胃癌組織中CD151、c-Met、Integrin α3表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

賈長河，謝毅，張昊，宋曉霞，任穎，任秀華

(1鄭州大學(xué)人民醫(yī)院 河南省人民醫(yī)院，鄭州450000；2鄭州大學(xué))

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，雖然部分患者通過手術(shù)治療可以達(dá)到根治目的，但術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響患者生存。癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)黏附是惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的首要步驟，胃癌細(xì)胞與ECM黏附受細(xì)胞膜表面特異受體介導(dǎo)，其中CD151、c-Met、整合素(Integrin)家族為重要的細(xì)胞膜表面分子。c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)參與腫瘤轉(zhuǎn)移的多個過程，包括減弱細(xì)胞與細(xì)胞之間的黏附作用、增加腫瘤細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶2、誘導(dǎo)尿激酶型纖溶酶原激活劑表達(dá)升高、促進(jìn)細(xì)胞的運(yùn)動能力、參與腫瘤新生血管生成等[1，2]。與c-Met類似，Integrin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)也在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的多個過程中發(fā)揮作用，其介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與腫瘤細(xì)胞侵襲與運(yùn)動、ECM降解、腫瘤新生血管的生成、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡等有關(guān)[3]。CD151是一種細(xì)胞表面分子，它可以與Integrin、c-Met或其他受體結(jié)合形成功能復(fù)合物，介導(dǎo)下游信號傳導(dǎo)途徑，調(diào)控腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[4,5]。探討CD151、c-Met、Integrin在胃癌中的表達(dá)情況以及它們之間的相互關(guān)系，有助于胃癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究，為將來開發(fā)胃癌靶向單克隆抗體藥物提供依據(jù)。本研究觀察了胃癌組織中CD151、c-Met、Integrin α3的表達(dá)變化，分析三者與胃癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年4～10月在河南省人民醫(yī)院行胃癌根治術(shù)的48例胃癌患者，男28例、女20例，年齡(56.0±8.5)歲。高、中分化腺癌25例，低分化腺癌23例(包括5例印戒細(xì)胞癌)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例；病變穿透漿膜26例，未穿透漿膜22例；脈管侵犯28例，無脈管侵犯20例?；颊咝g(shù)前均未接受化療或放療。取手術(shù)切除的胃癌原發(fā)灶組織作為觀察組，距腫瘤邊界5 cm以上的正常胃黏膜組織為對照組。本研究經(jīng)河南省人民醫(yī)院倫理委員會審批通過，并征得患者知情同意。

1.2 胃癌及癌旁組織中CD151、c-Met、Integrin α3表達(dá)檢測 采用免疫組化SP法。將胃癌及癌旁組織標(biāo)本用4%甲醛溶液固定后，石蠟包埋，連續(xù)切4 μm厚切片；常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水；檸檬酸抗原修復(fù) 10 min，自然冷卻，PBS沖洗；3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗；滴加山羊血清封閉后，加入一抗(CD151、c-Met抗體工作液濃度為1∶100，Integrin α3抗體工作液濃度為1∶200)，4 ℃過夜；加入二抗(兔多克隆抗體)，37 ℃孵育30 min；滴加辣根酶標(biāo)記卵霉鏈白素，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性胃癌標(biāo)本作為陽性對照。由兩位病理科醫(yī)師雙盲閱片。CD151、c-Met、Integrin α3蛋白陽性表現(xiàn)為細(xì)胞膜呈棕黃色，胞質(zhì)內(nèi)或胞核內(nèi)偶可出現(xiàn)著色。每個標(biāo)本隨機(jī)觀察10個高倍視野，每個視野計(jì)數(shù)100個細(xì)胞，根據(jù)著色細(xì)胞百分率判斷結(jié)果。著色細(xì)胞≥10%為陽性，<10%或無著色為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CD151、c-Met、Integrin α3表達(dá)比較 觀察組CD151、c-Met、Integrin α3陽性表達(dá)率分別為79.17%、66.67%、43.75%，對照組分別為12.5%、8.33%、6.25%，觀察組CD151、c-Met、Integrin α3陽性表達(dá)率均高于對照組(P均<0.05)。

2.2 胃癌組織中CD151、c-Met、Integrin α3表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 胃癌患者中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、侵及漿膜者、有脈管侵犯者的CD151、c-Met、Integrin α3陽性表達(dá)率分別高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、未侵及漿膜者、無脈管侵犯者(P均<0.05)。CD151、c-Met、Integrin α3陽性表達(dá)率在不同性別、年齡、分化程度間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。見表1。

表1 胃癌組織中CD151、c-Met、Integrin α3陽性表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系(%)

2.3 胃癌組織中CD151、c-Met、Integrin α3表達(dá)的關(guān)系 胃癌組織中CD151與c-Met、Integrin α3表達(dá)呈正相關(guān)(r分別為0.56、0.38，P均<0.05)，c-Met與Integrin α3表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.43，P<0.05)。

3 討論

胃癌是嚴(yán)重威脅人類健康的常見惡性腫瘤之一。目前針對胃癌的治療措施主要包括D2根治性手術(shù)、全身化療、局部放療等傳統(tǒng)的綜合治療手段。然而進(jìn)展期胃癌的綜合治療療效仍欠理想。靶向治療是以腫瘤細(xì)胞過度表達(dá)的某些特定的標(biāo)志性分子為靶點(diǎn)，選擇針對的阻斷劑干預(yù)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而達(dá)到抑制腫瘤增殖生長、侵襲及轉(zhuǎn)移效果的新興治療方式。其具有特異性殺傷腫瘤細(xì)胞、不良反應(yīng)小的優(yōu)勢，現(xiàn)已成為胃癌個體化精準(zhǔn)治療研究的重點(diǎn)。目前應(yīng)用于臨床的主要有針對HER家族信號通路的靶向藥物(如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗等)和針對VEGF信號通路的靶向藥物(如貝伐珠單抗、阿帕替尼等)，但療效尚不滿意，因此迫切需要開發(fā)更多新的特異性強(qiáng)的靶向藥物。CD151、c-Met、Integrin α3為重要的細(xì)胞膜表面分子，研究三者在胃癌中的表達(dá)情況以及它們之間的關(guān)系不但有助于胃癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究，更有利于胃癌靶向單克隆抗體藥物的開發(fā)研究。

CD151是重要的細(xì)胞表面分子，通過與其他細(xì)胞表面分子相結(jié)合，介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)，參與細(xì)胞增殖、黏附、運(yùn)動、血管生成、半橋粒形成和轉(zhuǎn)移等病理生理過程[6]。Yue等[7]證實(shí)，CD151抗體能阻止腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶脫離；Kim等[8]證實(shí)，CD151單抗抑制癌細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移，將CD151 cDNA轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞可增加細(xì)胞的遷移。臨床研究表明，CD151的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[9，10]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組CD151陽性表達(dá)率高于對照組，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，侵及漿膜者高于未侵及漿膜者，脈管侵犯者高于無脈管侵犯者。提示CD151的高表達(dá)與胃癌細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

c-Met是間質(zhì)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化因子，也是肝細(xì)胞生長因子的受體，和后者結(jié)合后激活該受體的酪氨酸激酶活性，促進(jìn)多種類型細(xì)胞的生長、遷移和形態(tài)學(xué)改變。c-Met廣泛表達(dá)于人體各種正常組織，但在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)出異常的高表達(dá)、突變或活性改變。c-Met基因的異?；罨瘏⑴c多種實(shí)體癌的發(fā)生、發(fā)展過程，促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成，與腫瘤的浸潤深度、Duke分期、淋巴轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[11,12]。研究表明，c-Met單克隆抑制劑可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移[13]。本研究結(jié)果顯示，胃癌組c-Met陽性表達(dá)率高于對照組，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，侵及漿膜者高于未侵及漿膜者，脈管侵犯者高于無脈管侵犯者。提示c-Met的高表達(dá)與胃癌細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

Integrin是一種介導(dǎo)細(xì)胞和ECM之間連接的跨膜受體。Integrin在體內(nèi)表達(dá)廣泛，大多數(shù)細(xì)胞表面都可表達(dá)一種以上的Integrin，在多種生命活動中發(fā)揮關(guān)鍵作用。Integrin α3屬于Integrin家族之一，其可通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞與ECM間的黏附，使腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶進(jìn)入周圍組織或血管。本研究結(jié)果顯示，胃癌組Integrin α3陽性表達(dá)率高于對照組，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，侵及漿膜者高于未侵及漿膜者，脈管侵犯者高于無脈管侵犯者。提示Integrin α3的高表達(dá)與胃癌細(xì)胞的浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

CD151、c-Met與Integrin都屬于腫瘤細(xì)胞表面重要的跨膜受體，可相互協(xié)作介導(dǎo)與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD151可與多種Integrin相結(jié)合，是將Integrin接受到的各種生物信號轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)的重要結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，從而將Integrin與胞內(nèi)磷酸化-去磷酸化過程連接起來[14]。c-Met與Integrin信號系統(tǒng)在腫瘤細(xì)胞表面，下游信號以及兩者表達(dá)水平上存在精密的相互調(diào)控[15]。CD151通過與各種跨膜蛋白相互作用形成復(fù)合物發(fā)揮生物學(xué)功能[16]。Wang等[4]報道，CD151-Integrin復(fù)合物與HGF配體c-Met形成復(fù)合物，在敲除CD151后HGF誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移幾乎完全抑制。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中CD151與c-Met、Integrin α3表達(dá)呈正相關(guān)，c-Met與Integrin α3表達(dá)呈正相關(guān)。提示三者可能相互作用，共同參與了胃癌的侵襲及轉(zhuǎn)移。由于隨訪時間尚短，三者與胃癌生存預(yù)后的關(guān)系需要以后進(jìn)一步研究。

綜上所述，胃癌組織中CD151、c-Met、Integrin α3表達(dá)升高，三者可能共同參與了胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，有可能成為評估胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移能力的新指標(biāo)及胃癌靶向治療的新型分子靶點(diǎn)，聯(lián)合檢測CD151、c-Met和Integrin α3表達(dá)可能為胃癌的診斷、預(yù)后判斷及治療提供參考依據(jù)。