乙型肝炎肝硬化病人RPR與相關(guān)因子檢測及意義

[摘要]目的 探討乙型肝炎（乙肝）肝硬化病人紅細(xì)胞寬度與血小板計(jì)數(shù)比值（RPR）、血清P選擇素（sP-selectin）、細(xì)胞間黏附分子-1（sICAM-1）、叉狀頭螺旋回轉(zhuǎn)錄因子（Foxp3）水平的變化及其意義。方法 選取慢性乙肝肝硬化病人137例（肝硬化組）、慢性乙肝病人60例（對(duì)照組），檢測兩組病人RPR、sP-selectin、sICAM-1、Foxp3水平，并按照肝硬化病人的腹水程度進(jìn)行分組分析。結(jié)果 肝硬化組RPR、sP-selectin和sICAM-1水平均顯著高于對(duì)照組，差異有顯著性（t=8.151～13.444，Plt;0.05）。肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞高于對(duì)照組（t=6.186，Plt;0.05），CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+T細(xì)胞顯著低于對(duì)照組（t=-7.348、-7.266，Plt;0.05）。少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化組RPR、sP-selectin、sICAM-1水平逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.587～29.604，Plt;0.05）。少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化病人CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞、CD3+CD4+CD8+ T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+ T細(xì)胞組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.574～18.405，Plt;0.05）。失代償期肝硬化病人RPR、sP-selectin和sICAM-1水平均高于代償期肝硬化組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-6.084～-3.574，Plt;0.05）。失代償期肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞高于代償期病人（t=-6.084，Plt;0.05），CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+ T細(xì)胞顯著低于代償期肝硬化組（t=-3.574、-5.442，Plt;0.05）。結(jié)論 乙肝肝硬化病人RPR、sP-selectin、sICAM-1水平及CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞顯著升高，并且與腹水程度有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]肝硬化;乙型肝炎;P選擇素;細(xì)胞間黏附分子-1;叉狀頭螺旋回轉(zhuǎn)錄因子

[中圖分類號(hào)]R575.2

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)] 2096-5532（2019）05-0544-04

doi：10.11712/jms201905010

[開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）]

近年來，乙型肝炎（乙肝）肝硬化或者終末期肝衰竭的發(fā)生率逐漸升高，流行病學(xué)研究結(jié)果證實(shí)，乙肝肝硬化的發(fā)病率可達(dá)（262～454）/10萬[1]。臨床上乙肝肝硬化的發(fā)生能夠增加病人多器官功能衰竭的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致病死率持續(xù)性上升[2]。趨化因子、炎癥因子或者免疫調(diào)控因子等均能夠?qū)е赂闻K上皮細(xì)胞的損傷，增加間質(zhì)細(xì)胞成分的纖維化等，進(jìn)而促進(jìn)乙肝肝硬化的病情進(jìn)展。紅細(xì)胞寬度與血小板計(jì)數(shù)比值（RPR）的檢測較為方便，部分研究認(rèn)為RPR值能夠評(píng)估肝硬化病人的病情變化;血清P選擇素（sP-selectin）、細(xì)胞間黏附分子-1（sICAM-1）能夠通過激活趨化因子的黏附能力，提高下游炎癥因子及炎癥細(xì)胞的浸潤能力，增加其對(duì)肝小葉上皮細(xì)胞的促凋亡作用[3];叉狀頭螺旋回轉(zhuǎn)錄因子（Foxp3）是T淋巴細(xì)胞的重要調(diào)控因子，能夠通過抑制下游CD3+、CD4+、CD25+ T淋巴細(xì)胞的活性，降低病毒顆粒的清除作用，導(dǎo)致病情的持續(xù)性進(jìn)展[4]。

上述指標(biāo)的改變能夠通過影響抗原提呈細(xì)胞的活性，最終影響到T淋巴細(xì)胞的免疫功能。本文探討乙肝肝硬化病人RPR、sP-selectin、sICAM-1、Foxp3的變化及其意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2015年1月—2017年1月確診的慢性乙肝肝硬化病人137例（肝硬化組），慢性乙肝病人60例（對(duì)照組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①乙肝、乙肝肝硬化的診斷參考中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[5];②肝硬化的診斷依據(jù)超聲、CT檢查結(jié)果;③病人年齡19～79歲;④獲得病人的知情同意、醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝臟腫瘤;②其他類型的病毒性肝炎;③乙醇性肝硬化、藥物性肝硬化;④精神疾病、認(rèn)知功能障礙;⑤伴有腎功能疾病、心力衰竭、肺功能疾病;⑥伴有免疫系統(tǒng)疾病、結(jié)核疾病。肝硬化組少量腹水（局限于肝腎間隙、腸間隙或盆腔，前后徑2～3 cm）36例，中量腹水（分布于中、下腹部，最深處約5 cm，腸管漂浮于液性暗區(qū)中，可見腸蠕動(dòng)）62例，大量腹水（液性暗區(qū)分布于全部腹腔，最深處前后徑8～10 cm）39例;失代償期肝硬化104例，代償期肝硬化病人33例。肝硬化組和對(duì)照組年齡、性別、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。見表1。

1.2 檢測指標(biāo)及方法

應(yīng)用MAGLUMI全自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑檢測紅細(xì)胞寬度及血小板計(jì)數(shù)，并計(jì)算RPR;采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測sP-selectin、sICAM-1，檢測儀器為美國Bio-Bad全自動(dòng)酶標(biāo)儀，試劑盒購自南京建成生物工程研究所;采用流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞亞群;以CD3、CD4、CD8、CD25流式抗體進(jìn)行T淋巴細(xì)胞標(biāo)記，采用流式細(xì)胞儀雙標(biāo)及三標(biāo)法進(jìn)行CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞、CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+T細(xì)胞檢測。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料結(jié)果以[AKx-D]±s形式表示，數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析;計(jì)數(shù)資料結(jié)果比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 肝硬化組和對(duì)照組血清RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平比較

肝硬化組RPR、sP-selectin和sICAM-1水平均顯著高于對(duì)照組，差異有顯著性（t=8.151～13.444，Plt;0.05）。見表2。

2.2 肝硬化組和對(duì)照組外周血T細(xì)胞及其亞群的比較

肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞高于對(duì)照組（t=6.186，Plt;0.05），CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+T細(xì)胞顯著低于對(duì)照組（t=-7.348、-7.266，Plt;0.05）。見表3。

2.3 不同腹水量肝硬化組RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平比較

少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化組RPR、sP-selectin、sICAM-1水平逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.587～29.604，Plt;0.05）。見表4。

2.4 不同腹水量肝硬化病人外周血T細(xì)胞亞群的比較

少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化病人CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞、CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+T細(xì)胞組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.574～18.405，Plt;0.05）。見表5。

2.5 失代償期與代償期肝硬化病人RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平比較

失代償期肝硬化病人血清RPR、sP-selectin以及sICAM-1水平均高于代償期病人，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-6.084 ～-3.574，Plt;0.05）。見表6。

2.6 失代償期與代償期肝硬化病人外周血T細(xì)胞亞群比較

失代償期肝硬化組CD4+CD25+Foxp3+ T細(xì)胞高于代償期病人（t=-6.084，Plt;0.05），CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞以及CD3+CD8+CD25+T細(xì)胞顯著低于代償期病人（t=-3.574、-5.442，Plt;0.05）。見表7。

3 討論

乙肝肝硬化的發(fā)生主要與長期的乙肝病毒感染導(dǎo)致的上皮細(xì)胞損傷和間質(zhì)成分的再生有關(guān)，在上皮細(xì)胞損傷基礎(chǔ)上，間質(zhì)成分出現(xiàn)纖維化等病理改變，增加肝臟小葉結(jié)構(gòu)重塑的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致假小葉結(jié)構(gòu)的形成。特別是在合并有慢性基礎(chǔ)性疾病的人群中，乙肝肝硬化病人的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高，終末期肝衰竭的風(fēng)險(xiǎn)也顯著上升[6]。目前，臨床上雖然應(yīng)用抗纖維化藥物、抗病毒藥物等聯(lián)合治療，但乙肝肝硬化病人的病情緩解率仍然無明顯的改善，整體的預(yù)后情況也不佳[7-8]。本文研究著重探討了乙肝肝硬化病人sP-selectin、sICAM-1等指標(biāo)的變化，對(duì)于揭示乙肝肝硬化的病情進(jìn)展機(jī)制、乙肝肝硬化的生物學(xué)治療具有重要意義。

通過檢測紅細(xì)胞寬度及血小板數(shù)量，可以獲得RPR指標(biāo)，RPR在感染性疾病、自身免疫性疾病等疾病病情評(píng)估中發(fā)揮一定的作用，其機(jī)制并不完全清楚，考慮可能與RPR指標(biāo)能夠反映血小板的免疫性損傷或者紅細(xì)胞膜的炎癥性破壞等有關(guān)[9-10]。sP-selectin、sICAM-1是趨化誘導(dǎo)相關(guān)因子，二者不僅能夠誘導(dǎo)下游補(bǔ)體成分如C3、C4的激活，同時(shí)還能夠誘導(dǎo)下游中性粒細(xì)胞或者單核細(xì)胞的激活，增加炎癥細(xì)胞對(duì)于肝臟上皮組織的浸潤深度，導(dǎo)致間質(zhì)成分代償性增生和纖維化[11];Foxp3是T淋巴細(xì)胞調(diào)控因子，能夠通過對(duì)其下游CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的調(diào)控作用，降低CD3+等T淋巴細(xì)胞激活對(duì)于病毒的清除作用[12-13]。

本文研究結(jié)果顯示，肝硬化病人血清中RPR、sP-selectin、sICAM-1水平均明顯升高，提示三者均能夠影響肝硬化的發(fā)生和病情的進(jìn)展。薈萃分析國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，認(rèn)為其主要與下列幾方面的因素有關(guān)：①RPR上升能夠加劇血小板免疫性損傷的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致凝血功能的紊亂;②sP-selectin、sICAM-1水平上升能夠誘導(dǎo)下游IL-6或者腫瘤壞死因子活化，促進(jìn)其對(duì)肝臟小葉上皮細(xì)胞膜的損傷，導(dǎo)致線粒體功能異常、ATP利用障礙，并且增加了間質(zhì)成分膠原纖維再生的風(fēng)險(xiǎn)。王烈等[11]通過對(duì)72例肝硬化病人的血清學(xué)資料分析結(jié)果提示，肝硬化病人血清sICAM-1水平平均升高25%以上，同時(shí)在肝硬化較為明顯、肝功能惡化較為嚴(yán)重的病人sICAM-1水平進(jìn)一步升高。有研究顯示，肝硬化病人CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞明顯升高，抑制下游的CD3+CD4+CD8+T細(xì)胞及CD3+CD8+CD25+T淋巴細(xì)胞的活性，導(dǎo)致其表達(dá)數(shù)量的下降[12]。本文研究結(jié)果與其一致，提示Foxp3+T細(xì)胞在調(diào)控肝硬化免疫性損傷過程中發(fā)揮作用，F(xiàn)oxp3+T細(xì)胞升高降低了下游T淋巴細(xì)胞對(duì)乙肝病毒的清除能力，導(dǎo)致乙肝病毒顆粒對(duì)肝小葉上皮細(xì)胞的整合作用明顯增強(qiáng)[14]。本文結(jié)果還顯示，少量腹水、中等量腹水及大量腹水肝硬化病人的RPR、sP-selectin、sICAM-1水平逐漸升高，提示血清學(xué)因子的表達(dá)與腹水的形成可能具有一定的關(guān)系，sP-selectin、sICAM-1等水平升高能夠加劇肝臟纖維化程度，導(dǎo)致肝臟門靜脈高壓進(jìn)一步形成，從而促進(jìn)了腹水的形成，但具體的機(jī)制仍然需要進(jìn)一步探討。本文結(jié)果還顯示，腹水嚴(yán)重的肝硬化病人Foxp3表達(dá)升高，而下游CD3+、CD4+T等淋巴細(xì)胞水平降低，F(xiàn)oxp3誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞免疫功能紊亂，能夠顯著促進(jìn)肝硬化病人病情的進(jìn)展。

綜上所述，乙肝肝硬化病人RPR、sP-selectin、sICAM-1水平及CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞顯著升高，并且與腹水增加有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]XIE Yangxin， TU Bo， XU Zhe， et al. Bacterial distributions and prognosis of bloodstream infections in patients with liver cirrhosis[J]. Scientific Reports， 2017，7（1）：11482.

[2]FENG Lingmei， LEI Shuyuan， ZENG Xin， et al. The evaluation of non-invasive multi-slice spiral computed tomography-based indices for the diagnosis and prognosis prediction of liver cirrhosis[J]. Journal of Digestive Diseases， 2017，18（8）：472-479.

[3]龔科，黃漢飛，曾仲. P選擇素和E選擇素在肝缺血再灌注損傷中的作用[J]. 山東醫(yī)藥， 2014，54（25）：105-107.

[4]涂琛，游晶，劉懷鄂，等. 乙型肝炎肝硬化患者輔助性T淋巴細(xì)胞17和調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞及維甲酸相關(guān)核孤兒受體γt和叉狀頭/翅膀狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3 mRNA表達(dá)水平的變化及其臨

[LL]床意義研究[J]. 中國全科醫(yī)學(xué)， 2016，19（18）：2130-2134.

[5]涂傳濤，王吉耀. 肝纖維化的細(xì)胞分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 中華肝臟病雜志， 2014，22（1）：5-8.

[6]RUIZ-MARGIN A， MACAS-RODRGUEZ R U， DUARTE-ROJO A， et al. Malnutrition assessed through phase angle and its relation to prognosis in patients with compensated liver cirrhosis： a prospective cohort study[J]. Digestive and Liver Disease： Official Journal of the Italian Society of Gast-roenterology and the Italian Association for the Study of the Li-ver， 2015，47（4）：309-314.

[7]IWASA M， HARA N， TERASAKA E， et al. Evaluation and prognosis of sarcopenia using impedance analysis in patients with liver cirrhosis[J]. Hepatology Research， 2014，44（10）：E316-E317.

[8]KARAGIANNAKIS D S， VLACHOGIANNAKOS J， ANASTASIADIS G， et al. Diastolic cardiac dysfunction is a predictor of dismal prognosis in patients with liver cirrhosis[J]. Hepatology International， 2014，8（4）：588-594.

[9]陳炘，周小茜，戴福宏，等. 探究RPR與FOXP3在乙型肝炎肝硬化患者中的表達(dá)變化[J]. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2017，16（14）：1401-1404.

[10]趙麗，連敏，陳勝良，等. 乙型肝炎病毒相關(guān)肝病患者RPR的變化及意義[J]. 肝臟， 2017，22（6）：526-528.

[11]王烈，胡義忠，徐秀亮，等. 血清sP-selectin、sICAM-1和免疫球蛋白檢測對(duì)乙肝肝硬化預(yù)后評(píng)估的意義[J]. 中國免疫學(xué)雜志， 2017，33（11）：1699-1705.

[12]陳晨，蔣道榮，張弦，等. 慢性乙型肝炎患者調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)水平的研究[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志， 2014，24（19）：4714-4716.

[13]許茵，楊小娟，蒯守剛. 原發(fā)性膽汁性肝硬化患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測及其臨床意義[J]. 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2014，18（4）：592-594.

[14]李芹，鄧存良，張建軍，等. 乙型肝炎肝硬化患者HBV復(fù)制對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3 mRNA基因表達(dá)的影響[J]. 瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2016，39（4）：366-368.

（本文編輯 黃建鄉(xiāng)）