2018年規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染血清流行病學(xué)調(diào)查

林文耀，宋慶慶，劉玉梅，王 凱，劉國(guó)民，黃 超

（金宇保靈生物藥品有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010030）

自2011年以來(lái)，新流行的豬偽狂犬病（PR）變異毒株毒力增強(qiáng)，對(duì)豬的致病力增強(qiáng)，主要表現(xiàn)為豬群gE抗體陽(yáng)性率顯著升高，發(fā)病妊娠母豬流產(chǎn)，產(chǎn)弱仔、死胎；新生仔豬死亡率高，同時(shí)出現(xiàn)角弓反張等神經(jīng)癥狀，病死率在10%~50%。病毒的分離鑒定表明疫病由變異偽狂犬病病毒（PRV）毒株引起，并且新流行毒株處于獨(dú)立的進(jìn)化分支，這對(duì)PR的防控提出了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[1-3]。2012年，我國(guó)首次頒布了《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》，針對(duì)豬偽狂犬病的防控明確提出種豬場(chǎng)在2020年必須維持gE抗體陰性。為掌握現(xiàn)有的防疫控制體系下我國(guó)豬場(chǎng)偽狂犬病野毒感染的狀況，有效控制和凈化豬偽狂犬病，筆者對(duì)2018年1—12月中國(guó)24個(gè)省市358個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)不同豬群的偽狂犬病野毒血清流行病學(xué)進(jìn)行了全面調(diào)查與系統(tǒng)分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 采樣方法 樣品采用橫斷面采樣方法，分別采集公豬、后備豬、不同胎次生產(chǎn)母豬以及不同生長(zhǎng)階段商品豬群的血液，分離血清，送金宇保靈國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.1.2 血清樣品 血清樣品采集時(shí)間為2018年1—12月，共36 565份，其中種豬群血清樣品18 256份，不同周齡仔豬和生長(zhǎng)育成豬群樣品18 309份。樣品來(lái)自我國(guó)24個(gè)省市358個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)，包括種豬場(chǎng)和商品育成豬場(chǎng)，記錄各豬場(chǎng)各主要疫病免疫程序，方便對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.1.3 檢測(cè)試劑 豬偽狂犬病病毒野毒抗體檢測(cè)采用gE-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）鑒別診斷試劑盒。

1.2 試驗(yàn)方法

阻斷ELISA法。操作方法以及結(jié)果判定參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

結(jié)果判定參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。檢測(cè)的血清樣品全部來(lái)自使用gE基因缺失疫苗免疫的豬場(chǎng)，所以檢測(cè)到gE抗體陽(yáng)性豬可以判斷該豬場(chǎng)被偽狂犬病野毒感染。在進(jìn)行豬場(chǎng)結(jié)果判定和統(tǒng)計(jì)時(shí)，只要豬場(chǎng)有一個(gè)樣品為陽(yáng)性，則該場(chǎng)判定為偽狂犬病野毒陽(yáng)性場(chǎng)。

2 結(jié)果

2.1 2018年規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病野毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果

在2018年所檢測(cè)的358個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)中，260個(gè)豬場(chǎng)為偽狂犬病野毒陽(yáng)性，豬場(chǎng)陽(yáng)性率為72.63%；總血清樣品數(shù)36 565份，11 282份為陽(yáng)性，樣品陽(yáng)性率為30.85%（表1）。總體而言，不同地區(qū)的豬場(chǎng)陽(yáng)性率均居高不下，24個(gè)送檢省市中，有21個(gè)省市豬場(chǎng)陽(yáng)性率≥50%。但是，不同地區(qū)的陽(yáng)性豬場(chǎng)樣品陽(yáng)性率卻差異較大，24個(gè)送檢省市中，只有3個(gè)省市樣品陽(yáng)性率≥50%。這種差異可能是由于不同地區(qū)對(duì)偽狂犬病的防控重視程度和生產(chǎn)管理水平不同造成的。

表1 2018年不同地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病野毒gE抗體檢測(cè)結(jié)果

按照地區(qū)統(tǒng)計(jì)，七大區(qū)域均有豬偽狂犬病野毒感染，其中華東豬場(chǎng)陽(yáng)性率和樣品陽(yáng)性率均為最高，分別為93.85%和49.56%（表2），提示華東地區(qū)豬偽狂犬病防控的壓力更大。

表2 2018年不同地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)偽狂犬病野毒gE抗體陽(yáng)性率

2.2 2018年偽狂犬病野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)不同類別和階段種豬的陽(yáng)性率

由表3可知，不同類別和階段的種豬都存在豬偽狂犬病野毒感染。生產(chǎn)母豬的陽(yáng)性率高于公豬和后備母豬。gE抗體陽(yáng)性率與母豬胎次密切相關(guān)，胎次越高陽(yáng)性率越高，表明新進(jìn)群的母豬隨著時(shí)間的推移，被感染的幾率提高，提示豬場(chǎng)內(nèi)偽狂犬病野毒的循環(huán)感染壓力較大。

2.3 2018年偽狂犬病野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)階段肥育豬gE抗體陽(yáng)性率

由表4可知，肥育豬從16周開(kāi)始gE抗體陽(yáng)性率開(kāi)始上升，從16周到24周由21.67%升到40.32%，顯然由偽狂犬病野毒感染所致，因?yàn)槟冈纯贵w一般維持約4個(gè)月[4]。肥育豬后期出現(xiàn)呼吸道疾病，日增重不理想等現(xiàn)象，這與偽狂犬病野毒感染肥育豬后表現(xiàn)的臨床癥狀一致。

表3 2018年偽狂犬病野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)不同類別和階段種豬gE抗體陽(yáng)性率

表4 2018年偽狂犬病野毒陽(yáng)性豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)階段肥育豬gE抗體陽(yáng)性率

3 分析與討論

3.1 豬偽狂犬病仍是我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病

本次調(diào)查持續(xù)1年。調(diào)查樣品來(lái)自我國(guó)24個(gè)省市358個(gè)規(guī)模化豬場(chǎng)，共36 565份，是目前國(guó)內(nèi)調(diào)查范圍較廣的規(guī)?；i場(chǎng)偽狂犬病野毒感染血清流行病學(xué)調(diào)查。結(jié)果表明豬偽狂犬病在規(guī)?；i場(chǎng)仍普遍存在，野毒感染較為嚴(yán)重。七大區(qū)域均存在偽狂犬病野毒的感染，其中華東豬場(chǎng)陽(yáng)性率和樣品陽(yáng)性率均為最高，分別為93.85%和49.56%。

國(guó)內(nèi)相關(guān)學(xué)者也對(duì)偽狂犬病野毒血清流行病學(xué)作了相關(guān)調(diào)查。胡睿銘等對(duì)9個(gè)省市2011—2013年692份血清樣品進(jìn)行g(shù)E抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示血清樣品陽(yáng)性率為67.05%（464/692）[5]。鄒敏等對(duì)來(lái)自18個(gè)省市2012—2013年393個(gè)送檢豬場(chǎng)共14 801份血清樣品進(jìn)行檢測(cè)，調(diào)查結(jié)果顯示豬場(chǎng)陽(yáng)性率為44.02%（173/393），樣品陽(yáng)性率為 16.13%（2 388/14 801），并發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性率有上升的趨勢(shì)[6]。解偉濤在2014年第一季度的檢測(cè)結(jié)果表明，血清樣品gE抗體陽(yáng)性率為37.92%（1 244/3 281），比 2013年上升 6.6%；豬場(chǎng)陽(yáng)性率為 89.9%（124/138），比 2013 年上升 6.3%[7]。

不同的調(diào)查研究產(chǎn)生了不盡相同的結(jié)果，可能是采樣地區(qū)、采樣階段、采樣數(shù)量不同而產(chǎn)生差異，但是豬偽狂犬病的發(fā)生有維持上升趨勢(shì)的結(jié)論是一致的，提示豬偽狂犬病在未來(lái)一段時(shí)間仍是中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病，豬偽狂犬病的預(yù)防和凈化不容樂(lè)觀。

3.2 種豬帶毒是豬偽狂犬病持續(xù)流行的重要原因

由表3可知，生產(chǎn)母豬gE抗體陽(yáng)性率與胎次密切相關(guān)，胎次越高陽(yáng)性率越高，提示豬場(chǎng)內(nèi)野毒的循環(huán)感染壓力較大，可能與公豬感染野毒有關(guān)，場(chǎng)內(nèi)母豬人工授精時(shí)受到污染野毒的精液感染，隨著人工授精的次數(shù)增加，感染的幾率也隨之增加，因?yàn)楣i精液可以攜帶偽狂犬病野毒。調(diào)查結(jié)果也表明，公豬確實(shí)存在豬偽狂犬病野毒的感染，比例為25.77%。后備母豬gE抗體陽(yáng)性率為20.46%，提示補(bǔ)充的陽(yáng)性后備母豬可能是豬場(chǎng)偽狂犬病反復(fù)發(fā)生的原因之一，提醒引種時(shí)必須進(jìn)行g(shù)E抗體的檢測(cè)，確保引進(jìn)的種豬為gE抗體陰性，同時(shí)做好生物安全隔離區(qū)，保證后備母豬更新不受偽狂犬病野毒的感染，導(dǎo)致種豬的帶毒率居高不下。

預(yù)防種豬感染偽狂犬病野毒是偽狂犬病防控和凈化的關(guān)鍵問(wèn)題。首先，要保證更新的公豬和后備母豬偽狂犬病野毒陰性，引種前進(jìn)行g(shù)E抗體檢測(cè)，確保引進(jìn)的種豬為陰性豬。做好隔離等生物安全措施，穩(wěn)定后首先免疫偽狂犬病gE基因缺失疫苗，轉(zhuǎn)生產(chǎn)前免疫兩次。為了提高中和抗體水平，提高抗感染能力，可免疫高效的偽狂犬病活疫苗，如2011年新分離的毒株C株。C株可有效提高中和抗體滴度，減少抗體離散度。兩次免疫后產(chǎn)生的中和效價(jià)高于活疫苗+滅活疫苗+滅活疫苗的免疫組合方案產(chǎn)生的中和抗體，可能與疫苗毒株的免疫原性，疫苗的生產(chǎn)工藝和抗原含量、佐劑等有關(guān)系，提示C株可以作為防控豬偽狂犬病的高效疫苗[9]，有效簡(jiǎn)化現(xiàn)有“活+死”免疫組合方案，簡(jiǎn)化豬場(chǎng)免疫程序，降低疫苗成本。然后通過(guò)gE抗體篩查，淘汰陽(yáng)性的生產(chǎn)公豬，保證生產(chǎn)公豬為陰性。因?yàn)閭慰袢〔《究赏ㄟ^(guò)精液傳播，通過(guò)人工授精快速傳播[8]。其次，加強(qiáng)種豬免疫強(qiáng)度，年普免4次，可以有效減少種豬的帶毒和排毒時(shí)間。最后，生物安全仍是很重要的防線。從表3我們得知，不同胎次的生產(chǎn)母豬都存在一定的野毒感染比例，為減少生產(chǎn)公豬的感染風(fēng)險(xiǎn)，必須禁止查情公豬返回公豬站，防止查情公豬成為偽狂犬病野毒傳播的媒介。

3.3 重視生長(zhǎng)肥育豬的偽狂犬病疫苗免疫，減少肥育后期的感染

由表4可知，肥育豬gE抗體陽(yáng)性率從16周開(kāi)始上升。一般來(lái)講，gE母源抗體維持時(shí)間在120 d左右[4]。如沒(méi)有野毒的感染，隨著母源抗體的消退，16周開(kāi)始gE抗體陽(yáng)性率應(yīng)該出現(xiàn)下降，不降反升說(shuō)明在13~16周這個(gè)階段有偽狂犬病野毒的感染導(dǎo)致陽(yáng)性率的上升，同現(xiàn)實(shí)生產(chǎn)相吻合?，F(xiàn)實(shí)生產(chǎn)很多豬場(chǎng)只重視母豬的免疫，往往忽視仔豬的免疫。有的豬場(chǎng)只免疫母豬，不免疫仔豬。有的豬場(chǎng)母豬免疫進(jìn)口疫苗，仔豬免疫國(guó)產(chǎn)疫苗，對(duì)仔豬偽狂犬病疫苗的選擇也比較隨意。有的豬場(chǎng)仔豬只在出生滴鼻免疫一次。隨著母源抗體的消退，肥育豬后期缺乏保護(hù)力，感染偽狂犬病野毒，在生產(chǎn)上往往出現(xiàn)呼吸道疾病，繼發(fā)細(xì)菌感染，如傳染性胸膜肺炎等，抗生素治療效果不明顯。此外，感染的肥育豬進(jìn)入后備豬群，形成循環(huán)感染，這也是部分豬場(chǎng)偽狂犬病持續(xù)存在、難于凈化的重要原因。據(jù)我們的經(jīng)驗(yàn)，在偽狂犬病防控壓力較大的現(xiàn)狀下，仔豬滴鼻一次和兩次肌注偽狂犬病活疫苗，可以有效維持陽(yáng)性場(chǎng)的生產(chǎn)穩(wěn)定，減少肥育豬的感染機(jī)會(huì)，進(jìn)而減少豬場(chǎng)的病毒載量（對(duì)一點(diǎn)式生產(chǎn)的豬場(chǎng)尤為重要），陽(yáng)性場(chǎng)獲得陰性仔豬也是有可能的。

3.4 豬偽狂犬病的防控

本次的調(diào)查結(jié)果表明豬偽狂犬病在未來(lái)一段時(shí)間仍是中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病。結(jié)合檢測(cè)豬場(chǎng)免疫程序的分析，發(fā)現(xiàn)肥育后期有偽狂犬病野毒的再感染通常執(zhí)行類似的免疫程序：小豬初生滴鼻，45 d首免，70 d二免。建議每個(gè)豬場(chǎng)根據(jù)檢測(cè)結(jié)果制定自己合適的免疫程序，考慮母源抗體的干擾作用及明確場(chǎng)內(nèi)的感染時(shí)間點(diǎn)，畢竟陽(yáng)性場(chǎng)和陰性場(chǎng)的免疫程序是有區(qū)別的。

An等在免疫Bartha K61疫苗后仍然暴發(fā)豬偽狂犬病的豬場(chǎng)分離到豬偽狂犬病毒變異株[1]，說(shuō)明該疫苗株對(duì)變異株不能提供完全的保護(hù)，可能是變異株的gB抗原表位發(fā)生了變化，導(dǎo)致了免疫失敗[10]。本次調(diào)查也發(fā)現(xiàn)免疫Bartha K61疫苗的規(guī)?；i場(chǎng)gE抗體陽(yáng)性率居高不下，提示變異株的出現(xiàn)對(duì)現(xiàn)有疫苗的保護(hù)效果提出了巨大的挑戰(zhàn)。在這種流行趨勢(shì)下，選用優(yōu)質(zhì)高效的偽狂犬病gE基因缺失的變異株活疫苗，區(qū)別自然感染或疫苗免疫的豬只，制定科學(xué)的免疫程序是預(yù)防和控制豬偽狂犬病的主要手段。