VEGF和Bcl-2在食管癌患者血清中的表達水平及其臨床意義

尹博，王兵，牛磊，劉宗志，肖琳，隋璽仲，程斌，霍承瑜#

1民航總醫(yī)院心胸外科，北京 100123

2國家癌癥中心/國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心/中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院胸外科，北京 1000210

食管癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、局部蔓延和血源性播散是導(dǎo)致食管癌患者病死的主要危險因素。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的一個重要生物學(xué)特征，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要途徑之一，也是導(dǎo)致腫瘤患者在外科手術(shù)治療后死亡和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的重要影響因素[1-2]。食管癌患者于發(fā)病早期即會發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但由于早期食管癌患者無特異性臨床癥狀，確診時已經(jīng)發(fā)展為中晚期，對患者的預(yù)后極其不利，因此，尋找一種能夠控制淋巴管生成的生長因子及與腫瘤相關(guān)的淋巴結(jié)特異性標志物，對防治食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有重要的臨床價值[3-4]。血管內(nèi)皮細胞生 長 因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是影響血管生成的重要因子之一，可參與腫瘤淋巴管的生成[5]。B細胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2，Bcl-2）基因是一種癌基因，對細胞的凋亡具有抑制作用，對腫瘤的發(fā)生與發(fā)展具有促進作用[6]。本研究主要對VEGF和Bcl-2在食管癌患者血清中的表達情況進行探討，并分析血清VEGF和Bcl-2表達與食管癌患者臨床特征的關(guān)系及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，旨在為臨床治療食管癌提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2013年7月至2017年6月民航總醫(yī)院收治的86例食管癌患者作為研究組。納入標準：①均符合食管癌診斷標準[7]，并均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為食管癌；②均未接受過放療、化療及靶向治療。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并自身免疫系統(tǒng)疾??；③合并嚴重肝腎功能不全；④合并精神類疾病。86例食管癌患者中，男49例，女37例；年齡為57～74歲，平均年齡為（64.17±5.97）歲；發(fā)病部位：胸下段24例，胸中段21例，胸上段27例，頸段14例；TNM分期：I～Ⅱ期49例，Ⅲ～Ⅳ期37例；病理類型：鱗癌59例，非鱗癌27例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例，非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例；分化程度：低分化47例，中高分化39例。另選取同時期在民航總醫(yī)院進行體檢的52例健康體檢者作為對照組，其中，男29例，女23例；年齡為55～72歲，平均年齡為（63.19±5.32）歲。兩組受試者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的審核批準，受試者均對本研究知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

于清晨抽取所有受試者的空腹肘靜脈血5 ml，應(yīng)用離心機（購自美國Beckman Coulter公司）以3000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，離心半徑為10 cm；將血清與血漿分離，收集離心管上層的血清，并放在-80℃的冰箱中保存待檢。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測受試者的血清VEGF和Bcl-2水平，所有操作步驟均嚴格按照試劑盒說明書進行，試劑盒由上海歌凡生物科技有限公司提供。

1.3 觀察指標

比較兩組患者的血清VEGF、Bcl-2水平，分析血清VEGF、Bcl-2水平與食管癌患者臨床特征的關(guān)系，以及血清VEGF、Bcl-2水平與食管癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件對-數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清VEGF、Bcl-2水平的比較

研究組的血清VEGF、Bcl-2水平分別為（215.32±21.37）ng/L、（18.29±2.65）ng/ml，均分別明顯高于對照組的（67.09±6.58）ng/L、（4.51±0.32）ng/ml，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=48.584，P＜0.01；t=37.281，P＜0.01）。

2.2 血清VEGF、Bcl-2水平與食管癌患者臨床特征的關(guān)系

低分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者的血清VEGF水平均明顯高于中高分化、TNM分期為I～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.685、6.456、4.137，P＜0.01）；低分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者的血清Bcl-2水平均明顯高于中高分化、TNM分期為I～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.050、16.479、10.061，P＜0.01）。不同年齡、病理類型、發(fā)病部位食管癌患者的血清VEGF、Bcl-2水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

2.3 血清VEGF、Bcl-2水平與食管癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果顯示，食管癌患者血清VEGF、Bcl-2的表達與食管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)（r=0.597，P=0.004；r=0.671，P=0.001）。

3 討論

食管癌患者的預(yù)后與腫瘤浸潤程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[8]。腫瘤細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移是腫瘤進展的主要原因，也是影響腫瘤患者預(yù)后的重要因素。近年來，通過早期診斷及有效手術(shù)治療，部分食管癌患者的生存率有所提高，但是，仍有部分食管癌患者會發(fā)生腫瘤細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，且多數(shù)患者死于腫瘤轉(zhuǎn)移。腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關(guān)鍵在于抑癌基因與癌基因調(diào)控功能的失調(diào)，因此，癌基因分子靶向治療成為大多數(shù)學(xué)者研究食管癌治療方法的重點；另外，食管癌細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移機制也是目前臨床學(xué)者的研究熱點[9-11]。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個極其復(fù)雜的過程，而該過程中會伴隨著血管的生成、基因的突變及細胞的凋亡等，存在大量的細胞因子及蛋白類物質(zhì)（血清蛋白和肽類等）參與其中，基于此，本研究分析了血清VEGF和Bcl-2表達與食管癌患者臨床特征的關(guān)系及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，旨在為臨床治療食管癌提供理論依據(jù)。

表1 不同臨床特征食管癌患者的血清VEGF、Bcl-2水平（n=86）

實體腫瘤的形成主要依賴于新生血管的生成，血管抑制因子和血管生長刺激因子的平衡與腫瘤的發(fā)展密切相關(guān)。VEGF是目前臨床上已知的促血管生成因子之一，具有較高的特異性，可誘導(dǎo)新血管生成，進而使腫瘤細胞得到充足的營養(yǎng)，加快腫瘤細胞的增殖，提高腫瘤血管的通透性，促進腫瘤細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。研究顯示，VEGF在多種腫瘤組織中均呈高表達，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[12-13]。VEGF不僅可以通過腫瘤細胞自身分泌產(chǎn)生，還可能會促進乳腺腫瘤干細胞的自我更新[14]。本研究結(jié)果顯示，研究組患者的血清VEGF明顯高于對照組（P＜0.01），低分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者的血清VEGF水平均明顯高于中高分化、TNM分期為I～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者（P＜0.01），說明VEGF在食管癌患者中的表達水平較高，且可能與患者的分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，分析其原因可能是因為VEGF能夠促進內(nèi)皮細胞的遷移與增殖，并能夠誘導(dǎo)腫瘤血管的新生，為腫瘤細胞的增殖提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)，促進腫瘤基質(zhì)形成、腫瘤持續(xù)生長及腫瘤細胞進入新生的血管，最終使腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，而腫瘤細胞為了進一步增殖，需要分泌更高水平的VEGF，因此，在低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期較高的食管癌患者血清中，VEGF的表達水平均較高。Bcl-2是抗細胞凋亡的重要基因，具有抗腫瘤細胞凋亡的作用，當其表達水平升高時，可對其他凋亡因素（如促凋亡蛋白等）產(chǎn)生抑制作用，其能夠通過多個位點的磷酸化對細胞由G0期向S期轉(zhuǎn)化的時間進行調(diào)控，從而延長腫瘤細胞的存活時間，使腫瘤細胞避免因其他誘導(dǎo)因素而凋亡，同時，其高表達可使DNA損傷的細胞逃避凋亡，進而促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化及腫瘤的形成[15]。本研究結(jié)果顯示，研究組患者的血清Bcl-2水平明顯高于對照組（P＜0.01），且低分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者的血清Bcl-2水平均明顯高于中高分化、TNM分期為I～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌患者（P＜0.01），說明Bcl-2在食管癌患者的血清中也高表達，并可能與食管癌的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，分析其原因主要是Bcl-2的抗凋亡作用能夠促進腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，因此，在低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期較高的食管癌患者血清中，Bcl-2的表達水平亦均較高。Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清VEGF、Bcl-2表達與食管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)（P＜0.01），說明VEGF、Bcl-2參與了食管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程。

綜上所述，VEGF、Bcl-2在食管癌患者的血清中表達水平較高，VEGF、Bcl-2的表達情況可能與患者的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，且VEGF、Bcl-2的表達均與食管癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。臨床可通過檢測以上指標對食管癌患者進行早期診斷，并實施積極有效的治療，從而改善患者的預(yù)后。