苦皮藤不同部位有效成分提取研究

程茂高，喬卿梅，王文靜，魏志華，趙 青

(河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

苦皮藤為衛(wèi)矛科南蛇藤屬多年生藤本植物，廣泛分布于我國長江流域和黃河流域各省，具有祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)、解毒殺蟲等功效，是重要的中藥資源，臨床上可用于治療頭癬、跌打、癰疽等。近年來，因具有抗腫瘤活性、神經(jīng)保護(hù)活性以及在自身免疫性疾病中的作用，苦皮藤受到越來越多的關(guān)注[1-2]?？嗥ぬ偬崛∥镞€具有殺菌活性和殺植物線蟲活性[3]。其殺蟲成分是以β-二氫沉香呋喃為骨架的多元醇酯類次生代謝產(chǎn)物，具有拒食、麻醉、熏蒸和毒殺等作用，主要分布在根皮中,葉子、果、木質(zhì)部也有。目前對于苦皮藤的化學(xué)成分、殺蟲機(jī)理與作用方式、農(nóng)藥制劑等的研究都取得了一定的成果[4-5]，但對其提取工藝的研究還不深入[6-7]。本研究以苦皮藤素 A 的含量為標(biāo)準(zhǔn)，對苦皮藤根皮、莖皮、假種皮、種子、葉等不同部位的有效成分提取工藝進(jìn)行研究，望為其有效利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

苦皮藤Celastrusangulatus采集于河南南陽寶天曼，經(jīng)過本課題組鑒定?？嗥ぬ偎谹標(biāo)準(zhǔn)品由河南省生物技術(shù)開發(fā)中心提供，含量≥98%，化學(xué)名稱為1β,2β-二乙酰氧基-4α,6α-二羥基-8α,15-二異丁酰氧基-9β-苯甲酰氧基-β-二氫沉香呋喃，分子式C34H46O13，相對分子質(zhì)量662.7。Alliance-e2695型高效液相色譜儀(新加坡沃特斯公司)，HH-4S電熱恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市峰華儀器廠)，RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(常州市智陽機(jī)械設(shè)備有限公司)，SHB-95B循環(huán)水式真空泵(鄭州市長城科學(xué)器材有限公司)，BSA224S-CW電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)，色譜甲醇(天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)，其它試劑為市售分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1苦皮藤有效成分的提取

材料的提取采用回流提取法。將苦皮藤的根皮、莖皮、假種皮、種子、葉分別在60℃ 烘箱中烘干，粉碎后過40目篩。稱取50g粉末干樣置于無紡布小袋內(nèi)，放入1000mL圓底燒瓶中，分別加入適量的甲醇、石油醚和氯仿后，浸泡1h，水浴條件下回流提取，過濾。殘渣重復(fù)提取2次，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，濃縮液置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸發(fā)至無溶劑，得提取物，4℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2苦皮藤素A的含量測定

將提取物分別用甲醇溶解后，濾去不溶物，收集濾液，準(zhǔn)確量取一定量的濾液稀釋一定倍數(shù)，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜過濾，得待測樣品，HPLC 測定其含量。色譜條件：Lab Tech C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流動相甲醇水=73；進(jìn)樣量：10μL；流速：1.0m L/min；檢測波長232nm。

苦皮藤素A得率值為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”，利用SPSS20軟件 LSD法進(jìn)行分析，不同大寫字母表示處理間差異極顯著(P<0.01)，不同小寫字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。下同。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取工藝對根皮提取率的影響

從表1可以看出，不同溶劑對苦皮藤素A 的提取率有顯著影響，提取能力為甲醇>石油醚>氯仿。使用甲醇作為提取溶劑時，適當(dāng)提高提取溫度，可以利用較低的料液比在較短的時間內(nèi)取得較高的提取率；而對于石油醚，則需要通過提高料液比、降低提取溫度、延長提取時間的途徑來提高苦皮藤素A 的提取率。綜合考慮，選用甲醇作為苦皮藤根皮的提取溶劑具有更高的經(jīng)濟(jì)性和安全性。

圖1 苦皮藤素A標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖

表1 不同提取工藝下根皮中苦皮藤素A得率

2.2 苦皮藤不同部位有效成分提取率

表2 苦皮藤不同部位有效成分提取率

3 討論與結(jié)論

苦皮藤各部位所含化學(xué)成分存在差異，其生理作用也各不相同。陳玲等[8]從苦皮藤根皮石油醚提取物中分離到7個化合物，朱文麗等[9]從苦皮藤根皮醇提取物中鑒定出11個化合物，龔雪龍[10]從苦皮藤根皮的乙醇提取物中分離得到 17個化合物，張海艷等[1]從苦皮藤種子的石油醚回流提取液中分離得到6個β-二氫沉香呋喃多醇酯類化合物，楊征敏等[11]從苦皮藤假種皮的25%醇提取物中分類鑒定出3種具有殺菌活性的化合物。本研究以苦皮藤素A作為苦皮藤活性成分指標(biāo)時，按照料液比16加入甲醇作為提取溶劑，在適當(dāng)?shù)母邷貤l件(如70-80 ℃)下提取2 h，提取3次，可以從苦皮藤的根皮、莖皮、假種皮、種子、葉中提取較高含量的有效成分。不同溶劑對苦皮藤不同部位提取的結(jié)果提示，苦皮藤素A在苦皮藤中的分布：莖皮>葉>假種皮>種子。