與甲狀腺癌TNM分期關(guān)系的研究后發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，這與陶文雅等的臨床研究相符合[16]，說(shuō)明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽(yáng)性表達(dá)率在Ⅲ～Ⅳ期患者中的水平相對(duì)較高，有助于對(duì)甲狀腺癌患者進(jìn)行準(zhǔn)確的TNM分期。本研究通過(guò)對(duì) N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達(dá)與甲狀腺癌浸潤(rùn)深度關(guān)系的分析后發(fā)現(xiàn)，浸及漿膜患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于未及漿膜患者，這與李晨浩等的研究報(bào)道相一致[17]， 可見(jiàn) N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率在浸及漿膜患者中始終呈現(xiàn)高水平，從而為判斷甲狀腺癌患者的浸潤(rùn)深度發(fā)揮積極的臨床指導(dǎo)價(jià)值。本研究通過(guò)對(duì)N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達(dá)與甲狀腺癌分化程度關(guān)系的觀(guān)察后發(fā)現(xiàn)，低分化患者N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于中、高分化患者，這與唐甜的臨床研究相符合[18]，表明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率在低分化患者中處于高水平，能夠?qū)谞钕侔┗颊叩姆只潭茸龀龈鼮榫珳?zhǔn)的判斷。本研究通過(guò)對(duì) N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17表達(dá)與甲狀腺癌肝臟轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究后發(fā)現(xiàn)，發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于未發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移患者，這與呼鐵民等的研究報(bào)道相一致[19]，說(shuō)明 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率在發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移患者中表現(xiàn)出較高水平，從而為判斷甲狀腺癌患者是否發(fā)生肝臟轉(zhuǎn)移而提供參考。本研究通過(guò)對(duì)N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 表達(dá)與甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的分析后發(fā)現(xiàn)，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者 N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17 的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，這與師勇的臨床研究相符合[20]，可見(jiàn) N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)率在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的水平相對(duì)較高，也有助于準(zhǔn)確判斷甲狀腺癌患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

綜 上 所 述 ，N-cadherin、MT1-MMP、ADAM17在甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，同時(shí)對(duì)于判斷病情和預(yù)后亦具有十分重要的參考價(jià)值。