抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb及抗鏈球菌溶血素O檢測(cè)在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎急性階段的診斷價(jià)值*

高 明，楊曉英，毛曉莉△

(1.上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院輸血科，上海 201499；2.上海市奉賢區(qū)中心醫(yī)院輸血科，上海 201499)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎急性階段(ASRA)是一種病因未明的慢性、以炎性滑膜炎為主的系統(tǒng)性疾病，ASRA的發(fā)病可能與遺傳、感染、性激素等有關(guān)。一旦發(fā)病，隨著病情的發(fā)展進(jìn)程而逐漸影響患者的生活質(zhì)量，所以早期診斷、無(wú)創(chuàng)診斷，有利于縮短病程，大大改善患者預(yù)后[1-5]?？功?糖蛋白Ⅰ抗體是抗磷脂抗體的主要組成部分，是溝通免疫與凝血兩大系統(tǒng)的重要橋梁，在ASRA患者中會(huì)出現(xiàn)一定程度的升高[6]。膜糖蛋白GPⅠb是血小板發(fā)生病變的敏感指標(biāo)，研究發(fā)現(xiàn)在ASRA患者中具有一定的診斷價(jià)值[7]?？规溓蚓苎豋是A組鏈球菌的代謝產(chǎn)物之一，可以溶解人紅細(xì)胞，具有很強(qiáng)的抗原性，在ASRA患者的血清中通常檢測(cè)到抗鏈球菌溶血素O值的升高[8]。以上指標(biāo)在臨床檢測(cè)中廣泛開(kāi)展，但對(duì)ASRA的診斷價(jià)值未知，本研究采用受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析相關(guān)指標(biāo)的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2018年1月上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院收治的67例ASRA患者為病例組，其中男25例，女42例，平均(33.84±9.50)歲。選取院內(nèi)體檢健康者50例為對(duì)照組，其中男23例，女27例，平均(34.60±5.70)歲，ASRA患者按照《類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎急性階段診斷標(biāo)準(zhǔn)》篩選入組。本研究獲上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1膜糖蛋白GPⅠb檢測(cè) 病例組和對(duì)照組均收集乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)7.2 mg抗凝血4.0 mL,1 500 r/min離心5 min，分離上層的富血小板血漿，加1%甲醛(PMA)室溫固定，使用磷酸鹽緩沖液(PBS)將血小板的濃度調(diào)整至(2.5～3.5)×107/L。50 μL CD42b-FITC (Becton Dickinson公司)與100 μL血小板溶液振蕩混勻，避光常溫孵育30 min，加2 mL 1×溶血素,室溫反應(yīng)15 min,1 500 r/min離心5 min。棄上清,以2 mL PBS洗滌2遍,最后以1%的甲醛固定30 min,上機(jī)獲取細(xì)胞10 000個(gè)檢測(cè)。上機(jī)測(cè)試分析,Beckman EPICSX型流式細(xì)胞儀上測(cè)定熒光平均熒光強(qiáng)度(Sample FL1 Median)的陽(yáng)性百分標(biāo)記率,記錄結(jié)果。

1.2.2抗β2糖蛋白Ⅰ抗體檢測(cè) 病例組和對(duì)照組均收集無(wú)添加劑全血5.0 mL,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)間接法檢測(cè)待測(cè)樣本血清中抗β2糖蛋白Ⅰ抗體水平，3 000 r/min離心15 min。取血清100 μL加入至特異度抗原包被的微孔反應(yīng)板中，37 ℃孵育60 min，洗板、拍板，加入50 μL(1滴左右)酶結(jié)合物，充分混勻，封板，37 ℃孵育30 min，再次洗板、拍板，加入顯色液A、B各50 μL(1滴左右)，充分混勻，封板，37 ℃孵育15 min，加入50 μL(1滴左右)終止液，混勻。用酶標(biāo)儀讀數(shù)(波長(zhǎng)450 nm)，空白對(duì)照孔校零，讀取各孔吸光度(A)值。

1.3抗鏈球菌溶血素O檢測(cè) 病例組和對(duì)照組均收集無(wú)添加劑全血5.0 mL,采用免疫比濁法檢測(cè)待測(cè)樣本血清中抗鏈球菌溶血素O水平，樣本離心后，在全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定波長(zhǎng)為540 nm，讀取A值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得出結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1病例組與對(duì)照組抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O的表達(dá)水平分析 兩組抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000、0.000、0.000)，見(jiàn)圖1、2和表1。

圖1 膜糖蛋白GPⅠb低表達(dá)流式熒光圖

2.2病例組各項(xiàng)指標(biāo)與疾病的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O與ASRA呈正相關(guān)。見(jiàn)表2。

圖2 膜糖蛋白GPⅠb高表達(dá)流式熒光圖

表1 病例組和對(duì)照組抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖、蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O水平的比較

組別n抗β2糖蛋白Ⅰ抗體(RU/mL)膜糖蛋白GPⅠb(%)抗鏈球菌溶血素O(IU/mL)病例組6723.97±7.11?14.19±6.81?76.78±32.04?對(duì)照組5015.98±6.015.12±3.7922.68±17.29

注：與對(duì)照組比較，*P<0.01

表2 抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O與ASRA的相關(guān)性分析

2.3抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O對(duì)ASRA的診斷價(jià)值 ROC曲線分析顯示，抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O判斷ASRA的靈敏度和特異度較好(均P=0.00)。β2糖蛋白Ⅰ抗體對(duì)ASRA的最佳診斷界值為21.84 RU/mL，此時(shí)的靈敏度為0.746,特異度為0.920，約登指數(shù)為0.666，kappa值為0.645。膜糖蛋白GPⅠb對(duì)ASRA的最佳診斷界值為14.79%，此時(shí)的靈敏度為0.672，特異度為0.940，約登指數(shù)為0.612，kappa值為0.584?？规溓蚓苎豋對(duì)ASRA的最佳診斷界值為51.32 IU/mL，此時(shí)的靈敏度為0.836,特異度為0.940，約登指數(shù)為0.776，kappa值為0.761。見(jiàn)表3、圖3。

表3 抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O與ASRA的ROC曲線下面積分析

圖3 抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O單項(xiàng)檢測(cè)診斷ASRA的ROC曲線

3 討 論

抗β2糖蛋白Ⅰ抗體是病理狀態(tài)下抗磷脂抗體分布到細(xì)胞膜外，當(dāng)抗磷脂抗體與血清中的β2糖蛋白Ⅰ型結(jié)合后即暴露出抗原位點(diǎn)，從而誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類自身抗體[9]。對(duì)抗磷脂抗體綜合征(其靈敏度30%～60%，特異度98%)和系統(tǒng)性紅斑狼瘡具有一定的診斷價(jià)值，在ASRA患者中可見(jiàn)升高，但具體診斷價(jià)值筆者查閱文獻(xiàn)未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道[6,10]。已有研究表明,ASRA發(fā)病機(jī)制可能是由于凝血系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)共同作用導(dǎo)致的，前期篩查發(fā)現(xiàn)血小板膜糖蛋白GPⅠb在ASRA患者中有一定程度的升高[7,11-12]。同時(shí)，研究表明,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病可能與某些微生物的感染有關(guān)，感染后引起異常免疫反應(yīng)，鏈球菌也可能混雜在其間，部分參與了感染，因而出現(xiàn)了抗鏈球菌溶血素O， 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者抵抗力較差，容易受到鏈球菌的侵襲，在臨床上常見(jiàn)到類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者伴隨有鏈球菌感染[13-17]。目前主要應(yīng)用于臨床的抗鏈球菌溶血素O診斷效能并不能完全滿足臨床需求，存在一定的診斷盲區(qū)，故本研究嘗試將抗β2糖蛋白1抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O聯(lián)合研究，以探討其在ASRA中的診斷價(jià)值，提高其診斷效能。

本研究結(jié)果顯示，ASRA病例組的抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O可以作為診斷ASRA的潛在指標(biāo)。進(jìn)一步相關(guān)性分析顯示，抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O與ASRA呈正相關(guān)，故抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O具有診斷ASRA的效能。采用ROC曲線分析得出抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O各檢測(cè)指標(biāo)的詳細(xì)診斷性能，其中抗鏈球菌溶血素O的診斷效能最為突出。

4 結(jié) 論

綜上所述，抗β2糖蛋白Ⅰ抗體、膜糖蛋白GPⅠb、抗鏈球菌溶血素O是ASRA診斷的良好指標(biāo)，有助于ASRA的早期診斷，為臨床及早對(duì)病情進(jìn)行干預(yù)、監(jiān)測(cè)提供有價(jià)值的信息。但是已有研究報(bào)道抗鏈球菌溶血素O并不能像紅細(xì)胞沉降率、C-反應(yīng)蛋白一樣作為判斷病情嚴(yán)重程度和衡量治療效果的指標(biāo)[16-17]。因此，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的檢查中不宜單獨(dú)使用抗鏈球菌溶血素O判斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情的發(fā)展，抗鏈球菌溶血素O僅限于在ASRA中或與其他檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合診斷評(píng)估病情。