四子填精膠囊中蛇床子素的含量

徐洪勝，彭振宇

（浙江莎普愛思藥業(yè)股份有限公司，浙江 平湖 314200）

1 方 法

1.1 儀器與試藥

儀器：Agilent 1200 series高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器

蛇床子素對(duì)照品，購于中國食品藥品檢定研究院（批號(hào)：110822-201609，供含量測(cè)定用，純度99.6%）。乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：Sepax Bio-C18（4.6×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（50:50）；流速：0.9 ml/min；柱溫：40℃；檢測(cè)波長：322 nm；理論板數(shù)按蛇床子素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蛇床子對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1 mL含0.030 mg的溶液，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.3 g，精密稱定，精密加無水乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

1.5 測(cè)定法

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算，即得。

2 方法學(xué)考察

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 測(cè)定波長的選擇

精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，觀察對(duì)照品溶液與供試品溶液210 nm～400 nm范圍內(nèi)在線紫外光譜圖，蛇床子素在320 nm波長附近有最大吸收。參照中國藥典2015年版一部蛇床子項(xiàng)下含量測(cè)定方法，選擇322 nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

參照《中國藥典》2015年版一部蛇床子項(xiàng)下含量測(cè)定方法，以Sepax Bio-C18（4.6×250 mm，5 μm）為色譜柱，采用乙腈-水（65:35）作為流動(dòng)相，蛇床子素峰保留時(shí)間較快，調(diào)整流動(dòng)相的比例至乙腈-水（50:50），結(jié)果分離效果較好，保留時(shí)間適度，因此，確定乙腈-水（50:50）為本法的流動(dòng)相。

2.2 陰性對(duì)照試驗(yàn)

為進(jìn)一步考察試驗(yàn)的合理性，取不含蛇床子的陰性對(duì)照樣品、供試品、溶劑（無水乙醇）。依正文所述方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，陰性樣品色譜在與蛇床子素峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密稱取蛇床子素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.03024 mg的溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9、15 μL測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積和為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為y=2511.5056x-4.5053 R2=0.9999，見表1，結(jié)果表明蛇床子素在0.03024～0.45358 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈線性關(guān)系，符合外標(biāo)法定量測(cè)定的要求。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液5 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)6次，測(cè)定其色譜峰面積值，見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液5 μL，間隔以下時(shí)間，注入液相色譜儀，按正文色譜條件測(cè)定，見表3。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品（批號(hào)130827）依正文方法獨(dú)立測(cè)定六次，見表4。

2.7 回收率試驗(yàn)

采取半量加樣回收法，精密稱取已知含量的供試品（含蛇床子素5.4933 mg/g）共6份，每份0.3 g，分別置具塞錐形瓶中，精密加入對(duì)照品溶液（含蛇床子素0.03888 mg/mL，未折純度）50 mL，依法測(cè)定回收率，見表5。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

表5 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3 樣品和原料測(cè)定

依正文方法測(cè)定。

4 限 度

蛇床子現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為中國藥典2015年版一部，其中含量測(cè)定項(xiàng)規(guī)定，按干燥品計(jì)算，含蛇床子素不得少于1.0%；水分不得過13.0%，根據(jù)處方計(jì)算，理論值應(yīng)不少于1.70 mg/粒?？紤]到生產(chǎn)中的波動(dòng)，原料藥材投料時(shí)未折水分，70%乙醇提取轉(zhuǎn)移率為50%，暫定本品每粒含蛇床子以蛇床子素（C13H18O7）計(jì)，不得少于0.80 mg/粒。