HPLC法測(cè)定天麻頭痛片中阿魏酸含量

馬傳芳 朱丹紅

摘? 要：目的：HPLC法對(duì)天麻頭痛片中的阿魏酸物質(zhì)的含量加以測(cè)定，確定該中藥藥品的質(zhì)量。方法：在HPLC的技術(shù)要求下，選擇色譜柱，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸的溶液，兩者比例為（20：80），對(duì)天麻頭痛片樣品展開(kāi)檢測(cè)。結(jié)果：在0.00961到0.07688μg范圍內(nèi)，阿魏酸物質(zhì)可保持良好的線性關(guān)系，r的數(shù)值為0.9996，實(shí)驗(yàn)的最終回收率為96.9%，RSD數(shù)值為1.8%。結(jié)論：使用HPLC的方法對(duì)天麻頭痛片展開(kāi)檢測(cè)，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單，檢測(cè)方法具有良好的重復(fù)性，該方法適用于對(duì)阿魏酸成分的定量分析。

關(guān)鍵詞：HPLC;天麻頭痛片;阿魏酸含量;測(cè)定過(guò)程

天麻頭痛片為中藥藥品，由當(dāng)歸、川芎以及天麻等六味中藥材制成該藥品，其主要功效包括散寒止痛、養(yǎng)血祛風(fēng)，一般可在治療血瘀頭痛、血虛頭痛以及風(fēng)寒頭痛的治療過(guò)程中發(fā)揮作用，在該藥品中，當(dāng)歸與川芎中的阿魏酸物質(zhì)發(fā)揮著重要的作用，因此在衡量藥品治療時(shí)，必須重點(diǎn)關(guān)注阿魏酸的具體含量，確保藥品的實(shí)際藥效正常發(fā)揮，選擇利用高效液相色譜法來(lái)測(cè)定阿魏酸物質(zhì)含量，測(cè)量過(guò)程如下：

1 材料與方法

1.1 一般材料

安捷倫1200高效液相色譜儀，VWD檢測(cè)器;紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)TU-1901;阿魏酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）;乙腈為色譜純，其余均為分析純，水為超純水;天麻頭痛片。

1.2 方法

色譜柱為安捷倫SB-C18（4.6mm×250mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸溶液（20：80），柱溫：35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm，流速1.0ml/min。

對(duì)照品溶液的制備，取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含4μg的溶液。

檢測(cè)波長(zhǎng)選擇取4μg/ml的阿魏酸對(duì)照品溶液，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)TU-1901，在250-350nm波長(zhǎng)下進(jìn)行自動(dòng)掃描，最大吸收峰在316nm，選擇此波長(zhǎng)作為阿魏酸的檢測(cè)波長(zhǎng)。

供試品溶液的制備：取天麻頭痛片藥品20片，除去包衣，研細(xì)，稱取約為0.5g，精密稱定，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理（設(shè)置頻率為40KHz，功率為250W）20min，溶解后冷卻至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻過(guò)濾，取續(xù)濾液經(jīng)由微孔濾膜之后被有效過(guò)濾，最終獲取的濾液即為實(shí)驗(yàn)所需的供試品溶液，濾液同樣需要被保存到棕色量瓶?jī)?nèi)。

陰性對(duì)照溶液的制備：按處方除當(dāng)歸、川芎外的其它幾味中藥飲片，依處方制成樣品，再按上述供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10ul，按上述色譜條件進(jìn)行操作，結(jié)果表明陰性對(duì)照溶液對(duì)樣品無(wú)干擾。

2 結(jié)果

線性關(guān)系考察：分別精密吸取上述阿魏酸對(duì)照品溶液2.5，5.0，10.0，15.0，20.0μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，阿魏酸對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為Y=26817620.11X+27479.81，r=0.9996結(jié)果表明，阿魏酸進(jìn)樣量在0.00961～0.07688mg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10μ1，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定色譜峰峰面積，結(jié)果表明，精密度良好，RSD=1.7%（n=5）。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同批樣品各5份，分別按供試品溶液制備方法操作，精密吸取各供試品溶液10μL，分別注入高效液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果樣品平均含量為0.0103mg/片，RSD=2.2%（n=5）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，按0、2、4、6、8小時(shí)間隔，分別進(jìn)樣，測(cè)定色譜峰面積，結(jié)果表明，樣品溶液在8h內(nèi)保持穩(wěn)定，RSD=1.9%（n=5）。

回收率試驗(yàn)：取本品（含量0.0103mg/片平均片重0.3105g/片）20片，除去包衣，研細(xì)，各取粉末0.25g，共5份，精密稱定，分別精密加入阿魏酸對(duì)照品溶液（8μg/ml）1.0ml，按樣品含量測(cè)定項(xiàng)下方法操作，測(cè)定，結(jié)果阿魏酸平均回收率為99.4%，RSD為1.8%。

樣品含量測(cè)定：取3批樣品，按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件，依法測(cè)定，批號(hào)170512、170604、170714阿魏酸含量分別為0.0103mg/片、0.0148mg/片、0.0132mg/片。

3 討論

阿魏酸在酸棗仁、升麻、川芎、阿魏以及當(dāng)歸藥材中具有相對(duì)較高的含量，同時(shí)也作為藥材的關(guān)鍵有效成分存在，判定阿魏酸的含量可評(píng)測(cè)相關(guān)藥品的質(zhì)量。阿魏酸能夠幫助人體抵抗血小板大量聚集的問(wèn)題，相關(guān)血小板血栓素的生成問(wèn)題也能夠被有效解決。前列腺素在該物質(zhì)的影響可具有更強(qiáng)的活性，因此可以起到緩解人體血管痙攣以及鎮(zhèn)痛的作用。該物質(zhì)在制備控制白細(xì)胞以及治療心腦血管類疾病的藥品中被使用，屬于關(guān)鍵原料，除了有抗炎、影響淋巴細(xì)胞的作用外，還在人體中起到保護(hù)皮膚以及健美的作用?？紤]到阿魏酸的重要藥用作用，必須保障其在藥品中的含量，因此本身使用高效液相色譜方法高效、便捷以及能精準(zhǔn)確認(rèn)該物質(zhì)的含量。

檢測(cè)環(huán)節(jié)中，對(duì)流動(dòng)相比例、檢測(cè)波長(zhǎng)、超聲時(shí)間、實(shí)驗(yàn)所用溶劑、處理樣品所用的方法等進(jìn)行了研究。能夠有效處理樣品的方法主要包括超聲與回流兩種，最終確定利用甲醇進(jìn)行超聲處理工作時(shí)，處理時(shí)間為20min時(shí)，可以獲取完全且簡(jiǎn)便的提取效果。

本方法靈敏、簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

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