轉(zhuǎn)錄因子Ascl-2調(diào)控Tfh細(xì)胞分化在慢性乙型肝炎中的作用

王亞寧 范超 郝春秋 賈戰(zhàn)生

Tfh 細(xì)胞是一種特殊的輔助性 T 細(xì)胞。在機(jī)體對(duì)抗病毒的過(guò)程中，Tfh 細(xì)胞參與機(jī)體免疫應(yīng)答，對(duì)維持機(jī)體免疫平衡起重要作用。全基因組分析結(jié)果表明，Ascl-2 可誘導(dǎo)T細(xì)胞向 Tfh 細(xì)胞的分化，并抑制 TH1 和 TH17 細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá),Ascl-2是Tfh細(xì)胞發(fā)育早期不可少的調(diào)控因子。

隨著人們的生活水平的提高和健康意識(shí)的增強(qiáng)，以及通過(guò)乙肝疫苗的注射，乙型肝炎有了良好的控制，但是慢性乙肝依然是世界性的難題，在我國(guó)就有超過(guò)一億的感染者，也有約30萬(wàn)因感染的相關(guān)疾病離開(kāi)這美好的社會(huì)[1]。HBV感染以后，只有約少數(shù)的患者能夠具有高效的免疫反應(yīng)，身體可以消滅病毒。然而感染者HBV的經(jīng)常刺激，可以患肝硬化或者肝癌。所以，HBV特異性的免疫仍然值得我們更加深入的去研究。免疫應(yīng)答這個(gè)復(fù)雜的過(guò)程中，CD4+T細(xì)胞在效應(yīng) B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)中起著一定的輔助作用，而其中之一的濾泡輔助性 T細(xì)胞(T follicular helper cells，Tfh)是為效應(yīng) B細(xì)胞提供輔助作用的最關(guān)鍵細(xì)胞，在 B細(xì)胞增殖和分化、抗體的產(chǎn)生以及 Ig類(lèi)型轉(zhuǎn)換等功能中都貢獻(xiàn)著自己的力量，并且在乙型肝炎病毒相關(guān)性免疫反應(yīng)中也有一席之地。CD4+T細(xì)胞在抗原決定的幼稚 T細(xì)胞活化發(fā)生后進(jìn)入了分化的關(guān)鍵階段，CD4+T細(xì)胞所處的微環(huán)境主要是由這個(gè)階段的分化方向來(lái)掌握的，并且經(jīng)過(guò)影響如相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平來(lái)完成最終的分化[2-3]。目前來(lái)說(shuō)，考慮Ascl-2是調(diào)節(jié)和控制初始T細(xì)胞發(fā)育成為T(mén)fh的主要轉(zhuǎn)錄因子?，F(xiàn)就轉(zhuǎn)錄因子Ascl-2調(diào)控Tfh細(xì)胞分化在慢性乙型肝炎中的作用及可能機(jī)制作一綜述。

一、轉(zhuǎn)錄因子Ascl-2的結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)

Ascl-2(achaete-scute homologue 2)基因是一個(gè)保守的轉(zhuǎn)錄因子家族的重要一員 ，為螺旋一環(huán)一螺旋結(jié)構(gòu)域[4]。人類(lèi)中正常的胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞體系的一系列分化由 Ascl-2基因擔(dān)任，Jubb等[5]經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)做出結(jié)論其僅表達(dá)于正常組織的大腸的隱窩基底部、小腸及胎盤(pán)，目前，其他的正常組織中還沒(méi)有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持它的表達(dá)存在。結(jié)腸癌細(xì)胞增殖在 Ascl-2經(jīng)過(guò) RNA干擾后可引起其能力下降，同時(shí)也可以是 EMT逆轉(zhuǎn)，近年來(lái)相關(guān)的研究表明，Wnt信號(hào)的靶分子為 Ascl-2，在結(jié)腸癌的相關(guān)細(xì)胞中高表達(dá)。Ascl-2的過(guò)度表達(dá)是結(jié)腸癌患者發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的可能性增大，并且在胚胎滋養(yǎng)層的發(fā)育和周邊與中樞神經(jīng)系統(tǒng)前體細(xì)胞的形成中扮演著重要的作用[6]。

二、Tfh分化調(diào)控轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子Ascl-2所起的作用

(一)Tfh細(xì)胞的分化過(guò)程 T細(xì)胞分化是一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過(guò)程，涉及不同抗原或抗原強(qiáng)度刺激引起的一系列 細(xì)胞間及細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[7]。在幼稚T細(xì)胞活化過(guò)程中，抗原的種類(lèi)和強(qiáng)度對(duì)T細(xì)胞分化有著深遠(yuǎn)影響，是Th細(xì)胞是否向Tfh方向分化的第一個(gè)決定因素[8]；而在Th細(xì)胞起始發(fā)生后，抗原引起的細(xì)胞微環(huán)境變化是T細(xì)胞分化的另一環(huán)節(jié)[9]。其中，胞外因子通過(guò)胞內(nèi)信號(hào)分子影響轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)從而影響Th細(xì)胞的分化是這個(gè)過(guò)程的重要線(xiàn)索，其中STATs信號(hào)途徑已研究得較為清楚[10]。研究發(fā)現(xiàn)，STATs在 Tfh的分化發(fā)育中發(fā)揮重要作用，例如 STAT1、STAT3、STAT4可促進(jìn) Th細(xì)胞向 Tfh分化，而相反 STAT5抑制 Tfh分化[11-12]。在IL-6、IL-23、IL-27刺激CD4+T細(xì)胞后，CD4+T細(xì)胞內(nèi)的STAT3可被活化并誘導(dǎo)IL-21的表達(dá)[13]。STAT3的缺失可引起IL-21表達(dá)障礙導(dǎo)致Tfh細(xì)胞減少。在IL-6缺失的小鼠中，同時(shí)敲除STAT3與STAT1基因可導(dǎo)致Tfh減少和分化異常，說(shuō)明STAT1和STAT3具有協(xié)同促進(jìn)Tfh分化的作用[14]。另外，有研究發(fā)現(xiàn)在 STAT4-/-的小鼠中 Tfh分化、生發(fā)中心(GC)形成、B細(xì)胞分化增殖及抗體 IgG2 b的產(chǎn)生均發(fā)生異常，說(shuō)明 STAT4在 Tfh分化中也發(fā)揮重要作用[15]。相反，STAT5基因缺陷可明顯促進(jìn)Tfh相關(guān)基因的表達(dá)、GC形成及B細(xì)胞過(guò)度分化，說(shuō)明STAT5抑制Tfh細(xì)胞分化[16]。

總而言之，在既往研究中STATs與胞外信號(hào)分子相互作用形成網(wǎng)絡(luò)并影響轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6表達(dá)，形成Tfh細(xì)胞分化的總體調(diào)節(jié)趨勢(shì)[17]。然而，Bcl-6并不能解釋Tfh早期分化中的一些問(wèn)題。CXCR5為CXCL13的受體分子，CXCL13通過(guò)濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)梯度性分布于濾泡區(qū)及 T- B細(xì)胞邊界區(qū)之間，引導(dǎo) CXCR5+CD4+T細(xì)胞遷移[18]。Tfh細(xì)胞活化后，其表面開(kāi)始表達(dá) CXCR5并抑制 CCR7(chemokine C-C motif receptor7)的表達(dá)，這種受體變化使得其可遷移入 T- B細(xì)胞邊界區(qū)，在那里與 B細(xì)胞相互作用最終進(jìn)入 GC[19]。雖然Bcl-6可誘導(dǎo)CXCR5表達(dá)，但缺失Bcl-6的Tfh也可以在抗原刺激3 d之內(nèi)高量表達(dá)CXCR5，說(shuō)明此過(guò)程可能還涉及其他因素。Ascl-2即在此過(guò)程中發(fā)揮作用。

(二)Ascl-2在Tfh分化中的作用 Ascl-2是經(jīng)典WNT信號(hào)通路的下游調(diào)控基因，可被WNT激活劑誘導(dǎo)表達(dá)[20]。Ascl-2在 CXCR5 hiBcl-6 hi細(xì)胞中高表達(dá)，而 CXCR5+Bcl-6 lo T細(xì)胞的 Ascl-2 mRNA水平就已經(jīng)很高，說(shuō)明 Ascl-2的升高很可能在 Bcl-6之前[21]。研究發(fā)現(xiàn)，Ascl-2與CXCR5的表達(dá)存在緊密的相關(guān)性。如果通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體在 CD4+T細(xì)胞中過(guò)表達(dá) Ascl-2，可使30%的細(xì)胞高表達(dá)CXCR5，而過(guò)表達(dá)Bcl-6、Batf、Maf在T細(xì)胞中卻沒(méi)有這種效果[22]。

三、HBV感染對(duì)Tfh功能的影響

在乙型肝炎病毒感染過(guò)程中，病毒可能干擾機(jī)體產(chǎn)生特異性CD4+T和CD8+T細(xì)胞免疫應(yīng)引起體液免疫失衡[23]。在效應(yīng) B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答中，Tfh細(xì)胞起著至關(guān)重要的作用，Tfh細(xì)胞功能異?？赡苁且鹇愿窝谆颊?B細(xì)胞分化紊亂的主要原因[24]。Tfh對(duì)病毒抗原的加工和有效提呈是機(jī)體免疫應(yīng)答清除病毒的重要因素[25]。在大多數(shù)自身免疫性疾病中，Tfh細(xì)胞擁有很重要的核心地位，研究Tfh細(xì)胞相信能夠在自身免疫性疾病中，獲得更大的突破。隨著對(duì) Tfh功能和不同表型特征的認(rèn)識(shí)，以及活化過(guò)程中多種調(diào)節(jié)分子和受體認(rèn)識(shí)的加深，通過(guò)抑制負(fù)性調(diào)節(jié)因子或受體，和探索正性調(diào)節(jié)分子在細(xì)胞和/或在體內(nèi)水平對(duì) Tfh細(xì)胞誘導(dǎo)特異性 T細(xì)胞應(yīng)答的增強(qiáng)作用，將為預(yù)防 HBV感染和克服HBV感染慢性化的的研究提供思路。但是，轉(zhuǎn)錄因子Ascl-2基因中重要的、有針對(duì)性的靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)和控制，以及相關(guān)的原理必須要有細(xì)致的研究，更好的探討CHB的發(fā)病機(jī)制，以及為進(jìn)一步的診治有一個(gè)更好的思路。