白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂對小兒病毒性腦炎外周血細(xì)胞因子指標(biāo)及腦脊液中SP-D和Gal-9表達(dá)的影響

李俊華

(周口市中醫(yī)院，河南 周口 466000)

小兒病毒性腦炎是兒科常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，多由腸道病毒、蟲媒病毒、單純皰疹病毒及傳染病病毒引起[1]。臨床上主要表現(xiàn)為腦實(shí)質(zhì)損害及顱內(nèi)高壓，以發(fā)熱、頭痛、嘔吐、抽搐為主，嚴(yán)重者出現(xiàn)昏迷，治療不及時可導(dǎo)致死亡或遺留癱瘓、智力低下等后遺癥[2]。目前臨床上多采用對癥及抗病毒治療，治療效果不一[3]。因此，尋找更加有效的治療方法具有重大意義。大量研究表明[4]，細(xì)胞因子、SP-D(肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白)及Gal-9(半乳糖凝集素-9)與病毒性腦炎的發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性，故本研究選取我院收治的小兒病毒性腦炎患兒作為研究對象，分析白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂對外周血細(xì)胞因子及腦脊液SP-D、Gal-9表達(dá)的影響，現(xiàn)將結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，選取2013年4月—2017年8月我院收治的小兒病毒性腦炎患兒共80例作為研究對象，按隨機(jī)數(shù)字表將其分為對照組及觀察組，每組40例。所有患兒均有發(fā)熱癥狀，37.5℃～38℃者33例，38℃～39℃者27例，39℃～40℃者11例，40℃以上者9例。其中對照組男22例，女18例;年齡9個月～11歲,(5.23±3.36)歲;病程4～13(8.62±2.87)天。觀察組男20例，女20例;年齡8個月～14歲,(5.89±3.04)歲;病程5～16(9.10±2.43)天。兩組患兒在年齡、性別、病程等方面的比較均無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

1)所有患兒均符合小兒病毒性腦炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；2)患兒及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

1)合并嚴(yán)重心血管、腦、腎臟疾病；2)合并先天性疾??；3)合并其他感染性疾病。

1.4 治療方法

所有患兒均實(shí)施常規(guī)治療，包括退熱、解痙、止驚、甘露醇注射液(山東華魯制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20113235,250 mL)1 g/kg，2次/d靜滴降低顱內(nèi)壓，阿昔洛韋注射液(陜西博森生物制藥股份集團(tuán)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20052277，10 mL：0.5 g)10 mg/kg+5%葡萄糖溶液100 mL，3次/d靜滴抗病毒，同時維持患兒水電解質(zhì)及酸堿平衡。

1.4.1 對照組

在常規(guī)治療基礎(chǔ)上給予神經(jīng)節(jié)苷脂(齊魯制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20051485，40 mg)40 mg+5%葡萄糖溶液250 mL靜脈滴注，1次/d，持續(xù)治療14 d。

1.4.2 觀察組

在對照組的基礎(chǔ)上給予中藥白虎湯加味治療。組方：生石膏20 g，板藍(lán)根15 g，黃芩、粳米、郁金、知母、連翹、金銀花各9 g，黃連6 g，石菖蒲5 g，水牛角6 g，甘草3 g，薄荷(后下)6 g，1劑/d，水煎早晚2次/d，7日為1個療程，共治療2個療程。

1.5 檢測方法

1.5.1 標(biāo)本采集

1)細(xì)胞因子：所有患兒均在入院后48 h內(nèi)及治療14 d后于清晨空腹抽取靜脈血約2 mL于枸櫞酸鈉抗凝真空管中，在37℃水箱靜置30 min后以3 000 r/min分離血清15 min，將離心后的血清放置于-80℃的冰箱保存待檢。

2)SP-D及Gal-9：所有患兒均于入院48 h內(nèi)及治療14 d后行腰椎穿刺術(shù)，做腦脊液常規(guī)及生化檢查，并留腦脊液1 mL置于-80℃的冰箱保存待檢SP-D及Gal-9。

1.5.2 檢測方法

均采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行檢測。

1.5.3 儀器及試劑

儀器采用生化分析儀(日立7600全自動模塊組合式);細(xì)胞因子檢測采用上?？道噬锟萍加邢薰咎峁┑脑噭┖?，SP-D及Gal-9檢測采用上海基爾頓生物科技有限公司提供的試劑盒;詳細(xì)方法參照說明書進(jìn)行。

1.6 觀察指標(biāo)

1)檢測并對比兩組患兒治療前后外周血腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)和干擾素-α(IFN-α)的含量；2)檢測并對比兩組患兒治療前后腦脊液SP-D及Gal-9的含量。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒治療前后外周血TNF-α及IL-6水平的對比

治療前，兩組患兒外周血TNF-α及IL-6均無顯著性差異(P>0.05)；治療后，兩組患兒外周血TNF-α及IL-6均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且觀察組患兒外周血TNF-α及IL-6均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組患兒治療前后外周血TNF-α及IL-6水平的對比

2.2 兩組患兒治療前后外周血IL-8及IFN-α水平的對比

治療前，兩組患兒外周血IL-8及IFN-α均無顯著性差異(P>0.05)；治療后，兩組患兒外周血IL-8及IFN-α均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且觀察組患兒外周血IL-8及IFN-α均顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患兒治療前后外周血IL-8及IFN-α水平的對比

2.3 兩組患兒治療前后腦脊液SP-D及Gal-9水平的對比

治療前，兩組患兒腦脊液SP-D及Gal-9均無顯著性差異(P>0.05)；治療后，兩組患兒腦脊液SP-D均顯著高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且觀察組患兒腦脊液SP-D顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；治療后，兩組患兒腦脊液Gal-9均顯著低于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且觀察組患兒腦脊液Gal-9顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患兒治療前后腦脊液SP-D及Gal-9水平的對比

3 討論

病毒性腦炎是兒科常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，是造成小兒腦損傷的主要致病原因[6]，嚴(yán)重危及患兒的生命及生活質(zhì)量。該病的發(fā)病機(jī)制主要是病毒透過血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)直接破壞腦組織[7]，引起炎性反應(yīng)導(dǎo)致腦水腫、神經(jīng)元變性壞死[8]。另一方面，病毒抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)[9]，過度釋放細(xì)胞因子進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)一步損傷腦組織[10]。同時有研究證實(shí)，SP-D與Gal-9均參與到病毒性腦炎的免疫反應(yīng)中。目前臨床上主要以抗病毒、降顱壓、修復(fù)腦損傷等治療為主[11-13]，但無法解決患兒的病理免疫反應(yīng)[14]。

近年來中醫(yī)藥治療病毒性腦炎取得良好的效果，中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病多因濕熱所致[15]，白虎湯加味能使病邪外泄[16]，聯(lián)合西醫(yī)治療療效顯著，但與免疫反應(yīng)的關(guān)系尚無定論。從本研究結(jié)果可見，觀察組及對照組治療后外周血TNF-α、IL-6、IL-8及IFN-α水平均較治療前下降，且觀察組下降程度更顯著，提示白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂能抑制病毒性腦炎患兒外周血細(xì)胞因子的表達(dá)，緩解其對腦組織的損傷。細(xì)胞因子作為免疫防御的重要介質(zhì)，也可通過炎癥反應(yīng)產(chǎn)生病理損傷[17]，加重神經(jīng)損傷。有研究發(fā)現(xiàn)[18]，病毒刺激神經(jīng)細(xì)胞可誘導(dǎo)TNF-α、白介素等細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生及聚集，產(chǎn)生瀑布鏈反應(yīng)，導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的損傷及星形細(xì)胞的凋亡。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，白虎湯加味中知母具有良好的抗病毒、抗菌及抗炎作用[19]，同時可清除患兒體內(nèi)的氧自由基，降低腦組織的耗氧量[20]。石菖蒲能有效改善腦部循環(huán)，促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)[21]。因此本研究中觀察組應(yīng)用白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂比對照組單用神經(jīng)節(jié)苷脂更能降低細(xì)胞因子的表達(dá)水平。本研究結(jié)果還顯示，治療后兩組患兒腦脊液SP-D水平均升高，且觀察組升高程度更顯著。同時，兩組患兒治療后腦脊液Gal-9水平均降低，且觀察組顯著低于對照組。說明白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂能促進(jìn)機(jī)體SP-D的表達(dá)，抑制Gal-9表達(dá)。SP-D是肺泡表面活性物質(zhì)的組成成分，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)也廣泛存在[22]，可通過識別病原體介導(dǎo)一系列免疫反應(yīng)，具有保護(hù)人體免受病毒、細(xì)菌等侵襲的作用[23]。大量研究表明[24]，SP-D可結(jié)合TOLL樣受體，抑制細(xì)胞因子、活性氧的釋放，預(yù)防髓鞘前少突膠質(zhì)細(xì)胞死亡，改善腦損傷程度。Gal-9通過參與神經(jīng)髓鞘的形成、神經(jīng)細(xì)胞的囊泡運(yùn)輸維持著神經(jīng)系統(tǒng)的功能[25]，另一方面通過識別病原體表面的寡糖參與免疫應(yīng)答，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[26]。本研究中兩組患兒腦脊液Gal-9水平均下降，尤其觀察組下降更明顯，可能與細(xì)胞因子水平下降有關(guān)。相關(guān)研究表明[27]，病毒感染可誘導(dǎo)TNF、IFN及IL等細(xì)胞因子的產(chǎn)生，刺激Gal-9的表達(dá)?？梢酝茰y白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂可通過增強(qiáng)SP-D的表達(dá)來增強(qiáng)免疫反應(yīng)，而降低Gal-9的表達(dá)來緩解過度免疫反應(yīng)，使免疫反應(yīng)處于平衡狀態(tài)。

綜上所述，白虎湯加味聯(lián)合神經(jīng)節(jié)苷脂治療小兒病毒性腦炎能降低外周血細(xì)胞因子的水平，促進(jìn)腦脊液SP-D的表達(dá)，抑制腦脊液Gal-9的表達(dá)水平，維持免疫反應(yīng)保持平衡穩(wěn)定，緩解神經(jīng)細(xì)胞的損傷，加快神經(jīng)系統(tǒng)的恢復(fù)，值得臨床推廣。