C-erbB-2、ETS1、p53在子宮內(nèi)膜癌中的表達及其與臨床特征的關(guān)系

王丹，秦珍珠，梁運霞，張玉文

商丘市第一人民醫(yī)院病理科，河南 商丘 4761000

子宮內(nèi)膜癌是發(fā)生于子宮內(nèi)膜上的一種上皮性惡性腫瘤，病死率僅次于卵巢癌和宮頸癌，而發(fā)病率僅次于宮頸癌，中國每年約有20萬新發(fā)子宮內(nèi)膜癌病例，隨著社會經(jīng)濟發(fā)展、生活條件的改善，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率仍不斷上升[1-2]。子宮內(nèi)膜癌與原癌基因失活、抑癌基因失活或突變等密切相關(guān)。研究顯示，C-erbB-2、成紅細胞特異性轉(zhuǎn)化 因 子 1（erythroblast transformation specific 1，ETS1）屬于原癌基因，在胃癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、結(jié)腸癌等腫瘤患者中的陽性表達率明顯升高，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[3-4]。p53是人類腫瘤中最常發(fā)生突變的抑癌基因，具有抑制細胞增殖、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和誘導(dǎo)凋亡等作用，但該基因在失活后可發(fā)生突變，失去正常的抑癌作用，使細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[5]。因此，本研究通過觀察子宮內(nèi)膜癌患者C-erbB-2、ETS1、p53的陽性表達水平，分析其與臨床特征的關(guān)系，旨在為指導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌臨床治療、療效及預(yù)后評估等方面提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選取2016年6月到2018年6月在商丘市第一人民醫(yī)院接受婦科手術(shù)切除的子宮內(nèi)膜癌患者的病理組織標本。納入標準：①所有患者均經(jīng)病理證實為子宮內(nèi)膜癌[6]；②臨床資料完整。排除標準：術(shù)前接受放療、化療、性激素類藥物治療的患者。依據(jù)納入和排除標準，共納入128例子宮內(nèi)膜癌患者的病理組織標本，作為觀察組，患者年齡38～75歲，平均年齡為（51.69±6.89）歲；國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟大會（Intemational Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）病理分期：I期66例，Ⅱ期42例，Ⅲ期17例，Ⅳ期3例；分化程度：高分化50例，中分化47例，低分化31例；肌層浸潤：無肌層浸潤10例，肌層浸潤＜50%83例，肌層浸潤≥50%35例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移101例。選取同期在本院接受子宮內(nèi)膜切除的婦科疾病患者的組織標本。納入標準：①診斷性刮宮患者；②因子宮腺肌病、子宮肌瘤等切除子宮內(nèi)膜的患者；③臨床資料完整。排除標準：術(shù)前接受雌激素、孕激素治療的患者。依據(jù)納入和排除標準，共納入100例婦科疾病患者的組織標本，作為對照組，患者年齡35～72歲，平均年齡為（52.03±6.40）歲；診斷性刮宮46例，其中子宮腺肌病25例，子宮肌瘤29例。兩組患者年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 主要試劑

免疫組化法試劑盒購自福建市邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，兔抗人C-erbB-2多克隆抗體、兔抗人p53多克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗人ETS1多克隆抗體購自上海拜力生物科技有限公司。

1.3 試驗方法

所有組織標本均經(jīng)10%的福爾馬林溶液固定后，石蠟包埋。取5 μm切片脫蠟后，進行蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色和免疫組化染色，檸檬酸緩沖液煮沸，修復(fù)，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染。

1.4 結(jié)果判斷

將磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS）代替一抗作為陰性對照，已知陽性的宮頸癌染色標本作為陽性對照，評價兩組患者C-erbB-2、ETS1、p53的陽性表達情況：C-erbB-2以細胞質(zhì)和細胞膜呈棕黃色顆粒分布為陽性表達；ETS1以細胞核和（或）細胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色顆粒分布為陽性表達；p53以細胞核內(nèi)有棕黃色顆粒分布為陽性表達。陽性細胞數(shù)≤5%為陰性，6%～25%為弱陽性，26%～50%為中度陽性，＞50%為強陽性，以弱陽性～強陽性為陽性表達。

1.5 統(tǒng)計學方法

以SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行-統(tǒng)計分析。正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 C-erbB-2、ETS1、p53的陽性表達情況

觀察組患者C-erbB-2、ETS1、p53的陽性表達率均明顯高于對照組患者，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達情況的比較[n（%）]

2.2 C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達與子宮內(nèi)膜癌患者臨床特征的關(guān)系

FIGO病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者C-erbB-2陽性表達率均明顯高于FIGO病理分期I～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=8.411、4.668、11.231，P＜0.05）；FIGO 病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者ETS1陽性表達率均明顯高于FIGO病理分期I～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=6.129、11.123、9.913，P＜0.05）；FIGO病理分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者p53陽性表達率均明顯高于FIGO病理分期I～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=5.563、17.921、7.428，P＜0.05）；無肌層浸潤、肌層浸潤＜50%、肌層浸潤≥50%的子宮內(nèi)膜癌患者C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（χ2=11.028、7.672、23.525，P＜0.05）。（表2）

2.3 C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達與子宮內(nèi)膜癌患者不同臨床特征的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達與FIGO病理分期、分化程度、肌層浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)（P＜0.01）。（表3）

3 討論

1983年，Bokhman[7]在首先提出子宮內(nèi)膜癌的二元學說。近年來，該理論不斷被分子學、病理學等研究承認，其中I型為雌激素依賴型，多為子宮內(nèi)膜樣腺癌，預(yù)后較好；Ⅱ型為非雌激素依賴型，多為漿液性癌、透明細胞癌等，預(yù)后相對較差[8-9]。臨床實踐中，僅通過病理類型難以判斷腫瘤的生物學行為，部分內(nèi)膜樣腺癌也并非完全符合I型標準。因此，需要靈敏度、特異度更高的免疫分子標志物，來評估腫瘤組織病理分期、預(yù)后等情況，以進一步了解腫瘤的生物學特性。

表2 不同臨床特征的子宮內(nèi)膜癌患者C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達情況

表3 C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達與子宮內(nèi)膜癌患者不同臨床特征的相關(guān)性

原癌基因C-erbB-2屬于表皮生長因子受體的家族成員，其具有酪氨酸激酶活性，與特異性配體結(jié)合后可以激活蛋白激酶活性，促進細胞分裂、分化和增殖[10-11]。丁堪鑠等[12]研究顯示，C-erbB-2在正常子宮內(nèi)膜組織中低表達或無表達，而在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽性表達率高達61.18%。本研究子宮內(nèi)膜癌患者腫瘤組織中C-erbB-2的陽性表達率為60.94%，表明C-erbB-2基因的擴增或高表達可導(dǎo)致正常細胞發(fā)生突變。本研究結(jié)果顯示，病理分期高、分化程度低、肌層浸潤深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜癌患者C-erbB-2的表達水平較高；此外，C-erbB-2表達與臨床特征有相關(guān)性，表明C-erbB-2表達水平高可促進腫瘤細胞侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

原癌基因ETS1是ETS轉(zhuǎn)錄因子家族的成員，ETS1有一個高度保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域可以結(jié)合目標基因序列，調(diào)控下游基因的表達。研究顯示，ETS1可通過旁路調(diào)節(jié)、自身調(diào)節(jié)等機制，在腫瘤組織的血管生成、黏附力等方面發(fā)揮作用，參與細胞缺氧耐受、細胞外基質(zhì)蛋白降解等多個環(huán)節(jié)[13]。ETS1在乳腺癌、宮頸癌、甲狀腺癌、卵巢癌等血管豐富的惡性腫瘤中呈高度過量表達，與腫瘤分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)[14-15]。本研究結(jié)果顯示，ETS1與FIGO病理分期、分化程度、肌層浸潤程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，這可能是因為ETS1對基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子、白明膠酶、尿激酶型纖溶酶原激活物等細胞外基質(zhì)降解相關(guān)的蛋白酶均具有調(diào)控作用，可促使內(nèi)皮細胞的遷移和侵襲，最終導(dǎo)致腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移。

p53是目前臨床上研究最廣泛且最常發(fā)生突變的腫瘤抑制基因，突變的主要機制是點突變，其突變后可失去抑癌功能，并可促進細胞惡性轉(zhuǎn)化[16]。Dragomirescu等[17]的研究也顯示，突變的p53可明顯增加子宮內(nèi)膜的癌變率。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中p53陽性表達率明顯高于對照組患者，且與FIGO病理分期、分化程度、肌層浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。表明p53可直接反映子宮內(nèi)膜癌的惡性程度，與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。代艷芬等[18]研究指出，p53陽性表達率更高的子宮內(nèi)膜癌患者細胞分化程度低、惡性程度高、預(yù)后更差。

綜上所述，子宮內(nèi)膜癌組織中C-erbB-2、ETS1、p53陽性表達率升高，并可促進腫瘤組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。