胸腹水脫落細(xì)胞制片及影響因素的分析

王立山 車 超 李占林 燕東陽 姜曉靜

（遼寧省健康產(chǎn)業(yè)集團(tuán)鐵煤總醫(yī)院，遼寧 鐵嶺 112700）

細(xì)胞病理學(xué)因其具有準(zhǔn)確率高、診斷速度快、痛苦輕微、檢查費(fèi)用低、操作簡單方便等特點(diǎn)，而廣泛應(yīng)用于臨床中，現(xiàn)階段已成為了非常重要的一項(xiàng)診療技術(shù)[1]。在實(shí)際的細(xì)胞病理學(xué)檢查中，細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量會(huì)對診斷的準(zhǔn)確性造成直接影響。但是現(xiàn)階段因?yàn)槭芗夹g(shù)原因的影響，降低了細(xì)胞學(xué)的制片質(zhì)量，進(jìn)而對細(xì)胞學(xué)診斷造成直接影響。本研究主要分析了胸腹水脫落細(xì)胞的制片及影響因素，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇我院2016年2月至2017年2月收治的進(jìn)行常規(guī)檢查和脫落細(xì)胞檢查的胸腹水標(biāo)本56份。

1.2 方法：標(biāo)本送檢后應(yīng)分別進(jìn)行30 min、24 h、48 h和72 h的靜置，然后分別將部分上清液去除，將剩余的標(biāo)本混勻，將其放入到合理的試管內(nèi)，進(jìn)行10～20 min離心處理，轉(zhuǎn)速設(shè)置為每分鐘2000轉(zhuǎn)，將試管翻轉(zhuǎn)，將全部上清液去除，讓其盡可能沿管壁流下，將盡管壁液體成分。試管應(yīng)繼續(xù)保持倒置狀態(tài)，選擇一次性吸管吸取一定量的試管底部離心物，并將其放置在玻片中下2/3處，選擇吸管均勻涂片。離心物的吸取一定要適量，防止涂片厚薄不均勻。在實(shí)際的操作中，試管口的方向應(yīng)始終保持朝下，切勿朝上，防止試管壁上所殘留的水分回流到試管底部。如果水分較多，在進(jìn)行涂片固定時(shí)則可能讓細(xì)胞脫落。涂片制備好后，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行固定和染色。選擇毛細(xì)管吸取數(shù)張細(xì)胞上層涂片，選擇一涂片放置在制片臺的水平支架上，快速滴加濃度為95%的乙醇，在實(shí)際的固定過程中，固定液應(yīng)始終布滿全片，并選擇另一涂片快速投入到固定缸內(nèi)，缸內(nèi)具有濃度為95%的乙醇，固定時(shí)間均為10 min，對細(xì)胞的有形成分?jǐn)?shù)量進(jìn)行觀察。選擇一涂片在干燥后1 min內(nèi)進(jìn)行瑞姬氏染色；同時(shí)選擇水平濕固定涂片進(jìn)行蘇木素-伊紅（HE）染色，對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的退變情況進(jìn)行觀察。

1.3 臨床觀察指標(biāo)：①細(xì)胞數(shù)量的分布情況：如果胸腹水常規(guī)有核細(xì)胞的總數(shù)＞0.2×109/L，則判斷為細(xì)胞分布密集或散在“+”；其細(xì)胞分布荒涼或稀少為“-”[2]。②細(xì)胞退變分級的判斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：正常間皮細(xì)胞內(nèi)存在中高度細(xì)胞退變，核腫脹，細(xì)胞內(nèi)存在空泡擴(kuò)大，細(xì)胞體積顯著增加，核膜不清晰，染色變淡，染色質(zhì)顆粒變粗，氣球樣變則表示“+”；正常間皮細(xì)胞存在輕微細(xì)胞退變，細(xì)胞內(nèi)存在液化空泡，細(xì)胞體積輕微增加，細(xì)胞核形態(tài)和大小正常則表示“-”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：選擇SPSS軟件來統(tǒng)計(jì)和分析本實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料選擇卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料則選擇t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 制片固定方式對細(xì)胞數(shù)量的影響：水平濕固定結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，46份標(biāo)本為+，10份標(biāo)本為-；垂直濕固定結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，30份標(biāo)本為+，26份標(biāo)本為-；在細(xì)胞成分保留方面，水平濕固定顯著優(yōu)于垂直濕固定，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 固定染色法對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響：水平濕固定HE染色結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，4份標(biāo)本為+，52份標(biāo)本為-；干燥法瑞姬氏染色結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，30份標(biāo)本為+，26份標(biāo)本為-；在對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響方面，水平濕固定HE染色顯著優(yōu)于干燥后瑞姬氏染色，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 固定染色法對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響

3 討 論

現(xiàn)階段在發(fā)現(xiàn)癌前病變、診斷癌癥以及療效觀察等工作中，胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查的應(yīng)用非常廣泛，其特點(diǎn)主要為患者痛苦輕微、準(zhǔn)確性高等，現(xiàn)階段臨床中在早期發(fā)現(xiàn)腫瘤以及防癌普查時(shí)，胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查已成為了一項(xiàng)非常重要的手段。

在開展胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)，首先應(yīng)對制片質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制，進(jìn)而來保證胸腹水脫落細(xì)胞學(xué)檢查的準(zhǔn)確性，為疾病的診斷提供科學(xué)依據(jù)[4]。在常規(guī)制作胸腹水脫落細(xì)胞涂片時(shí)，主要步驟包括離心、涂片、固定以及染色等，所需時(shí)間大約為40 min，而且收集的細(xì)胞數(shù)量較少，在去除殘液時(shí)會(huì)隨之去除大量的細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致漏診。在收集細(xì)胞時(shí)，選擇收集器能讓細(xì)胞收集的時(shí)間顯著縮短，只需2～3 min就可完成標(biāo)本收集工作，涂片的細(xì)胞成分較多，基本上能收集到送檢標(biāo)本內(nèi)的所有細(xì)胞，防止細(xì)胞收集過少而引起的漏診，讓診斷的準(zhǔn)確性顯著提高。通過制片固定能讓細(xì)胞形態(tài)得以有效保持。如果制片技術(shù)較差，如離心轉(zhuǎn)速不合理則會(huì)減少成分沉渣；如果吸收細(xì)胞層的血液較多，則會(huì)減少其他的細(xì)胞成分；如果涂片的厚薄不均勻，則會(huì)對染色造成影響，在進(jìn)行制片固定時(shí)讓細(xì)胞成分出現(xiàn)脫落等。對細(xì)胞成分進(jìn)行有效保留，讓其丟失有效減少，是降低假陰性的主要步驟之一；本研究中，水平濕固定結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，46份標(biāo)本為+，10份標(biāo)本為-；垂直濕固定結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，30份標(biāo)本為+，26份標(biāo)本為-；在細(xì)胞成分保留方面，水平濕固定顯著優(yōu)于垂直濕固定，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；結(jié)果顯示垂直濕固定導(dǎo)致的細(xì)胞成分流失到細(xì)胞荒涼、稀少的標(biāo)本數(shù)更多，也是導(dǎo)致漏診和誤診的主要原因。在進(jìn)行制片時(shí)，要想保證其質(zhì)量理想，細(xì)胞結(jié)構(gòu)就應(yīng)保證清晰，核內(nèi)結(jié)構(gòu)應(yīng)比較清楚，核漿色澤應(yīng)比較分明。本研究中，水平濕固定HE染色結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，4份標(biāo)本為+，52份標(biāo)本為-；干燥法瑞姬氏染色結(jié)果顯示，56份標(biāo)本中，30份標(biāo)本為+，26份標(biāo)本為-；在對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響方面，水平濕固定HE染色顯著優(yōu)于干燥后瑞姬氏染色，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；輕微的細(xì)胞退化變形能讓細(xì)胞核的形態(tài)和大小保持正常，也不會(huì)因?yàn)橥俗兌鴮?dǎo)致誤診，但是中高度退變則可能因?yàn)橥嘶冃远鴮㈤g皮細(xì)胞誤診為癌細(xì)胞，導(dǎo)致假陽性。所以選擇瑞姬氏染色時(shí)，在涂片后應(yīng)及時(shí)進(jìn)行固定處理。

在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)快速完善和更新的過程中，自動(dòng)化體液脫落細(xì)胞制片開始逐漸代替手工法，進(jìn)而也讓胸腹水的陽性診斷率得到了有效提高。然而對于基層醫(yī)院來講，在采集到體液脫落細(xì)胞時(shí)，應(yīng)及時(shí)送檢，而且還應(yīng)加強(qiáng)制片質(zhì)量的控制，選擇水平濕固定不但能讓細(xì)胞成分流失和細(xì)胞退變的人為因素減少，讓交叉污染有效減少，而且還能讓診斷符合率顯著提高。