UV-B輻射對(duì)稻瘟病菌侵染階段四個(gè)致病相關(guān)基因表達(dá)的影響

黃蘭林，梅馨月，李 詳，李 想，祖艷群，何永美，李 元

（云南農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，昆明 650201）

稻瘟病是我國(guó)影響水稻生產(chǎn)最嚴(yán)重的病害之一，是由稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）引起的水稻真菌性病害，是制約水稻生產(chǎn)的重要因子，導(dǎo)致水稻減產(chǎn)或品質(zhì)嚴(yán)重下降[1]。適當(dāng)劑量的UV-B（波長(zhǎng)280～315 nm的紫外光）能有效減少病害，與此同時(shí)還能增加水稻苯丙氨酸解氨酶活性和類(lèi)黃酮含量，在2.5 kJ·m-2和5 kJ·m-2UV-B輻射條件下會(huì)顯著增加，這將有效抵御UV-B脅迫，減輕UV-B對(duì)水稻帶來(lái)的傷害[2]。雖然在高強(qiáng)度UV-B輻射如4.0 kJ·m-2和8.0 kJ·m-2時(shí)，根據(jù)水稻品種、溫度和降雨頻率不同等原因，會(huì)對(duì)水稻生長(zhǎng)和產(chǎn)量有不同的影響，但其影響程度遠(yuǎn)低于稻瘟病害[3]。

紫外線對(duì)真菌有很多影響，如死亡、抑制孢子萌發(fā)，生長(zhǎng)延遲和突變[4]。UV-B對(duì)稻瘟病菌的生長(zhǎng)、產(chǎn)孢[5]和稻瘟病菌侵染生長(zhǎng)[6]有著延緩的作用，并根據(jù)輻射劑量不同而影響程度不同。UV-B對(duì)植物病原菌疾病、分生孢子及其萌發(fā)物，毒力都存在影響，如小麥條銹病[7]、番茄花葉病[8]、十字花科黑腐病[9]、玉米大斑病，這取決于UV-B處理時(shí)間、品種、接種水平和植物年齡，一定劑量的UV-B使分生孢子產(chǎn)孢時(shí)間滯后，致病力下降[10]。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)隨著UV-B輻射的增強(qiáng)，球孢白僵菌[11]、絲孢菌綠僵菌[12]、蝗綠僵菌萌發(fā)時(shí)間滯后，毒力降低[13]。

紫外線作為誘變劑主要針對(duì)生物大分子DNA[14]，使其發(fā)生誘變，造成基因突變，這必然會(huì)影響基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成，這或許也會(huì)影響病菌的致病力[15]。例如木黴菌和米曲霉黑色素合成基因在低劑量UV-B輻射下表達(dá)水平的增加，減少了UV-B輻射帶來(lái)傷害的同時(shí)提高了致病力[16]，而十字花科黑腐病菌，在受射線如紫外光、X光照射后，Lon基因突變，細(xì)胞會(huì)因抑制細(xì)胞分裂蛋白累積，無(wú)法形成隔壁[17]而無(wú)法致病，玉米大斑病菌黑色素合成基因Stscd經(jīng)UV-B照射45 min后表達(dá)量明顯上升，1 h時(shí)表達(dá)量達(dá)到最高峰，之后開(kāi)始下降[18]。這些由UV-B引起的基因表達(dá)改變，通過(guò)改變各種表型來(lái)影響侵染致病力[19]。研究發(fā)現(xiàn)，NUV（近紫外光）對(duì)病原菌的基因表達(dá)也會(huì)有重要的影響，水稻褐斑病NUV照射可以抑制產(chǎn)生孢子并使PHR1表達(dá)增強(qiáng)[20]。除致病基因外，響應(yīng)NUV的光解酶基因表達(dá)水平被NUV輻射會(huì)特異性增強(qiáng)，這些反應(yīng)由藍(lán)/UVA吸收光感受器介導(dǎo)[21]，在米曲霉[22]和粗糙脈孢菌[23]中，也發(fā)現(xiàn)了相似的真菌藍(lán)光調(diào)節(jié)蛋白，由此來(lái)應(yīng)對(duì)UV輻射[24]。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于水稻稻瘟病菌致病基因已有大量報(bào)道，光脅迫如紫外和近紫外輻射對(duì)各類(lèi)植物和昆蟲(chóng)病原菌致病基因的影響研究也屢見(jiàn)不鮮。但對(duì)于UV-B處理稻瘟病菌，對(duì)致病基因表達(dá)影響的報(bào)道尚少。在我國(guó)云南元陽(yáng)梯田地區(qū)，高海拔下增強(qiáng)的紫外輻射條件下，稻瘟病病情指數(shù)遠(yuǎn)低于其他地區(qū)，其中在5 kJ·m-2強(qiáng)度下病情指數(shù)降到最低[6]。在稻瘟病菌侵染整個(gè)過(guò)程中，從芽管伸長(zhǎng)到入侵宿主都涉及細(xì)胞壁的合成和變化，已知幾丁質(zhì)為真菌細(xì)胞壁的主要組分，幾丁質(zhì)酶是其中重要的胞壁修飾酶[25]，Chitinase參與合成幾丁質(zhì)酶，同時(shí)也與菌絲生長(zhǎng)及孢子的萌發(fā)密切相關(guān)[26]，參與稻瘟病菌生長(zhǎng)發(fā)育及形態(tài)建成以至侵染致病過(guò)程[27]。在稻瘟病菌穿透寄主表皮之前，MPG1基因能感知水稻表皮的疏水信號(hào)，這是稻瘟病菌能形成附著胞的必要條件之一[28]；感知疏水信號(hào)后，MAGB基因誘導(dǎo)產(chǎn)生附著胞[29]，形成附著胞后所需的侵入機(jī)械壓力受cAMP途徑調(diào)節(jié)，而此信號(hào)途徑依賴(lài)由CPKA基因編碼的蛋白激酶A的活性[30]。為了探尋其中增強(qiáng)的UV-B輻射能有效減少稻瘟病害的分子機(jī)理，本研究通過(guò)UV-B處理稻瘟病菌，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)4個(gè)稻瘟病菌致病相關(guān)基因（Chitinase、MGP1、MAGB、CPKA）進(jìn)行表達(dá)分析，以期通過(guò)分析其表達(dá)水平來(lái)解釋UV-B能如何影響稻瘟病菌的致病力，為在分子層面探索UV-B影響稻瘟病害提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與使用儀器

1.1.1 供試材料

本試驗(yàn)供試菌株為田間稻瘟病發(fā)病水稻上分離保存所得的YN737。

水稻品種：白腳老粳。

1.1.2 試劑

購(gòu)自 Invitrogen 的 Trizol Reagent、購(gòu)自 Roche的Universal cDNA Master反轉(zhuǎn)錄試劑盒和Essential DNA Green Master，購(gòu)自Sigma公司的曲利苯蘭。

1.1.3 儀器

本試驗(yàn)采用的儀器：Eppendorf Centrifuge 5424 R、Thermo Nanodrop 2000、BIO-RAD Molecular Imag?er、Roche LightCycler 96 Instrument和 OLYMPUS BH-2顯微鏡等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌株及水稻的培養(yǎng)

將水稻稻瘟病菌株YN737在米糠培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)7 d，用8 mm打孔器切取菌餅放置在鋪有玻璃紙的PDA平板培養(yǎng)基上，28℃與22℃的光暗循環(huán)交替培養(yǎng)5 d至菌絲長(zhǎng)滿覆蓋玻璃紙進(jìn)行UV-B輻射處理。

挑選飽滿健康的白腳老粳水稻種子進(jìn)行催芽，待種子露白，將水稻播種于10 cm×20 cm×7 cm的方盆中，置于溫室中培養(yǎng)。

1.2.2 UV-B輻射處理

將培養(yǎng)皿皿蓋打開(kāi)放置在0.5 h預(yù)熱穩(wěn)定后的紫外燈（波長(zhǎng)280～320 nm，北京電光源研究所提供）正下方，通過(guò)調(diào)整紫外燈與培養(yǎng)皿的垂直距離來(lái)調(diào)整輻射強(qiáng)度，其中燈管用0.13 mm醋酸纖維素膜包被，以去除小于290 nm的短波輻射，用UV-B輻射測(cè)定儀（北京師范大學(xué)光電儀器廠）測(cè)定植株頂端輻射強(qiáng)度。輻射強(qiáng)度為0、2.5 kJ·m-2和5 kJ·m-2，輻射處理時(shí)間為10、60、120 min，以及輻射120 min后黑布包被避光放置6、24 h，未做輻射處理即輻射處理時(shí)間0 min為CK。

待水稻長(zhǎng)至三葉一心期，剪取葉片分別制成長(zhǎng)3 cm的葉段，采用滴液法將孢子懸浮液接種于水稻葉段上（黑暗保濕24 h），每片葉滴3滴孢子懸浮液，每滴5μL，接種后2、8、32 h、3 d采樣染色，接種同時(shí)對(duì)水稻進(jìn)行UV-B輻射處理，強(qiáng)度為0、2.5 kJ·m-2和5 kJ·m-2。

1.2.3 材料收集與染色

UV-B輻射處理后，一部分用滅菌的玻片將玻璃紙上的菌絲刮下放入盛有液氮的研缽迅速冷凍研磨；另一部分用無(wú)菌水小心洗下孢子，滅菌紗布濾掉菌絲，將孢子濃度調(diào)至1×106個(gè)·mL-1，將孢子懸浮液均勻噴灑在疏水表面，26℃黑暗保濕培養(yǎng)2、8 h后液氮速凍刮取表面培養(yǎng)物進(jìn)行研磨。

接種觀察試驗(yàn)為每一處理設(shè)置3次重復(fù)，每一重復(fù)為10個(gè)葉段，對(duì)葉段采用曲利苯蘭-酒精乳酚油染色觀察。在曲利苯蘭-酒精乳酚油（無(wú)水乙醇20 mL，苯酚10 mL，83%乳酸10 mL，水10 mL，曲利苯蘭10 mg）中沸水浴10 min；將染色后的葉段置于水合飽和氯醛溶液中脫色過(guò)夜；保存于50%甘油中。在OLYMPUS BH-2顯微鏡下觀察葉段，接種后2、8 h和3 d照相記錄稻瘟病菌萌發(fā)形成芽管、附著胞、侵染菌絲侵入水稻細(xì)胞的過(guò)程。

1.2.4 RNA的提取

取50～100 mg樣品，加入1 mL Trizo（l樣本的量不宜超過(guò)Trizol體積的10%）充分搖勻后室溫靜置15 min，4 ℃ 13 000 r·min-1離心10 min；小心吸取上清液至新的無(wú)酶管，加入200μL氯仿?lián)u勻，室溫靜置5 min，4 ℃ 13 000 r·min-1離心15 min；吸取上清液，加入異丙醇200 μL，室溫靜置2～5 min，4 ℃ 13 000 r·min-1離心15 min；去上清，加入1 mL 70%乙醇，4℃13 000 r·min-1離心 5 min；去上清，小心吸取殘余液體，室溫靜置2～10 min；加50～200 μL無(wú)核酸酶水，于-80℃保存。

1.2.5 RNA質(zhì)量和濃度的檢測(cè)

用1.2%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性，利用Thermo Nanodrop 2000對(duì)RNA進(jìn)行濃度檢測(cè)和純度檢測(cè)。

1.2.6 cDNA模板的合成

用Universal cDNA Master反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)樣品進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，Reaction Buffer（5×conc）4 μL，Enzyme Mix（10×conc）2μL，根據(jù)RNA濃度調(diào)整模板RNA和水的用量，反轉(zhuǎn)體系終體積為20μL，42、85、65℃分別水浴15、5、15 min，完成反轉(zhuǎn)錄。

1.2.7 引物設(shè)計(jì)

利用Primer Premier和NCBI/Primer-BLAST，分別設(shè)計(jì)了看家基因Actin和其他目的基因的引物（表1），由擎科昆明公司合成提供。

1.2.8 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

以Actin為內(nèi)參，按照20μL體系（水3μL、10×conc PCR Primer 2 μL、Master Mix10 μL、DNA Tem?late 5μL）進(jìn)行qRT-PCR擴(kuò)增，反應(yīng)程序分別為95℃預(yù)變性600 s，三步95℃～60℃～72℃擴(kuò)增，45個(gè)循環(huán)，95℃～65℃～97℃退火溶解。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)用Excel 2010和LC 96進(jìn)行整理作圖，差異顯著性檢驗(yàn)采用SPSS 22.0 Duncan檢驗(yàn)法（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 RNA的質(zhì)量與濃度的檢測(cè)

經(jīng)過(guò)1.2%凝膠瓊脂糖電泳，結(jié)果如圖1所示，RNA18 S、28 S條帶清晰，5 S模糊，說(shuō)明RNA完整性良好。260、280 nm下測(cè)定RNA的吸光度，其中A260/A280值均在1.82～2.04之間，說(shuō)明RNA有機(jī)污染少，降解少，質(zhì)量較好，滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。4個(gè)目的基因與內(nèi)參基因Actin的溶解曲線平滑，單一峰，無(wú)引物二聚體，溫度介于85～88℃之間，說(shuō)明引物具有特異性，擴(kuò)增結(jié)果可靠。

表1 引物序列Table 1 Primer sequence

圖1 凝膠瓊脂糖電泳圖Figure 1 Gel agarose electrophoresis

2.2 比較C（tΔΔCt）法分析各目的基因的相對(duì)表達(dá)變化

從圖2 Chitinase的表達(dá)變化來(lái)看，在2.5 kJ·m-2輻射強(qiáng)度下，Chitinase只在輻射時(shí)間為60 min處理下與對(duì)照相比表達(dá)有顯著升高，上調(diào)了93%，其余時(shí)間均沒(méi)有顯著變化，而在5 kJ·m-2輻射強(qiáng)度下，隨著輻射時(shí)間的延長(zhǎng)，Chitinase表達(dá)逐漸降低，在120 min處理下，相對(duì)表達(dá)量降到最低，從輻射10 min開(kāi)始到輻射120 min結(jié)束，表達(dá)較對(duì)照分別下調(diào)了64%、22%和94%，而在放置6、24 h后，其表達(dá)量逐漸回升為對(duì)照的48%和54%。

圖2 不同UV-B處理Chitinase的表達(dá)變化Figure 2 Changes of Chitinase expression under different UV-B treatments

圖3 不同UV-B處理MGP1的表達(dá)變化Figure 3 Changes of MGP1 expression under different UV-B treatments

對(duì)于MGP1，兩個(gè)輻射強(qiáng)度下（圖3），各個(gè)處理時(shí)間對(duì)MGP1表達(dá)的影響不大，2.5 kJ·m-2輻射處理時(shí)，表達(dá)量在各處理時(shí)間并沒(méi)有顯著變化，僅在5 kJ·m-2輻射處理時(shí)，隨著輻射時(shí)間的增加，表達(dá)量緩慢下調(diào)，到120 min處理時(shí)，表達(dá)量較對(duì)照下調(diào)了19%，并且在輻射結(jié)束后放置6 h和24 h，表達(dá)恢復(fù)至正常水平。

而MAGB（圖4）則是在5 kJ·m-2輻射強(qiáng)度下，各處理時(shí)間沒(méi)有顯著變化，在2.5 kJ·m-2強(qiáng)度下，表達(dá)會(huì)在輻射10～120 min受到顯著抑制，與對(duì)照相比分別下調(diào)了57%、17%和40%，去除輻射放置6 h后，MAGB的表達(dá)會(huì)回升為對(duì)照水平，放置24 h，表達(dá)回升且較對(duì)照上調(diào)了14%。

在兩個(gè)輻射強(qiáng)度下，CPKA呈相似的表達(dá)趨勢(shì)（圖5），在5 kJ·m-2處理時(shí)的表達(dá)整體低于2.5 kJ·m-2。短時(shí)間的輻射使CPKA的表達(dá)上升，與對(duì)照相比，2.5 kJ·m-2輻射時(shí)，10 min與60 min的輻射處理與撤去輻射后放置6、24 h表達(dá)上調(diào)了1～2倍。5 kJ·m-2輻射時(shí)，10 min輻射處理時(shí)，CPKA的表達(dá)與對(duì)照相比上調(diào)了49%，輻射60 min和120 min時(shí)，表達(dá)下調(diào)了82%和61%，在撤去輻射后放置6、24 h，表達(dá)恢復(fù)至對(duì)照水平。以上結(jié)果表明，UV-B輻射劑量的增加對(duì)MGP1的表達(dá)沒(méi)有顯著影響，而Chitinase、MAGB、CPKA 3個(gè)基因的表達(dá)均有所下調(diào)，在去除輻射后，表達(dá)回升。

圖4 不同UV-B處理MAGB的表達(dá)變化Figure 4 Changes of MAGB expression under different UV-B treatments

圖5 不同UV-B處理CPKA的表達(dá)變化Figure 5 Changes of CPKA expression under different UV-B treatments

2.3 UV-B輻射處理下稻瘟病菌侵染階段生長(zhǎng)量的變化

芽管、附著胞和菌絲侵入形成菌落的過(guò)程中，5 kJ·m-2處理比2.5 kJ·m-2處理能更大程度地抑制病原菌的侵染（圖6）。2.5 kJ·m-2處理下稻瘟病菌各侵染階段的生長(zhǎng)量在芽管形成階段沒(méi)有顯著差異，在附著胞和菌落形成階段與對(duì)照相比下降了31%和28.6%；而在5 kJ·m-2處理下，3個(gè)階段都有顯著下降，分別減少了45.1%、82.2%和75.2%。

圖6 UV-B處理下各侵染階段稻瘟病菌生長(zhǎng)量Figure 6 Growth of Magnaporthe grisea in different stages of infection under UV-B treatment

3 討論

3.1 UV-B輻射處理下致病基因表達(dá)水平變化特征

UV-B輻射處理能使菌絲生長(zhǎng)變得致密、緊湊，產(chǎn)孢量也隨著輻射強(qiáng)度的增加而顯著下降[5]，在5 kJ·m-2處理時(shí)，Chitinase的表達(dá)一致。2.5 kJ·m-2輻射處理，在輻射60 min時(shí)，Chitinase的表達(dá)顯著升高，可能是由于低輻射強(qiáng)度的UV-B讓病菌對(duì)此做出了反應(yīng)來(lái)保護(hù)自身，是病菌產(chǎn)生的防護(hù)措施[31]，如加快細(xì)胞的合成與分解來(lái)減輕UV-B帶來(lái)的傷害。黑色素廣泛存在于各種真菌體內(nèi)[16]，黑色素基因表達(dá)的升高能降低病原菌受到的UV傷害[32]，并且發(fā)現(xiàn)玉米大斑病黑色素基因在紫外輻射后也表現(xiàn)出相同的趨勢(shì)，會(huì)在輻射處理60 min時(shí)，表達(dá)量上升至最高峰，隨后下降[18]，與本試驗(yàn)Chitinase表達(dá)趨勢(shì)相似，輻射下Chi?tinase與玉米大斑病黑色素基因表達(dá)變化的相似，可能是由于激發(fā)了相似的代謝途徑來(lái)進(jìn)行自我保護(hù)。

而對(duì)于MGP1，不同輻射劑量對(duì)其表達(dá)不產(chǎn)生顯著影響，僅在高輻射劑量表達(dá)才會(huì)有少量下調(diào)，推測(cè)MGP1對(duì)UV-B輻射耐受。細(xì)胞已經(jīng)開(kāi)發(fā)出許多修復(fù)或耐受機(jī)制來(lái)抵消UV或任何其他應(yīng)激物造成的分子損傷[19]，在光解酶的幫助下光還原是各種生物體中最重要且經(jīng)常發(fā)生的修復(fù)機(jī)制之一[33]，此外，切除修復(fù)可分別借助多種糖基化酶和聚合酶在幾種生物體分子修復(fù)中也起重要作用[34]。誘變修復(fù)或二聚體旁路、重組修復(fù)、細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，細(xì)胞凋亡和某些替代性修復(fù)途徑等機(jī)制也存在于各種生物體[22]，推測(cè)在UV-B處理下可能激發(fā)了其中的修復(fù)機(jī)制，最終免于MGP1表達(dá)的改變，但其中可能存在的路徑尚不明確。

MAGB則受2.5 kJ·m-2輻射強(qiáng)度的UV-B時(shí)有較5 kJ·m-2輻射強(qiáng)度更明顯的變化，可能是由于MAGB對(duì)低輻射強(qiáng)度較敏感。致病基因的表達(dá)除取決于分生孢子的生理狀態(tài)之外，還取決于輻射劑量[12]。CP?KA在兩種輻射強(qiáng)度下有著一致趨勢(shì)的表達(dá)變化，在5 kJ·m-2輻射強(qiáng)度處理CPKA的表達(dá)量整體低于2.5 kJ·m-2處理，隨輻射劑量的增加，基因轉(zhuǎn)錄受到破壞，其表達(dá)受到抑制。CPKA編碼合成致病性所必需的蛋白激酶A的催化亞基單位PKA-c，而cAMP途徑依賴(lài)于蛋白激酶A的活性，這也可能導(dǎo)致cAMP途徑受到影響[35]，進(jìn)一步影響稻瘟病菌的致病力，cAMP信號(hào)通路對(duì)外界壓力脅迫如熱激、紫外線輻射、電離輻射等都會(huì)做出應(yīng)答[36]。結(jié)合本試驗(yàn)，得知只有高強(qiáng)度輻射處理時(shí)能抑制CPKA的表達(dá)，撤去輻射，放置6 h和24 h都能發(fā)現(xiàn)CPKA的表達(dá)恢復(fù)對(duì)照水平，從白化酵母菌中也能得出，輻射后的光復(fù)活和黑暗處理都能產(chǎn)生光還原[37]。

從Chitinase、MAGB、CPKA的表達(dá)變化不難發(fā)現(xiàn)，在去除UV-B輻射后，降低的表達(dá)量會(huì)有所回升，所以推測(cè)通過(guò)逆境篩選留存的稻瘟菌株有適應(yīng)而產(chǎn)生的修復(fù)功能——光還原[37]，所以持續(xù)或者更長(zhǎng)時(shí)間的UV-B照射才能使稻瘟病菌降低或喪失致病力。從本文的試驗(yàn)結(jié)果可以看到，Chitinase、MAGB、CPKA在UV-B輻射處理下，表達(dá)都有顯著變化，大致趨勢(shì)都是在5 kJ·m-2處理強(qiáng)度時(shí)表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照降低了，變化程度有所不同，已有的研究中就發(fā)現(xiàn)光響應(yīng)基因中2.8%的基因是光敏感的，2%誘導(dǎo)和0.8%抑制[38]。

3.2 UV-B輻射下致病基因表達(dá)水平變化與稻瘟病菌侵染力的關(guān)系

試驗(yàn)結(jié)果印證了UV-B輻射能減輕稻瘟病害以及影響其致病力的假說(shuō)，其中Chitinase在稻瘟病菌各生長(zhǎng)期都有重要作用，說(shuō)明UV-B對(duì)其影響可能貫穿整個(gè)生育階段，低強(qiáng)度輻射時(shí)，其表達(dá)上升來(lái)減輕紫外輻射帶來(lái)的傷害，隨著輻射強(qiáng)度增強(qiáng)和時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)下降以致稻瘟病整個(gè)生育階段都有可能受到傷害和抑制，例如產(chǎn)孢量的減少、芽管、附著胞、侵染菌絲形成受阻等等；MAGB與CPKA的表達(dá)都影響著cAMP途徑[35]，該途徑與稻瘟病菌的生長(zhǎng)發(fā)育、孢子萌發(fā)、侵染結(jié)構(gòu)形成與致病性都具有重要作用[39-41]。MAGB和CPKA基因的表達(dá)變化表示，適當(dāng)?shù)淖贤廨椛淠茏尭街纬墒茏枰约扒秩緳C(jī)械壓力的不足或喪失。從試驗(yàn)結(jié)果可以得出，這4個(gè)基因在UV-B輻射處理下，其表達(dá)都有顯著改變，其中5 kJ·m-2處理時(shí)，更加顯著抑制了表達(dá)水平，這與試驗(yàn)結(jié)果5 kJ·m-2的UV-B輻射能更大程度減少芽管、附著胞和菌絲侵染，從而更大程度地減少稻瘟病害相一致。

雖然近年對(duì)稻瘟病菌致病力相關(guān)基因[42]和UV-B輻射對(duì)動(dòng)植物真菌病害影響的研究已較為豐富，但是在分子水平驗(yàn)證UV-B輻射對(duì)稻瘟病菌影響的研究尚少，機(jī)理尚不清晰，UV-B調(diào)節(jié)基因的功能尚不清楚，還需進(jìn)一步探索生物學(xué)細(xì)節(jié)來(lái)驗(yàn)證。如調(diào)查過(guò)度表達(dá)，基因破壞或引入反義RNA等實(shí)驗(yàn)[23]等，將有助于揭示稻瘟病菌在UV-B作用下分子層面的機(jī)理。

4 結(jié)論

（1）UV-B輻射能有效減輕水稻稻瘟病的病情指數(shù)，減少病害，控制好輻射劑量（如5 kJ·m-2輻射處理）能使病害程度顯著降低。

（2）UV-B輻射能有效降低水稻稻瘟病病害的重要機(jī)理是UV-B輻射能使稻瘟病菌致病基因的表達(dá)發(fā)生變化，尤其在5 kJ·m-2輻射處理120 min時(shí)，能顯著減少致病基因的表達(dá)，從而降低病菌入侵對(duì)應(yīng)各個(gè)發(fā)育階段的生長(zhǎng)量來(lái)減少病害。