某規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病抗體檢測(cè)與分析

段正贏，焦祖武，周丹娜，楊克禮，郭 銳，劉 威，劉澤文，袁芳艷，高 婷，田永祥

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所/農(nóng)業(yè)部畜禽細(xì)菌病防治制劑創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430064）

豬偽狂犬?。≒seudorabies,PR）是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一種多種動(dòng)物共患的傳染病。該病臨床上多以發(fā)熱和神經(jīng)癥狀為特征，主要引起種豬不育，妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)、死胎和木乃伊胎，新生仔豬和斷奶仔豬呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)障礙以及死亡，肥育豬呼吸困難和生長(zhǎng)緩慢等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一[1]。隨著PRV基因缺失疫苗在國(guó)內(nèi)豬場(chǎng)的廣泛應(yīng)用，偽狂犬病的流行趨勢(shì)有所緩和，但該病的隱性感染現(xiàn)象仍相當(dāng)普遍。實(shí)際生產(chǎn)中，開(kāi)展豬偽狂犬病抗體監(jiān)測(cè)，根據(jù)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，可為該病制訂合理的預(yù)防和凈化方案提供有力的參考。2017年，筆者應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法對(duì)湖北黃岡市某規(guī)?；i場(chǎng)的血清樣品進(jìn)行了豬偽狂犬病跟蹤監(jiān)測(cè)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料

1.1 血清

樣品采集時(shí)間為2017年4—10月，所有樣品均來(lái)自湖北黃岡市某規(guī)?；i場(chǎng)，該場(chǎng)母豬存欄數(shù)為710頭，所有豬只采用豬偽狂犬病gE基因缺失活疫苗免疫。血樣分別采集公豬、后備豬、不同胎次的種豬及不同生長(zhǎng)階段的商品豬，共采集血樣622份，其中公豬血清樣品37份，母豬血清樣品261份，不同周齡豬群樣品324份。血樣分離血清后，置-20℃冰箱中保存，備用。

1.2 檢測(cè)試劑

豬偽狂犬病野毒感染抗體（PRV-gE抗體）檢測(cè)試劑盒及免疫抗體（PRV-gB抗體）檢測(cè)試劑盒，為IDEXX公司生產(chǎn)。

2 方法

采用IDEXX公司生產(chǎn)的豬PRV-gB、PRV-gE抗體ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)所有血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)，檢測(cè)程序和判斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格參照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行操作。樣品PRV-gB抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N值≤0.6為陽(yáng)性，S/N值＞0.7為陰性，0.6＜S/N值≤0.7的樣品應(yīng)重測(cè)。樣品PRV-gE抗體判定標(biāo)準(zhǔn)：S/N值≤0.6為陽(yáng)性，S/N值＞0.7為陰性，0.6＜S/N值≤0.7的樣品應(yīng)重測(cè)。

3 結(jié)果

3.1 種豬群PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)

種豬野毒感染抗體監(jiān)測(cè)總樣本數(shù)為298份，其中公豬群37份，母豬群261份。第1次監(jiān)測(cè)即4月份監(jiān)測(cè)結(jié)果中，該豬場(chǎng)13份公豬血清樣品中有1份為PRV-gE抗體陽(yáng)性，將1頭公豬淘汰后，在第2次、第3次監(jiān)測(cè)即7月份、10月份監(jiān)測(cè)結(jié)果中，PRV-gE抗體均為陰性，見(jiàn)表1。母豬群在第1次監(jiān)測(cè)中，PRV-gE抗體陽(yáng)性率為20.2%，其中后備豬群為 16.0%，1～2胎母豬群為 18.2%，3～4胎母豬群為20.0%，5胎以上母豬群為27.3%，呈現(xiàn)出胎次越高陽(yáng)性率越高的趨勢(shì)，第2次、第3次監(jiān)測(cè)結(jié)果中，PRV-gE抗體陽(yáng)性率分別下降至15.1%、7.0%，呈逐漸下降趨勢(shì)，且后備豬群在第3次監(jiān)測(cè)中已轉(zhuǎn)為PRV-gE抗體陰性，見(jiàn)表2。

表1 公豬群PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)

表2 母豬群PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)

3.2 不同周齡豬群PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)

不同周齡豬群PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)樣品324份，血樣采自 1～4 周齡、5～8 周齡、9～12 周齡、13～16 周齡及17～21周齡豬群。第1次監(jiān)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRV-gE抗體陽(yáng)性率為21.8%，各周齡豬群均有不同PRV-gE抗體陽(yáng)性豬存在。第2次、第3次監(jiān)測(cè)的PRV-gE抗體陽(yáng)性率分別為13%、5%，呈逐漸下降趨勢(shì)，且13～16周齡豬群及17～21周齡豬群在第3次監(jiān)測(cè)中已轉(zhuǎn)為PRV-gE抗體陰性，見(jiàn)表3。

表3 不同周齡豬群PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)

3.3 豬群PRV-gB抗體監(jiān)測(cè)

PRV-gB抗體監(jiān)測(cè)樣品622份，在3次監(jiān)測(cè)中，37份公豬群血樣抗體陽(yáng)性率均為100%（表4）。第1次監(jiān)測(cè)結(jié)果中，母豬群的抗體陽(yáng)性率高于仔豬和育成豬，抗體陽(yáng)性率為59.1%～84.0%，仔豬和育成豬群的抗體陽(yáng)性率較低，為44.0%～70.8%。母豬群3次監(jiān)測(cè)的平均陽(yáng)性率分別為70.8%、83.7%、93.0%，仔豬和育成豬群的平均陽(yáng)性率分別為57.3%、82.0%、96%，均呈逐步上升趨勢(shì)，見(jiàn)表5、表6。

表4 公豬群PRV-gB抗體監(jiān)測(cè)

表5 母豬群PRV-gB抗體監(jiān)測(cè)

表6 不同周齡豬群PRV-gB抗體監(jiān)測(cè)

4 討論

通過(guò)PRV-gE抗體監(jiān)測(cè)，結(jié)果顯示，母豬群感染率平均為20.2%，不同周齡豬群感染率平均為21.8%，同期免疫抗體的陽(yáng)性率分別為70.8%和57.3%，表明該豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染比較嚴(yán)重。根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果，建議豬場(chǎng)采取加強(qiáng)免疫與逐步淘汰陽(yáng)性帶毒豬等綜合防控措施后，野毒感染率逐漸下降，第3次檢測(cè)母豬群、仔豬和育成群野毒感染率均分別下降到7.0%、5.0%，且后備豬群、13～16周齡豬群及17～21周齡豬群感染率降為0；而PRV-gB抗體3次監(jiān)測(cè)結(jié)果中，平均陽(yáng)性率逐漸上升，均達(dá)到90.0%以上；表明通過(guò)采取加強(qiáng)免疫和淘汰陽(yáng)性帶毒豬等綜合防控手段，不僅可有效降低陽(yáng)性帶毒率，還可有效提高免疫抗體水平。

目前，國(guó)內(nèi)外普遍用豬偽狂犬病病毒gE基因缺失活疫苗，并配套使用PRV-gE抗體ELISA診斷試劑盒對(duì)該病進(jìn)行預(yù)警檢測(cè)[2-4]，配套試劑盒能快速、方便、準(zhǔn)確檢測(cè)PR野毒抗體，從而評(píng)估豬群PR野毒感染狀況[5]。PRV-gB抗體檢測(cè)試劑盒也是一種準(zhǔn)確檢測(cè)免疫抗體的方法，但由于PRV-gB抗體檢測(cè)不能區(qū)分疫苗毒和野毒產(chǎn)生的抗體，對(duì)于常規(guī)定期監(jiān)測(cè)來(lái)講，如果僅僅檢測(cè)PRV-gB抗體不能說(shuō)明免疫抗體水平高低，應(yīng)與PRV-gE抗體檢測(cè)結(jié)果結(jié)合起來(lái)分析才更有意義。

近年來(lái)，由于PRV出現(xiàn)變異、毒力返強(qiáng)等情況，導(dǎo)致豬偽狂犬病疫情在國(guó)內(nèi)不斷發(fā)生，這可能是PR頻發(fā)和PR野毒感染率居高不下的一個(gè)重要原因。但我國(guó)現(xiàn)在已研究出針對(duì)變異株的高質(zhì)量的基因缺失疫苗應(yīng)用于養(yǎng)豬生產(chǎn)，再加上配套ELISA抗體檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，使得豬偽狂犬病的凈化和根除有了強(qiáng)有力的手段。