叉唇石斛的化學(xué)成分研究

大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南 大理 671000

叉唇石斛(DendrobiumstuposumLindl)為蘭科(Orchidaceae)石斛屬植物[1]，生于海拔約1800米的山地疏林中樹(shù)干上，主要分布于中國(guó)云南南部至西南部，錫金、不丹、印度東北部、緬甸、泰國(guó)等。石斛為蘭科石斛屬多種藥用植物的總稱(chēng)，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫作用、生津益胃、抗白內(nèi)障、抗腫瘤等功能。石斛屬植物的化學(xué)成分主要有生物堿類(lèi)、菲類(lèi)和聯(lián)芐類(lèi)、多糖類(lèi)成分和其它類(lèi)成分，生物堿為研究最早的一類(lèi)成分, 到目前為止從石斛屬植物中共分得32 種生物堿, 但不同石斛屬植物中含有的生物堿成分有很大不同[2]，為了深入研究石斛屬的化學(xué)成分，本研究對(duì)產(chǎn)自云南保山的叉唇石斛化學(xué)成分進(jìn)行分析。

1 儀器與藥材

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 叉唇石斛全草于2017年5月采自云南保山龍陵縣，原植物由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所劉恩德博士鑒定為叉唇石斛(DendrobiumstuposumLindl)，植物標(biāo)本存放于大理大學(xué)藥化學(xué)院。

1.2 儀器與試劑 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠(chǎng))、SHZ-D (Ⅲ)循環(huán)水式真空泵 (鞏義市予華儀器有限公司)、Bruker-AM-400型核磁共振波譜儀，四甲基硅烷(TMS)為內(nèi)標(biāo)、AS-10200BT超聲波清洗器 (天津奧特恩斯儀器有限公司)、X-4數(shù)字顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀、CP-114電子天平、5 L梨形分液、Sephadex LH-20 (Pharmacia)、薄層色譜硅膠和柱色譜硅膠(青島海洋化工廠(chǎng)產(chǎn)品)。常規(guī)的顯色劑用5%硫酸的乙醇溶液或碘顯色劑，其他試劑均為化學(xué)純或分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離 干燥的叉唇石斛根莖3.5 kg，經(jīng)粉碎后用90%乙醇冷浸提取3次(每次48 h)，提取液合并，減壓濃縮的浸膏514.6 g。粗提物分散于水中，依此用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮后分別得到石油醚部分53 g、乙酸乙酯108.6 g、正丁醇部分88 g。其中乙酸乙酯部分用硅膠柱層析，氯仿-甲醇(25∶1～0∶30)梯度洗脫，用TLC(薄層板層析色譜)進(jìn)行檢測(cè)，合并相同餾分得到6個(gè)餾分，(Fr1～Fr6)。餾分1(Fr.1，38 g)經(jīng)硅膠柱層析(CHCl3-MeOH，體積比40∶1～0∶1)梯度洗脫得到5個(gè)組分(FrA1～FrA5)。FrA3(1 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析分離得到化合物1(30 mg)；FrA5(40 mg)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱層析分離得化合物2(10 mg)。Fr.2(10 g)經(jīng)硅膠柱層析(CHCl3-MeOH，體積比30∶1～0∶1)梯度洗脫得3個(gè)組分(FrB1～FrB3)。FrB1(1 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析分離得到化合物3(15 mg)；FrB2(3 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱層析分離得化合物4(20mg)。Fr.3(10g)經(jīng)硅膠柱層析(CHCl3-MeOH，體積比30∶1～0∶1)梯度洗脫得3個(gè)組分(FrC1～FrC3)。FrC1(1 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析分離得到化合物5(15 mg)；FrC3(1 g)經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析分離的到化合物6(20 mg)。餾分7(Fr.7，15 g)經(jīng)硅膠柱層析(CHCl3-MeOH,體積比30∶1～0∶1)梯度洗脫得6個(gè)組分(FrG1～FrG6)。FrC6(1 g) 經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和Sephadex LH-20凝膠柱層析分離得化合物7(10 mg)。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定 化合物(1)：棕色粉末，分子式C16H14O4，1H-NMR(400 MHz, CD3COCD3)δ：7.9(1H, dd,J=8, 1.3 Hz, H-8)，7.49(1H, t,J=8, 8 Hz, H-7), 7.18(1H, dd,J=8, 1.3 Hz, H-6), 7.06(1H, d,J=2.4 Hz, H-1), 6.99(1H, s, H-10), 6.87(1H, d,J=2.4,H-3), 4.17(3H, s, 5-OCH3), 4.09(3H, s, 4-OCH3)；13C-NMR(100 MHz, CD3COCD3)δ：157.6(C-2), 156.3(C-4), 155.1(C-5), 154.9(C-9), 137.9(C-10a), 129.1(C-8a), 127.1(C-7), 121.0(C-4b), 117.6(C-6), 114.4(C-8), 110.0(C-4a), 106.9(C-1), 102.8(C-10), 100.2(C-3), 58.4(4-OCH3), 56.0(5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[3]，故鑒定為2, 9-二羥基-4, 5-二甲氧基菲。

化合物(2)：棕色粉末，分子式C16H14O4，1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ：7.95(1H, dd,J=1.4, 8.0 Hz, H-8), 7.5(1H, t,J=8 Hz, H-7), 7.24(1H, d,J=1.4, 8.0 Hz, H-6), 6.89(1H, d,J=2.6 Hz，H-1), 6.69(1H, d,J=2.6 Hz，H-3), 6.72(1H, s, H-10), 9.51(1H, s, 5-OH), 5.31(1H, s, 2-OH)，4.06(3H, s, 4-OCH3), 4.04(3H, s, 9-OCH3)；13C-NMR(100 MHz, CD3COCD3)δ：155.5(C-4), 154.7(C-9), 153.9(C-2), 153.8(C-5), 137.6(C-10a), 128.6(C-8a), 127.0(C-7), 120.0(C-4b), 117.5(C-6), 114.2(C-8), 110.6(C-4a), 106.4(C-1), 101.6(C-10), 99.4(C-3), 58.4(3-OCH3), 55.7(1-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[4]，故鑒定為2, 5-二羥基-4, 9-二甲氧基菲。

化合物(3)：黃色油狀物，分子式C17H11O5，1H-NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ：6.83(1H, d,J=8 Hz, H-5′), 6.67(1H, d,J=1.9 Hz, H-2′), 6.55(1H, dd,J=8，1.9 Hz, H-6′), 6.25(1H, s, H-2), 6.21(1H, s, H-6), 3.69(3H, s, H-3′), 3.62(6H, s, H-3.5)；13C-NMR(100 MHz，Methanol-d4)δ：161.9(C-4′), 159.0(C-3′), 148.3(C-5), 145.5(C-3), 145.1(C-4), 134.6(C-1′), 134.6(C-1), 121.7(C-6′), 115.8(C-5′), 113.1(C-2′), 109.1(C-2), 106.6(C-6), 39.2(C-β), 38.1(C-a)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[3]，故鑒定為4, 4′-二羥基-3, 5, 3′-三甲氧基聯(lián)芐。

化合物(4)：黃色油狀物，分子式C10H10O3，1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ： 9.65(1H, d,J=7.8 Hz, -CHO), 7.4(1H, d,J=15.8 Hz, H-7), 7.13(1H, dd,J=8.2, 1.9 Hz，H-4), 7.07(1H, d,J=1.9 Hz, H-3), 6.6(1H, dd,J=15.9, 7.6 Hz, H-8), 6.0(1H, d,J=8.2 Hz, H-6)；13C-NMR(100 MHz, CD3OD)δ：193.8(C-9), 153.2(C-7), 149.0(C-1), 147.0(C-2), 126.6(C-4), 123.9(C-5), 115.0(C-6)，56.6(-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[5]，故鑒定為松柏醛。

化合物(5)：黃色粉末，分子式C16H12O4，1H-NMR(400 MHz，Methanol-d4)δ：7.21(1H, d,J=8.4 Hz, H-1), 7.07(1H, d,J=8.2 Hz, H-7), 6.42(1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-2), 6.36(1H, dd,J=10.4, 3.0 Hz, H-8), 6.30(1H, d,J=2.0Hz, H-10), 6.24(1H, d,J=2.4 Hz, H-4), 5.36(1H, d,J=6.4 Hz, H-11a),4.5(3H, s, -OCH3)，4.12(2H, dd,J=10.4, 3.0 Hz, H-6), 3.41(1H, t,J=10.4 Hz, H-6a), 3.37(1H, m)；13C-NMR(100 MHz, Methanol-d4)δ：162.5(C-9), 162.0(C-10a), 160.1(C-3)，158.0(C-4a), 133.2(C-1),125.9(C-7),120.8(C-6b),112.8(C-11b),110.7(C-2), 107.2(C-8), 104.1(C-4), 97.5(C-10), 80.0(C-11a), 67.5(C-6), 55.9(-OCH3), 40.8(C-6a) 。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[6]，故鑒定為(6aR, 11aR)- medicarpin。

化合物(6)：黃色晶體，分子式C15H12O4，1H-NMR(400 MHz, Methanol-d4)δ：7.6(3H, m, H-6, H-а), 6.79(2H, d,J=8.6 Hz, H-3, H-5), 6.36(1H, dd,J=8.4, 2.4 Hz, H-5′), 6.23(1H, d,J=2.4 Hz, H-3′)；13C-NMR(100 MHz, Methanol-d4)δ：166.1(C-2), 166.1(C-4′), 165.0(C-3), 160.2(C-4), 144.2(C-β), 132.0(C-6′), 130.4(C-6), 126.4(C-1), 116.9(C-2′), 116.9(C-5′), 107.7(C-3)，102.4(C-5′), 192.1(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[7]，故鑒定為異甘草素。

化合物(7)：白色粉末，分子式C12H22O11，TLC紫外燈(254 nm)下無(wú)熒光，噴5%磷鉬酸溶液顯藍(lán)色，與對(duì)照品蔗糖共薄層色譜，Rf值斑點(diǎn)顏色一致，相互混合熔點(diǎn)不下降。13C-NMR(100 MHz, Methanol-d4)δ：103.59(C-2′), 92.1(C-1)，81.3(C-5′), 76.3(C-3), 76.3(C-3′), 73.89(C-5), 72.5(C-2), 71.0(C-4), 69.1(C-4′), 62.3(C-6′), 60.0(C-1′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照基本一致[8]，故鑒定為蔗糖。

3 討論

本研究對(duì)叉唇石斛的化學(xué)成分進(jìn)行分析，從乙酸乙酯部位分離鑒定出7個(gè)化合物，包括菲類(lèi)、聯(lián)芐類(lèi)、黃酮類(lèi)和簡(jiǎn)單的芳香族化合物。石斛屬及其親緣植物中化學(xué)成分有菲類(lèi)及其衍生物、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、苷糖及糖類(lèi)等，其中菲類(lèi)和聯(lián)芐類(lèi)化合物占了很大比例[9]，從蘭科植物中石豆蘭屬中分離到大量的菲、二氫菲、聯(lián)芐和苯丙素類(lèi)化合物[10]，從毛蘭屬研究所涉及的5個(gè)種類(lèi)中分離得到的化學(xué)成分以菲類(lèi)和聯(lián)芐為主[11]。菲類(lèi)和聯(lián)芐類(lèi)是近年來(lái)在石斛屬及其近緣屬等植物中發(fā)現(xiàn)的具有重要生物活性的成分，菲類(lèi)化合物是蘭科植物中的主要成分，具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗癌活性及細(xì)胞毒性、抗氧化、抗血小板凝集、抗炎、抗菌、抗過(guò)敏、抗高血壓[12]。聯(lián)芐類(lèi)化合物能通過(guò)清除體內(nèi)自由基、抑制NO的過(guò)度釋放和抑制過(guò)高的免疫反應(yīng)等多方面的調(diào)節(jié)作用而對(duì)多種疾病起到預(yù)防治療作用[13]。

綜上，叉唇石斛可能具有抗腫瘤、體外抗血管生成及清除自由基的活性。可以深入研究植物中的菲類(lèi)和聯(lián)苯類(lèi)化學(xué)成分，為其藥理活性提供依據(jù)，充分開(kāi)發(fā)利用石斛屬植物藥用價(jià)值奠定理論基礎(chǔ)。菲類(lèi)和聯(lián)芐化合物結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，容易人工合成并有多樣性，這些化合物在新藥研究中具有重要的理論價(jià)值又有廣闊的應(yīng)用前景。