BM P4蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及對(duì)其預(yù)后的影響

彭伯堅(jiān) ，盧秀珊，陳杏苑，張險(xiǎn)峰

（1.廣東省廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科，廣東 廣州 510800；2.暨南大學(xué)第一臨床學(xué)院）

食管癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，臨床早期常無明顯表現(xiàn)，以進(jìn)行性吞咽困難為典型癥狀，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已為晚期，多已發(fā)生轉(zhuǎn)移，對(duì)疾病治療和患者預(yù)后造成較大影響［1-2］。我國每年大約有15萬人因食管癌而死亡，其發(fā)病與化學(xué)性因素、生物學(xué)因素及遺傳因素等多種因素相關(guān)，目前臨床治療食管癌的主要方式為手術(shù)治療和放化療［3］。盡管食管癌的診斷和治療技術(shù)都在不斷發(fā)展，但食管癌的早期診斷率仍較低，預(yù)后亦較差，數(shù)據(jù)表明其5年生存率僅為15%～30%［4-5］。因此尋找可預(yù)測食管癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后的分子標(biāo)志物成為研究的中心，有研究發(fā)現(xiàn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）及其通路中下游蛋白Smad1和p-Smad1在食管癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中有著重要作用［6-7］。本研究擬探討B(tài)MP4、Smad1和p-Smad1蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及對(duì)其預(yù)后的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2010年1月至2013年1月于廣州市花都區(qū)人民醫(yī)院住院進(jìn)行治療的50例食管癌患者手術(shù)切除的食管癌組織及相對(duì)應(yīng)食管癌周邊非癌食管組織。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者均進(jìn)行組織病理學(xué)檢查符合相應(yīng)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）入院前均未診斷惡性腫瘤性疾??；（3）無化療和放療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有其他類型或其他器官腫瘤者；（2）伴有其他嚴(yán)重心、肝、腎或神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；（3）對(duì)所用藥物過敏者；（4）處于妊娠或哺乳期患者；（5）患者或家屬不愿配合治療者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬均簽署知情同意書。50例患者中男25例，女25例，年齡55～78歲，平均年齡（65.9±2.4）歲；臨床分期：（Ⅰ+Ⅱ）32例，（Ⅲ＋Ⅳ）18例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。

1.2 免疫組織化學(xué)方法 對(duì)50例食管癌組織、非癌食管組織的新鮮標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，切片染色，采用免疫組化方法檢測BMP4、Smad1與p-Smadl蛋白的表達(dá)。研究所用相應(yīng)兔抗人多克隆抗體均購于美國Abcam公司，二抗及DAB試劑盒來源于北京索萊寶科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo) 測定食管癌組織及非癌食管組織標(biāo)本中BMP4、Smad1及p-Smad1蛋白的表達(dá)量；分析食管癌組織中BMP4蛋白與Samd1及p-Samd1蛋白表達(dá)量的相關(guān)性；分析BMP4、Samd1及p-Samd1蛋白表達(dá)量與食管癌預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果判讀：閱片采用雙盲法由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師進(jìn)行，每張切片隨機(jī)選5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞進(jìn)行觀察評(píng)判。細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞視為BMP4、Samd1及p-Samd1陽性細(xì)胞。積分規(guī)則為：陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，75%以上為4分；其中，≤2分為低表達(dá)，＞2分為高表達(dá)。

1.4 隨訪 對(duì)所有患者進(jìn)行門診及電話等方式的隨訪，時(shí)間最少為5年，最近的為2018年1月，以疾病確診當(dāng)天起算。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用［n（%）］表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)。采用Spearman秩相關(guān)對(duì)不同蛋白表達(dá)量之間進(jìn)行相關(guān)性分析；采用Log-rank檢驗(yàn)分析生存曲線的差異。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BMP4、Samd1及 p-Samd1蛋白在不同組織中的表達(dá)量比較 食管癌組織中BMP4、Samd1及p-Samd1蛋白表達(dá)量顯著高于非癌食管組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1 BMP4、Samd1及p-Samd1蛋白在不同組織中的表達(dá)量比較

2.2 食管癌組織中BMP4蛋白與Samd1及p-Samd1蛋白表達(dá)的相關(guān)性 Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，食管癌組織中BMP4蛋白與Samd1蛋 白 表 達(dá) 無 相 關(guān) 性（r=0.011，P＞0.05）；與 p-Samd1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.491，P＜0.01）。

2.3 BMP4、Samd1及 p-Samd1蛋白表達(dá)量與食管癌預(yù)后的關(guān)系 食管癌患者的5年生存率為48.00%（24∕50）。經(jīng) Log-rank 檢驗(yàn) 分別比較BMP4、Samd1及p-Samd1蛋白高表達(dá)組與低表達(dá)組的生存曲線，顯示BMP4及p-Samd1蛋白的高表達(dá)是食管癌患者預(yù)后不良的因素（P＜0.05），而Samd1蛋白的表達(dá)量與食管癌患者預(yù)后結(jié)局關(guān)系不大（P＞0.05）。見表2。

表2 BMP4、Samd1及p-Samd1蛋白表達(dá)量與食管癌預(yù)后的關(guān)系

3 討論

食管癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，其致死率在全球范圍內(nèi)居惡性腫瘤的第6位［8］。我國屬食管癌的高發(fā)地區(qū)，GLOBOCAN的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示2018年全球新發(fā)食管癌病例有572 034例，患者死于食管癌人數(shù)有508 585例。食管癌的致死率接近其發(fā)病率，這與抗腫瘤藥物治療的失敗密切相關(guān)［8-9］。手術(shù)切除是食管癌主要的治療方法，但是術(shù)后食管癌局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是臨床上面對(duì)的難題。食管癌轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜且有多步驟參與的過程。其中，腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位游離是轉(zhuǎn)移最初始步驟，也是轉(zhuǎn)移發(fā)生的先決條件［10］。因此，如果能阻止這一過程的發(fā)生，將有可能從源頭上控制腫瘤的轉(zhuǎn)移。食管癌是一種上皮源性的腫瘤，細(xì)胞之間存在著廣泛的緊密連接［11］。眾多分子，如E-鈣粘蛋白等在維持上皮性腫瘤特性以及細(xì)胞間連接中發(fā)揮著十分重要的作用［11］。腫瘤細(xì)胞如何打破這種連接方式，從原發(fā)部位游離出來，從而啟動(dòng)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移，其機(jī)制尚不清楚。

TGF-β超家族的成員骨形態(tài)發(fā)生蛋白BMP4是一類主要在脊椎動(dòng)物的發(fā)育中起關(guān)鍵作用的蛋白，包括細(xì)胞分化、遷移、增殖與凋亡等。近年來學(xué)者們研究亦發(fā)現(xiàn)BMP4可誘導(dǎo)某些上皮細(xì)胞源性腫瘤細(xì)胞發(fā)生從而促進(jìn)其轉(zhuǎn)移，如卵巢癌、胰腺癌、胃癌、前列腺癌等。其主要通過以下通路發(fā)揮其作用：BMP4與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，活化并激活下游信號(hào)分子，使Smad1∕5∕8磷酸化，活化的Smad1∕5∕8與Smad4結(jié)合形成復(fù)合體并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)控相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子從而對(duì)機(jī)體進(jìn)行功能調(diào)節(jié)［12-13］。

本研究探討了BMP4在食管癌中的表達(dá)及其對(duì)患者預(yù)后的影響和相關(guān)機(jī)制分析，結(jié)果顯示，BMP4及其下游蛋白Smad1和p-Smad1在食管癌組織中的表達(dá)量均顯著高于非癌食管組織（P＜0.05），表明BMP4在食管癌的發(fā)生發(fā)展中可能有重要意義，且可能通過Smad1和p-Smad1通路發(fā)揮作用。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中BMP4與p-Samd1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.491，P＜0.01）；通過進(jìn)一步對(duì)食管癌患者預(yù)后進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，BMP4及p-Samd1的高表達(dá)是食管癌患者預(yù)后不良的因素（P＜0.05），而Samd1的表達(dá)量與食管癌患者預(yù)后結(jié)局關(guān)系不大（P＞0.05）。這些結(jié)果提示BMP4與Smadl的磷酸化產(chǎn)物p-Smad1與食管癌的預(yù)后的關(guān)系密切，檢測BMP4、Smadl與p-Smadl的表達(dá)可更為有效地預(yù)測食管癌的發(fā)生及預(yù)后，但其具體細(xì)致的信號(hào)傳導(dǎo)通路如何則有待進(jìn)一步研究闡明。