胚系基因BRCA1/2突變及其相關(guān)臨床病理特征

李輝斌 吳坤河 凌月仙 張江宇

(廣東省婦幼保健院 病理科，廣東 廣州 511400)

乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene，BRCA)是重要的抑癌基因，包括BRCA1和BRCA2。BRCA1/2基因是評(píng)估乳腺癌、卵巢癌和其他相關(guān)癌癥的重要生物標(biāo)志物，也是影響患者個(gè)體化治療方案選擇的生物標(biāo)志物，所以BRCA基因檢測(cè)具有重要臨床意義[1]。本研究以二代測(cè)序?yàn)榧夹g(shù)手段，分析16例胚系基因BRCA1/2突變情況及其不同的臨床病理特征。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 本研究為回顧性分析，選擇2017年1月至2019年3月廣東省婦幼保健院通過高通量測(cè)序檢測(cè)確定攜帶胚系基因BRCA1/2突變患者16例，并收集患者相關(guān)年齡、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)狀態(tài)以及ER、PR、HER-2狀態(tài)等臨床病理資料。所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法 采集患者外周靜脈血5ml，使用乙二胺四乙酸抗凝管低溫(4℃)運(yùn)輸并在4天內(nèi)進(jìn)行基因檢測(cè)。標(biāo)本采用全自動(dòng)核算提取儀進(jìn)行DNA提取。取1μl DNA進(jìn)行Illumina標(biāo)準(zhǔn)文庫構(gòu)建，形成可進(jìn)行高通量測(cè)序的文庫，經(jīng)檢測(cè)合格后采用Roche NimbleGen雜交捕獲技術(shù)進(jìn)行BRCA1、BRCA12基因目標(biāo)序列捕獲，捕獲所得的外顯子文庫通過實(shí)施熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(real-time quantitative PCR,QPCR)進(jìn)行文庫精確定量，然后進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。其中全自動(dòng)核酸提取儀和DNA抽提試劑盒購自美國KAPA公司，高通量測(cè)序儀Nextseq 500購自美國Illumina公司。

2 結(jié)果

2.1BRCA1/2基因突變位點(diǎn)及突變類型 本研究16例胚系基因BRCA1/2突變的患者，共檢測(cè)到BRCA1突變位點(diǎn)9個(gè)，其中c.4837A>G、c.3548A>G、c.3113A>G、c.2612C>T 這4個(gè)位點(diǎn)錯(cuò)義突變最為常見，其次是同樣4個(gè)位點(diǎn)c.C2612T、c.A3113G、c.A3548G、c.A4837G點(diǎn)突變，這4個(gè)位點(diǎn)上的兩種突變類型均為良性突變，以及1個(gè)c.5335delC位點(diǎn)的移碼突變，該突變?yōu)橹虏⊥蛔?。檢測(cè)到BRCA2突變位點(diǎn)8個(gè)，包括c.7397T>C、c.1114A>C、c.865A>C、c.2971A>G、c.10234A>G錯(cuò)義突變和c.T7397C、c.A1114C、c.T5836C點(diǎn)突變，其中c.7397T>C位點(diǎn)錯(cuò)義突變頻率最高，c.T5836C點(diǎn)突變是一個(gè)意義不明的突變，其余突變均為良性突變(表1)。

表1 16例胚系基因BRCA1/2突變位點(diǎn)及突變類型

2.2BRCA1/2基因突變攜帶者臨床相關(guān)病理學(xué)特征 16例BRCA1/2基因突變攜帶者，其中3例確診為卵巢腫瘤，3例乳腺導(dǎo)管原位癌，9例乳腺浸潤性癌，另有1例因存在乳腺癌家族史進(jìn)行BRCA1/2基因突變檢測(cè)。9例乳腺浸潤性癌中同時(shí)攜帶有BRCA1和BRCA2基因突變患者7例，攜帶單一BRCA2突變患者2例，其中1例雙側(cè)乳腺浸潤癌，發(fā)現(xiàn)BRCA2意義不明點(diǎn)突變，另1例三陰乳腺癌，發(fā)現(xiàn)BRCA1致病移碼突變(表2)。

3 討論

BRCA1和BRCA2作為腫瘤抑制蛋白，在細(xì)胞周期、DNA損傷修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路中發(fā)揮著重要作用。BRCA1/2功能的缺失，會(huì)影響正?；蚪M的穩(wěn)定性，進(jìn)而增加乳腺癌發(fā)生的概率[1]。目前，研究表明5%～10%的乳腺癌和15%～22%卵巢癌是由于BRCA1/2突變導(dǎo)致的[4]。BRCA1/2基因致病突變，使女性發(fā)生乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)提高5倍，發(fā)生卵巢癌風(fēng)險(xiǎn)提高10～30倍[5]。本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)16例BRCA1/2基因突變，研究胚系基因BRCA1和BRCA2突變位點(diǎn)及其相關(guān)臨床病理特征，為乳腺癌、卵巢癌等相關(guān)癌癥臨床診斷與治療提供一定的依據(jù)。

表2 16例胚系基因BRCA1/2突變攜帶者相關(guān)病理學(xué)特征

注：“”代表未分級(jí)；“+”代表陽性；“-”代表陰性

BRCA1/2基因突變類型包括移碼突變、無義突變、錯(cuò)義突變、同義突變及剪切突變5種類型。其中移碼突變、無義突變和剪切突變3種類型，其共同特點(diǎn)為提前終止蛋白質(zhì)編碼合成[6]。針對(duì)BRCA1/2基因，一般情況下錯(cuò)義突變或者同義突變均不會(huì)影響RNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白功能。本研究發(fā)現(xiàn)16例BRCA1/2基因突變攜帶者中，突變類型主要以錯(cuò)義突變和點(diǎn)突變?yōu)橹?，為良性突變，僅發(fā)現(xiàn)1個(gè)明確致病移碼突變和1個(gè)意義不明點(diǎn)突變。本研究發(fā)現(xiàn)c.4837A>G、c.3548A>G、c.3113A>G、c.2612C>T 4個(gè)位點(diǎn)為BRCA1基因的常見突變位點(diǎn)，而c.7397T>C位點(diǎn)為BRCA2基因的常見突變位點(diǎn)。

乳腺癌是我國女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且具有年輕化趨勢(shì)，中國乳腺癌患者平均發(fā)現(xiàn)年齡為48.7歲。早發(fā)性乳腺癌較普通乳腺癌具有更廣的胚系突變頻譜和更高的突變。胚系基因BRCA1/2突變與遺傳性乳腺癌密切相關(guān)[7]。但BRCA突變只能解釋20%～40%的家族性乳腺癌，而且在不同人種間存在差異。乳腺癌的危險(xiǎn)因素還包括月經(jīng)初潮早、初產(chǎn)年齡晚、未哺乳、停經(jīng)晚、未婚育、高脂飲食、飲酒、吸煙、長期激素替代治療、體重指數(shù)超標(biāo)、環(huán)境輻射、乳腺良性疾病史等。研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1、BRCA2胚系突變的攜帶者平均發(fā)病年齡比無BRCA突變攜帶者提前7年，且同時(shí)攜帶BRCA1和BRCA2突變的發(fā)病年齡較單一BRCA1或BRCA2突變的發(fā)病年齡提前[8, 9]。與年老乳腺癌相比，遺傳性乳腺癌發(fā)病年齡較早，受環(huán)境因素影響相對(duì)較小，遺傳因素起著更為重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn)，在9例乳腺浸潤性癌患者中，同時(shí)攜帶有BRCA1和BRCA2基因突變患者7例，攜帶單一BRCA2突變患者2例，因樣本量少,二者發(fā)病年齡并無明顯差異。本研究中的兩例BRCA基因非良性突變，1例BRCA2意義不明點(diǎn)突變?yōu)殡p側(cè)乳腺浸潤癌，另1例BRCA1致病移碼突變?yōu)槿幦橄侔茰y(cè)胚系基因BRCA1/2非良性突變，可能與乳腺癌惡性程度密切相關(guān)。

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，早起卵巢癌多無明顯癥狀，一旦發(fā)現(xiàn)多為晚期，是婦科惡性腫瘤死亡的主要原因。BRCA基因突變?cè)诼殉舶┲械陌l(fā)生率為5.8%～24.8%，BRCA1和BRCA2基因突變攜帶者在70歲時(shí)卵巢癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)分別為18.0%～54.0%和2.4%～19.0%[10]。本研究中共發(fā)現(xiàn)3例攜帶BRCA1/2突變的卵巢腫瘤患者，在所有BRCA突變攜帶者中約占18%，其中BRCA2突變頻率為3次，BRCA1突變頻率僅1次。

目前，BRCA1和BRCA2胚系突變的乳腺癌患者對(duì)多聚核糖聚合酶抑制劑和鉑類為主的化療方案較敏感[11]，可用于指導(dǎo)化療方案的制定和改善遺傳性乳腺癌的預(yù)后。2013年歐洲內(nèi)科腫瘤學(xué)會(huì)(the European Society for Medical Oncology，ESMO)指出，BRCA基因成為卵巢癌中新的研究熱點(diǎn)。而聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶[poly(ADP-ribose)polymerase，PARP]抑制劑與BRCA基因有“合成致死性”效應(yīng)(即：當(dāng)兩個(gè)非致死基因突變單獨(dú)發(fā)生時(shí)，細(xì)胞并不發(fā)生損傷或死亡；而兩個(gè)非致死基因突變同時(shí)發(fā)生時(shí)，則可以引起細(xì)胞的死亡)，也使得BRCA基因突變型卵巢癌有了新的治療方案，并已于2014年批準(zhǔn)上市。國外研究還發(fā)現(xiàn)，BRCA基因突變型卵巢癌相對(duì)BRCA基因野生型卵巢癌，具有對(duì)鉑類藥物高敏感性以及無病間期、總生存時(shí)間和無瘤生存時(shí)間更長的特點(diǎn)[12]。

綜上所述，乳腺癌、卵巢癌的治療方式仍以手術(shù)為主，藥物治療為輔，但治療效果個(gè)體及地區(qū)差異較大，BRCA1和BRCA2基因的深入研究可以為我們更好地解釋生命現(xiàn)象，并有助于對(duì)腫瘤治療提出新的診斷思路及治療方案。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代的到來，靶向治療為BRCA基因突變型患者帶來了新的治療手段，與藥物相匹配的伴隨診斷也為其個(gè)性化治療提供良好的指導(dǎo)作用。盡管BRCA基因突變型乳腺癌具體發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步研究，但隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，其發(fā)病機(jī)制將得到更全面的研究和解釋，更多有效的靶向藥物將逐漸被開發(fā)和利用，從而為BRCA基因突變型患者提供更為有效的個(gè)體化治療。