不同產(chǎn)地?zé)舯K細(xì)辛藥材中焦袂康酸的限量檢查

1.云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650500；2.云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650011

燈盞細(xì)辛(燈盞花)為菊科植物短葶飛蓬Erigeronbreviscapus(Vant.) Hand.-Mazz.的干燥全草。燈盞細(xì)辛具有活血通絡(luò)止痛、祛風(fēng)散寒的作用、用于中風(fēng)偏癱、胸痹心痛、風(fēng)濕痹痛、頭痛、牙痛[1]。燈盞細(xì)辛(燈盞花)中的焦袂康酸具有降壓、鎮(zhèn)靜的作用[2]，還具有顯著增加腦血管流量，改善腦血循環(huán)，降低腦血管阻力，提高血腦屏障的通透性，增加心肌營(yíng)養(yǎng)回流的作用，同時(shí)具備提高機(jī)體巨噬細(xì)胞免疫功能和較強(qiáng)的抑制內(nèi)凝血等作用[3]。但焦袂康酸具有肝毒性[4-5]，長(zhǎng)期服用可能會(huì)對(duì)患者肝臟有較大的損傷。為了保證本藥材臨床用藥的安全性，本研究建立了用高效液相法測(cè)定燈盞細(xì)辛中焦袂康酸的限量檢查方法。為焦袂康酸的限量檢查提供了更為準(zhǔn)確可靠的方法。

1 儀器與試藥

Waters 2695 液相色譜儀，Waters 2996(PDA)檢測(cè)器；萬(wàn)分之一Sartorius BS224S型電子分析天平(Sartorius公司，美國(guó))；十萬(wàn)分之一 DENVER TB-215D型電子分析天平(DENVER公司，美國(guó))；AS7240A超聲清洗儀(天津奧特賽斯儀器有限公司)。焦袂康酸(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20618，≥98%)。實(shí)驗(yàn)用水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。19批燈盞花藥材均收集于云南省和四川省，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院中藥資源教研室李國(guó)棟副教授鑒定為燈盞花Erigeronbreviscapus(Vant.) Hand-Mazz.見(jiàn)表1。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 取焦袂康酸對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1mL含0.202 8 mg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取本品0.5 g，精密稱(chēng)定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇40 mL，超聲處理(300 W，25 kHz)20 min，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱為JADE-PAK ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)，乙腈―水(5∶95)為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，進(jìn)樣量10 μL。在上述色譜條件下，取對(duì)照品溶液、供試品溶液、進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果如圖1所示。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系的考察 分別精密吸取焦袂康酸對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10、20 μL，按上述色譜條件，測(cè)定焦袂康酸峰面積。分別以焦袂康酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得線(xiàn)性方程為：Y=57 802X-2721.3(r=0.999 9)，表明焦袂康酸在0.202 8～4.056 0 mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。RSD為0.2%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取S1樣品，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果焦袂康酸的含量為20.1 320 mg/g；RSD分別為1.2%，說(shuō)明測(cè)量方法的重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備一份供試溶液，精密吸取10 μL，分別于0、4、8、12和24 h各測(cè)定1次，結(jié)果5次測(cè)定所得的峰面積值的RSD為0.3%。結(jié)果表明，室溫條件下，供試品溶液中的焦袂康酸在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 分別精密稱(chēng)取6份已知含量的樣品S1每份約0.25 g，精密稱(chēng)定。 精密加入1 mL濃度為4.998 mg/mL焦袂康酸對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下的方法制備供試溶液，進(jìn)樣分析，計(jì)算焦袂康酸平均回收率(n=6)為99.60%，RSD為0.8%。表明試驗(yàn)方法準(zhǔn)確度好。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 焦袂康酸加樣回收率測(cè)定結(jié)果 (n=6)

2.8 樣品中焦袂康酸含量測(cè)定 分別稱(chēng)取19批燈盞花藥材，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 含量測(cè)定結(jié)果 (mg/g，n=2)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)提取方法，提取溶劑，提取時(shí)間，檢測(cè)波長(zhǎng)分別進(jìn)行了考察及參照相關(guān)文獻(xiàn)資料中的有焦袂康酸的含量測(cè)定方法[7-9]后進(jìn)行改進(jìn)，最后確定了以乙腈-水(5∶95)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，流速1 mL/min，樣品超聲處理(功率300 W，頻率25 kHz)20 min對(duì)樣品中焦袂康酸的含量進(jìn)行測(cè)定, 試驗(yàn)結(jié)果表明,樣品分離效果好。經(jīng)方法學(xué)考察,本含量測(cè)定方法結(jié)果較好,方法可行。

在《中國(guó)藥典》2015年版一部中僅有燈盞生脈膠囊中對(duì)焦袂康酸進(jìn)行了檢查，但僅為化學(xué)反應(yīng)，不能進(jìn)行定量且專(zhuān)屬性較差，故本研究采用高效液相色譜法進(jìn)行焦袂康酸的限量檢查。結(jié)果表明采用高效液相色譜法進(jìn)行限量檢查更為準(zhǔn)確且靈敏度高。

文獻(xiàn)報(bào)道中[5-6]焦袂康酸被用作小鼠慢性肝炎病理研究的工具藥，在該實(shí)驗(yàn)中小鼠每日攝入量為18.6 mg。目前暫時(shí)缺少該成分對(duì)人體產(chǎn)生傷害的最低限量的報(bào)道，其具體限量要求還需要進(jìn)一步藥理和臨床研究后再要求。