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    基于紅外光譜技術(shù)的淀粉種類的快速鑒別研究

    2019-04-01 03:02張金亞李海洋孟紅娟閨君廉
    現(xiàn)代園藝·綜合版 2019年5期
    關(guān)鍵詞:紅外光譜鑒別淀粉

    張金亞 李海洋 孟紅娟 閨君廉

    摘要:研究淀粉種類的鑒別方法。分別對8種淀粉的透明度、直鏈和支鏈的含量及比值,紅外光譜進(jìn)行了測定。結(jié)果表明:8種淀粉的透明度和直鏈支鏈比的數(shù)值差異相對比較明顯,因此可以將這兩項數(shù)值作為鑒別淀粉的參考值。

    關(guān)鍵詞:紅外光譜;淀粉;鑒別

    目前,市場上的淀粉原料主要分為禾谷類作物、薯類作物、豆類作物以及其他作物。常見主要有玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、紅薯淀粉和大米淀粉等,不同種類的淀粉價格差別較大,有的相差高達(dá)10倍以上f,1。在實(shí)際生產(chǎn)中上會有不法商家將廉價淀粉摻入高品質(zhì)淀粉中以次充好,欺騙消費(fèi)者日,但是不同種類淀粉顆粒的外觀和普通物化指標(biāo)差別不明顯,無法辨認(rèn)。

    目前真假鑒別方法有感官法和理化鑒別法。感官方法是通過淀粉的觸感和口感鑒別;形態(tài)法鑒別的依據(jù)是根據(jù)不同植物的淀粉粒在大小、形態(tài)、類型、層紋、臍點(diǎn)位置以及偏光下的形態(tài)等方面都各具特征,依據(jù)這些特征??膳卸ㄆ渲参飦碓矗饕歉鶕?jù)淀粉粒的特殊結(jié)構(gòu)在正交偏光下呈現(xiàn)消光十字的特征;在國內(nèi)有利用紅外和SVM相結(jié)合的方法準(zhǔn)確將淀粉進(jìn)行真假與種類鑒別:利用短波近紅外光譜技術(shù)對淀粉種類進(jìn)行鑒別,分別采用馬氏距離判別法、C-支持向量機(jī)(C-SVM)、v-支持向量機(jī)(v-SVM)建立淀粉種類鑒別的短波近紅外光譜模型[3]。國外用SDS-PAGE分析淀粉中的蛋白質(zhì)來鑒別不同種類的淀粉[4],也可以用液相做淀粉鑒別[5]。但這些方法比較復(fù)雜。因此,需要一種快速、簡單的方法來鑒別各種淀粉。淀粉種類鑒別的研究將會規(guī)范淀粉市場,減少以次充好或以劣冒優(yōu)的不法行為,使消費(fèi)者的利益得到保障。

    1 材料與方法

    1.1 材料、實(shí)驗儀器及試劑

    1.1.1 材料:玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、豌豆淀粉、紅苕淀粉、土豆淀粉、木薯淀粉、蕨根淀粉,冷凍干燥、粉碎、過篩(120目),然后密封于玻璃瓶內(nèi),置冰箱中備用。

    1.1.2 試劑:葡萄糖分析純,中國醫(yī)藥公司北京采購供應(yīng)站經(jīng)銷;直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品,上海源葉生物科技有限公司;支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品,上海源葉生物科技有限公司;無水乙醇、碘化鉀、碘、石油醚、堿性蛋白酶、氫氧化鈉、氫氧化鉀、濃鹽酸、濃硫酸、蒽酮、高氯酸,天津天力。

    1.1.3 儀器:紫外分光光度計,日立U-2900;Nicolet6700紅外光譜儀,美國Thermo公司;FA2004N分析天平、離心機(jī),科大創(chuàng)新股份有限公司;水浴鍋,上海安亭;烘箱、電爐,北京科偉。

    1.2 方法

    1.2.1 淀粉的純化。稱取淀粉1008,通過石油醚浸泡和堿性蛋白酶水解得到脫脂脫蛋白的淀粉。

    1.2.2 透明度測定。在620nm波長下測定淀粉糊的透光率。

    1.2.3 雙波長測直支比。①取1mg/mL直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液,在紫外可見分光光度計上進(jìn)行400~960nm光譜掃描,繪制出直鏈淀粉吸收曲線[4]。制備濃度為0、4、12、20、28、36μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。②取 1 mg/mL支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液,操作同直鏈淀粉。在同一坐標(biāo)內(nèi)獲得支鏈淀粉可見光波段吸收曲線,并制備濃度為0、60、100、140、180、220μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。③樣品處理:精確稱取脫脂脫糖樣品0.100g,在50mL燒杯中加入1mL無水乙醇潤濕,加0.5mol/L KOH溶液10mL,在80(±1)℃水浴中分散溶解10min,加雙蒸水定容至50.OOmL,混勻。吸取樣品液2.50mL,加20~30mL雙蒸水,用0.1mol/L HCL調(diào)pH值至3.0,加0.5mL碘試劑,定容至50.00mL,混勻,靜置20min[5]。④樣品測定及結(jié)果計算。分別以雙蒸水和加入0.1mol/L HCL和碘試劑的雙蒸水為空白,用1cm比色杯,測定吸光度值。再根據(jù)回歸方程分別求出樣品溶液中直鏈淀粉濃度Y直(μg/mL)和支鏈淀粉濃度Y支(μg/mL),計算試驗原料中直鏈淀粉、支鏈淀粉和總淀粉的含量:

    直鏈淀粉(%)=Y直×50×50/(2.5×0.1000×1000000);支鏈淀粉(%)=Y支×50×50/(2.5×0.1000×1000000);淀粉含量(%)=直鏈淀粉+支鏈淀粉;回收率(%)=(混和后測定量-原料樣品中的直或支鏈淀粉含量)/淀粉標(biāo)準(zhǔn)品加入量×100。

    1.2.4 紅外光譜掃描。淀粉樣品不作任何處理直接進(jìn)行紅外光譜采集。測量時將樣品裝入樣品杯,采用漫反射光譜法,掃描范圍4000~9999cm-1,分束器CaF2,分辨率8cm-1,掃描次數(shù)為64次。每個樣品重復(fù)掃描3次,取平均值[6]。

    2 試驗結(jié)果分析

    2.1 透明度測定

    在620nm波長下測定淀粉糊的透光率,以蒸餾水為空白,設(shè)蒸餾水的透光率為100%。

    淀粉糊透明度的差異是由于當(dāng)一束光碰到淀粉粒子時,粒子對光線的反射、折射以及透射程度不同引起的。各種淀粉的透光率見表1。直鏈淀粉含量少可以使得淀粉的透明度好[7],由表可以看出透光率最大的淀粉是玉米淀粉,透光率最小的是蕨根淀粉。

    淀粉的透明度影響因素有以下2點(diǎn):一是直鏈淀粉含量影響透光率。直鏈淀粉分子量小,易相互締合使淀粉回生,光線發(fā)生反射,透明度下降。二是淀粉粒的大小:大的淀粉顆粒較易吸水膨脹,糊化后所形成的糊液比較透明。三是淀粉中磷的含量:較高的含磷量使淀粉分子帶同種電荷,導(dǎo)致分子之間相互排斥而增大光線的穿透力,糊液的透明度因而得以提高[8]。蕨根透光率低的原因可能有2點(diǎn):一是其原本顏色為黑褐色,不利于透光;二是由于其難溶,造成其含量過低。

    2.2 雙波長則直支比

    雙波長法扣除了兩類淀粉吸收背景的相互影響,消除了這兩者引起的誤差,克服了單波長法的局限性,能大幅度提高測定的靈敏度、選擇性和準(zhǔn)確度,可以同時測定直、支鏈淀粉的含量,進(jìn)而計算總淀粉含量[9]。在實(shí)驗采用0.5mol/L的KOH溶液通過沸水浴來溶解淀粉,溶解過程中,淀粉顆粒吸水溶脹,直鏈淀粉和支鏈淀粉之間的氫鍵被打斷,2種淀粉相互分散開。

    2.2.1 吸收光譜圖及測定波長的選擇。將直鏈淀粉和直鏈淀粉的掃描液在紫外可見分光光度計上進(jìn)行400~960nm光譜掃描,分別得到直鏈淀粉和支鏈淀粉的吸收曲線。直鏈淀粉和支鏈淀粉的最大吸收波長分別是647.5nm和534nm。

    2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。用紫外分光光度計在測定波長647.5nm,參比波長707nm處分別測定直鏈淀粉的吸光度值。以吸光度差對直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液的濃度進(jìn)行一元線性回歸,得到直鏈淀粉的回歸方程:y=0.0139x+2.7E-5(y的單位為ug/mL),相關(guān)系數(shù)R2=0.9997。以直鏈淀粉的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度差為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2.2.3 支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。用紫外分光光度計在測定波長534nm,參比波長494nm處分別測定支鏈淀粉的吸光度值。以吸光度差對支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液的濃度進(jìn)行一元線性回歸,得到支鏈淀粉的回歸方程:y=0.0024x+0.0056(Y的單位為ug/mL),相關(guān)系數(shù)R2=0.9994。以支鏈淀粉的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度差為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2.2.4 直鏈淀粉和支鏈淀粉的含量。根據(jù)樣品測得的ΔA直和ΔA支分別計算出樣品中直鏈淀粉和支鏈淀粉的含量以及支直比。

    2.3 紅外測各種淀粉

    紅外吸收峰的位置與強(qiáng)度反映了分子結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn),可以用來鑒別未知物的化學(xué)基團(tuán);由上圖可以看出,由于都是淀粉,所以出峰幾乎一樣,很難辨別。但是蕨根淀粉在1083cm-1左右處沒有峰,由這點(diǎn)可以將蕨根淀粉與其他淀粉區(qū)分出來。有實(shí)驗結(jié)果表明:對淀粉的光譜圖進(jìn)行處理,得到紅外光譜數(shù)據(jù),在SVM工具包可以對樣品進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒別[10]。

    3 結(jié)論與討論

    本試驗結(jié)果表明:透光率在1以下的是蕨根淀粉;透光率在1~5之間的是土豆淀粉、木薯淀粉和紅苕淀粉;透光率在14~15之間的是大米淀粉和小麥淀粉,其中透光率在15左右的是小麥淀粉;透光率在20~30之間的是玉米淀粉和豌豆淀粉,相對較大的是玉米淀粉。直鏈與支鏈淀粉比值進(jìn)一步判斷,直鏈淀粉含量在20%左右的是紅苕淀粉;在15%左右的是土豆淀粉;支直比在6~7之間的是木薯淀粉。各種淀粉的紅外圖譜基本接近,只能區(qū)別出旅根淀粉,其它淀粉需要用SVM數(shù)模才能進(jìn)行區(qū)別。

    本試驗中未知的單一淀粉可以根據(jù)其透光率和直支比相結(jié)合做出鑒別。但是,在對于混合淀粉的鑒別目前還沒有快速有效的方法,還需更深入細(xì)致的研究和探討。

    參考文獻(xiàn):

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