莫西沙星側(cè)鏈的殘留溶劑測定

聶忠莉，李婉玉，王曉玲，趙玉玲，張 勇，蕭茂玲

(1.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院，四川 成都 610106； 2.成都克萊蒙醫(yī)藥科技有限公司，四川 成都 610041)

0 引 言

鹽酸莫西沙星是由拜耳公司研制的第四代氟喹諾酮類超廣譜抗生素，它保留了第三代抗革蘭陰性菌的活性，其8-甲氧基部分還提高了抗革蘭陽性菌的活性，特別是增加了對厭氧菌的抗菌活性[1]，其對非典型病原菌，如肺炎支原體、衣原體及軍團菌均有顯著療效[2-3].莫西沙星側(cè)鏈?zhǔn)呛铣甥}酸莫西沙星最為關(guān)鍵的起始物料.目前，莫西沙星側(cè)鏈主要的合成工藝路線如圖1所示.

圖1莫西沙星側(cè)鏈合成工藝路線

莫西沙星側(cè)鏈為無色至棕色黏稠液體，其在合成過程中使用了有機溶劑，包括乙酸乙酯、四氫呋喃、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、甲醇及醋酐等.

對此，本研究根據(jù)各有機溶劑性質(zhì)和沸點的不同，參照《中國藥典》2015年版對殘留溶劑的要求，采用氣相色譜法與殘留溶劑測定法[4-5]對莫西沙星側(cè)鏈產(chǎn)品中乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、(4AS，7AS)-八氫-6-(苯甲基)-1H-吡咯并[3,4-B]吡啶(M-11)、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇的殘留情況進行了測定與分析[6].

1 材料與儀器

1.1 材 料

實驗所用材料包括：莫西沙星側(cè)鏈(批號，P075170501、P075170701、P075170801)、(4AS,7AS)-八氫-6-(苯甲基)-1H-吡咯并[3,4-B]吡啶(批號，170501)，購自江蘇宇田醫(yī)藥公司；乙醇(批號，2015051401，HPLC級)購自成都科龍化工試劑廠；乙酸乙酯(批號，20150128，HPLC級)，購自天津科密歐有限公司；甲醇(批號，20160205，HPLC級)，購自百靈威有限公司；N，N-二甲基甲酰胺(批號，141171101，HPLC級)、四氫呋喃(批號，041170201，HPLC級)，購自上海星可高純?nèi)軇┯邢薰?；其余試劑均為分析?

1.2 儀 器

實驗所用儀器包括：7890A型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；BP-210D型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司).

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

實驗的色譜條件為：以6%氰丙基苯基—94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱(DB-624，30 m×0.32 mm×1.8 μm)，柱溫80 ℃，維持5 min后，以8 ℃/min的速率升溫至200 ℃，維持15 min；檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測溫度為270 ℃，進樣口溫度為250 ℃，載氣流速3.0 mL/min，分流比10∶1；直接進樣量為1.0 μL.

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液配制.

精密稱取甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11適量，加乙醇稀釋制成每1 mL中分別約含1.5 mg、2.5 mg、0.36 mg、0.001 mg、0.45 mg、0.44 mg、0.5 mg的混合溶液，作為對照品溶液.

2.2.2 供試品溶液配制.

精密稱取莫西沙星側(cè)鏈—乙醇(1∶1)的溶液，混勻，作為供試品溶液.

2.3 系統(tǒng)適用性實驗

取“2.2.1”項下的對照品溶液1.0 μL，按“2.1”項下的色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄數(shù)據(jù)，結(jié)果見表1～表4.

表1 系統(tǒng)適用性實驗重復(fù)測定6次的峰保留時間

表2 系統(tǒng)適用性實驗重復(fù)測定6次的峰面積統(tǒng)計結(jié)果

由表1～表4可知，在“2.1”項色譜條件下重復(fù)測定6次的峰保留時間、峰面積、分離度、拖尾因子的參數(shù)均能到達驗證要求，表明該條件下的系統(tǒng)適用性良好.

表3 系統(tǒng)適用性實驗重復(fù)測定6次的分離度統(tǒng)計結(jié)果

表4 系統(tǒng)適用性實驗重復(fù)測定6次的拖尾因子統(tǒng)計結(jié)果

2.4 檢測限與定量限

取甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11適量，分別加乙醇溶解并稀釋制成一定濃度的溶液，直接進樣，記錄數(shù)據(jù).計算出：甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的檢測限分別為0.24 ng、0.29 ng、0.55 ng、0.27 ng、0.591 ng、34.00 ng、7.91 ng；定量限分別為0.96 ng、1.02 ng、1.83 ng、0.76 ng、2.12 ng、99.34 ng、38.37 ng.

根據(jù)各成分檢測限結(jié)果發(fā)現(xiàn)，能完全檢測出本品中殘留溶劑的樣品濃度為133 mg/mL.為保證樣品檢測的準(zhǔn)確性，確定樣品濃度為0.5 g/mL.

2.5 線性與范圍

取甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11適量，精密稱定，分別加乙醇溶解并稀釋制成每1 mL約含7.47 mg的甲醇、12.63 mg的乙酸乙酯、1.80 mg的四氫呋喃、0.01 mg的苯、2.25 mg的甲苯、2.20 mg的N,N-二甲基甲酰胺、2.53 mg的M-11的溶液，再分別取上述溶液用乙醇逐級稀釋成適宜濃度的供試品溶液.分別精密量取上述供試品溶液各1.0 μL進樣，記錄數(shù)據(jù)，以各溶劑濃度對峰面積進行線性回歸并計算相關(guān)系數(shù).結(jié)果表明，在0.000 2～12.627 8 mg/mL范圍內(nèi)，甲醇(Y=765.405 3X-10.852 1，R2=0.999 9)、乙酸乙酯(Y=890.075 8X-18.277 3，R2=1.000 0)、四氫呋喃(Y=1 190.200 2X-3.442 7，R2=1.000 0)、苯(Y=2 274.870 5X+0.092 0，R2=0.999 9)、甲苯(Y=2 268.262 7X-9.847 0，R2=1.000 0)、N,N-二甲基甲酰胺(Y=542.953 4X+1.020 1，R2=0.999 9)、M-11(Y=1 310.041 9X-110.123 9，R2=0.998 8)的峰面積與濃度均呈良好的線性關(guān)系.

2.6 回收率實驗

取甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11適量，精密稱定，分別加乙醇溶解并稀釋制成每1 mL約含7.466 75 mg的甲醇、12.627 75 mg的乙酸乙酯、1.804 2 mg的四氫呋喃、0.005 995 mg的苯、2.252 55 mg的甲苯、2.199 7 mg的N,N-二甲基甲酰胺、2.532 25 mg的M-11的混合儲備液.

取莫西沙星側(cè)鏈各約480 mg(0.5 mL的側(cè)鏈)，共10份，精密稱定，取3份分別精密加入上述混合儲備液0.1 mL、乙醇0.4 mL作為50%的供試品溶液；取3份分別精密加入上述混合儲備液0.2 mL、乙醇0.3 mL作為100%的供試品溶液；取3份分別精密加入上述混合儲備液0.3 mL、乙醇0.2 mL作為150%的供試品溶液；剩余1份加入0.5 mL乙醇作為供試樣品溶液.分別取上述供試品溶液、供試樣品溶液、“2.2.1”項下的對照品溶液各1 μL進樣，按外標(biāo)法計算甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11測得量及回收率，結(jié)果如表5所示.實驗表明，各殘留溶劑回收率滿足要求.

表5 殘留溶劑平均回收率

2.7 重復(fù)性實驗

分別取6份莫西沙星側(cè)鏈約480 mg(0.5 mL的側(cè)鏈)，并分別加“2.6”項下的混合儲備液0.2 mL和乙醇0.3 mL，混勻，制得供試品溶液(臨用新配).取供試品溶液、“2.2.1”項下的對照品溶液各1 μL進樣，記錄數(shù)據(jù)，計算出甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11結(jié)果的RSD分別為2.17%、2.12%、2.15%、2.76%、2.16%、1.86%、1.27%.結(jié)果表明，本方法的重復(fù)性好.

2.8 溶液穩(wěn)定性實驗

溶液穩(wěn)定性實驗的條件同“2.1”項下，使用“2.7”項下供試品溶液分別在0 h、1 h、2 h、6 h進樣，記錄數(shù)據(jù)，統(tǒng)計甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的峰面積，結(jié)果如表6所示.

表6 溶液穩(wěn)定性實驗峰面積結(jié)果統(tǒng)計

由表6可知，在6 h內(nèi)連續(xù)進樣，除乙酸乙酯峰面積在逐漸降低外，其他成分峰面積在6 h內(nèi)基本無變化.因此，在測定該樣品時應(yīng)臨用新配.

2.9 耐用性實驗

取莫西沙星側(cè)鏈各約480 mg(0.5 mL的側(cè)鏈)，共8份，精密稱定，分別加入“2.6”項下的混合儲備液0.2 mL和乙醇0.3 mL，作為供試品溶液.分別取上述供試品溶液、“2.2.1”項下的對照品溶液各1 μL進樣，微小改變色譜條件測定，記錄數(shù)據(jù)，按外標(biāo)法計算甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11測得量及回收率，結(jié)果如表7所示.結(jié)果表明，本方法耐用性良好.

表7 耐用性實驗結(jié)果

2.10 樣品測定

分別取3批樣品，按“2.2”項下的方法配制對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件進行檢測，記錄數(shù)據(jù)，按外標(biāo)法計算樣品中甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的殘留量.結(jié)果顯示，P075170501、P075170701、P075170801樣品中的DMF殘留量分別為0.007 9%、0.008 9%、0.002 5%，其他溶劑殘留均未檢出.

3 討 論

實驗結(jié)果顯示，氣相色譜法及殘留溶劑測定法能有效、準(zhǔn)確地測出莫西沙星側(cè)鏈的殘留溶劑.本研究規(guī)定莫西沙星側(cè)鏈中甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、苯、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、M-11的殘留不得大于0.30%、0.50%、0.072%、0.000 2%、0.089%、0.088%、0.05%，符合2015年版《中國藥典》相關(guān)規(guī)定[4].本研究還發(fā)現(xiàn)，莫西沙星側(cè)鏈中可能會殘留M-11，而M-11，在拆分生成側(cè)鏈時會產(chǎn)生甲苯，所以在莫西沙星側(cè)鏈的殘留溶劑實驗中，一并將M-11、甲苯、苯進行研究并控制.此外，由于醋酐通常會在鹽酸莫西沙星的質(zhì)量控制中進行限度設(shè)定，所以本研究在莫西沙星側(cè)鏈實驗中未對醋酐進行限度控制.