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    泌乳期母乳脂肪酸變化及其多不飽和脂肪酸影響因素

    2019-03-11 08:44:28仲玉備陳歷俊趙軍英董學(xué)艷李菊芳常蘭蘭陳樹(shù)興姜鐵民
    食品科學(xué) 2019年4期
    關(guān)鍵詞:乳母泌乳期初乳

    仲玉備,陳歷俊,趙軍英,董學(xué)艷,李菊芳,劉 斌,常蘭蘭,陳樹(shù)興,*,姜鐵民,*

    (1.河南科技大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,河南 洛陽(yáng) 471023;2.國(guó)家母嬰乳品健康工程技術(shù)研究中心,北京 100163;3.北京市乳品工程技術(shù)研究中心,北京 100163)

    母乳是6 個(gè)月內(nèi)嬰兒最理想的天然食品,世界衛(wèi)生組織提倡0~6 個(gè)月嬰兒母乳喂養(yǎng),且繼續(xù)母乳喂養(yǎng)至1 歲以上[1]。母乳喂養(yǎng)不僅有助于嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育,增進(jìn)母子感情,還可促進(jìn)母親身體恢復(fù)[2]。母乳中含有3%~5%的脂肪,是嬰兒營(yíng)養(yǎng)的重要組成,可為嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育提供45%~60%的能量,并且母乳脂肪酸作為生物活性物質(zhì)影響嬰兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[3],尤其是多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)與嬰兒的生長(zhǎng)發(fā)育直接相關(guān),如作為PUFA前體物質(zhì)的亞油酸(linoleic acid,LA)、α-亞麻酸(α-linolenic acid,ALA)可預(yù)防過(guò)敏和感染,并對(duì)嬰兒視覺(jué)和認(rèn)知發(fā)展具有重要意義,二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)可以幫助降低膽固醇含量,對(duì)心腦血管疾病有預(yù)防和治療作用,還可促進(jìn)人體內(nèi)飽和脂肪酸代謝,二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)和花生四烯酸(arachidonic acid,AA)作為大腦中的主要結(jié)構(gòu)性脂肪酸,在健康人腦組織的脂肪結(jié)構(gòu)中分別占25%和15%,充足的DHA和AA供給是嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育,尤其是神經(jīng)系統(tǒng)及視力發(fā)育的重要保障[4-5]。

    母乳脂肪酸的組成隨泌乳期、母親膳食、所在地區(qū)而變化[6-10],還可能受胎次、孕周、母親遺傳背景等多種因素的影響[11-12],但關(guān)于此方面的研究甚少。目前鮮見(jiàn)乳母血型、孕前身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index,BMI)、分娩方式、嬰兒胎次等多個(gè)因素與母乳中重要PUFA關(guān)系的研究。因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)技術(shù)對(duì)河南洛陽(yáng)地區(qū)不同泌乳期母乳中脂肪酸的組成和含量進(jìn)行系統(tǒng)研究,并進(jìn)一步分析乳母血型、生育年齡、分娩方式和嬰兒性別、胎次等對(duì)成熟乳中重要PUFA含量的影響,以期為科學(xué)模擬母乳開(kāi)發(fā)嬰幼兒配方食品及開(kāi)展泌乳期母嬰個(gè)性化膳食攝入研究提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 研究對(duì)象與乳樣采集

    于2015年10月—2016年1月,在河南洛陽(yáng)5111醫(yī)院、電力醫(yī)院婦產(chǎn)科按“知情同意,自愿參加”原則,招募居住河南洛陽(yáng)不低于1 a,分娩后仍居住在本地,無(wú)特殊偏食習(xí)慣,嬰兒足月分娩、無(wú)先天性及遺傳性疾病的健康漢族乳母,并簽署知情同意書,定時(shí)用吸奶器采初乳(0~5 d)、過(guò)渡乳(12~14 d)、成熟乳(1~6 月),并放入-80 ℃超低溫冰箱中進(jìn)行冷凍保存,共收集樣本240 份。

    1.2 試劑與儀器

    37 種脂肪酸甲酯混標(biāo) 美國(guó)Sigma公司;去離子水及其他試劑均為色譜純。

    MIRIS HMA型母乳分析儀 瑞典MIRIS AB公司;TRACE1300-ISQ GC-MS聯(lián)用儀 賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;高速冷凍離心機(jī) 美國(guó)Sigma公司;旋渦振蕩器 美國(guó)Scilogex公司;恒溫水浴鍋 余姚市東方電工儀器廠。

    1.3 方法

    1.3.1 母乳脂肪含量測(cè)定

    母乳脂肪含量采用母乳分析儀進(jìn)行測(cè)定。

    1.3.2 脂肪酸甲酯化

    采用鹽酸-甲醇法。取200 μL母乳,加入0.5 mol/L的鹽酸-甲醇溶液5 mL,加入2 mL正己烷,2 mL甲醇,振蕩混勻,在80 ℃恒溫水浴振蕩2 h,取出試管用流動(dòng)水冷卻至室溫后,加入2 mL去離子水,振蕩混勻后,于5 000 r/min冷凍離心5 min,吸取1 mL上層清液(酯層溶液)于進(jìn)樣瓶,進(jìn)行GC-MS檢測(cè),檢測(cè)前于-20 ℃保存[13]。

    1.3.3 色譜條件

    色譜柱:HP-88氣相色譜柱(100 m×0.25 mm,0.20 μm);升溫程序:初始溫度60 ℃,保持5 min,以8 ℃/min升至160 ℃,然后以4 ℃/min升至200 ℃,保持5 min,最后以3 ℃/min升至240 ℃,保持5 min;進(jìn)樣器Thermo Scientific TriPlus RSH自動(dòng)進(jìn)樣器;進(jìn)樣口溫度200 ℃;恒流速模式1 mL/min;進(jìn)樣量1 μL;分流比10∶1;載氣N2。

    1.3.4 質(zhì)譜條件

    電子電離源;離子源溫度280 ℃;傳輸線溫度240 ℃;四極桿溫度150 ℃;四極桿質(zhì)量掃描范圍m/z35~400。

    1.3.5 脂肪酸定性定量方法

    根據(jù)脂肪酸甲酯的質(zhì)譜特征離子和保留時(shí)間定性,根據(jù)已知質(zhì)量的脂肪酸甲酯混標(biāo)定量。37 種脂肪酸甲酯混標(biāo)總離子流色譜如圖1所示、母乳樣品(LY-DL003-3)的脂肪酸甲酯總離子流色譜如圖2所示。

    圖1 37 種脂肪酸甲酯混標(biāo)GC-MS總離子流色譜圖Fig. 1 GC-MS total ion chromatograms of mixed standard of 37 fatty acid methyl esters

    圖2 母乳樣品(LY-DL003-3)中脂肪酸甲酯GC-MS總離子流色譜圖Fig. 2 GC-MS total ion chromatogram of human milk sample(LY-DL003-3)

    1.4 數(shù)據(jù)分析

    應(yīng)用SPSS 23.0軟件對(duì)乳母一般資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)描述;母乳基本信息中定量資料為非正態(tài)分布,數(shù)據(jù)用Median±IQR表示;脂肪及脂肪酸數(shù)據(jù)均通過(guò)正態(tài)性檢驗(yàn),數(shù)據(jù)用 ±s表示;多組數(shù)據(jù)間比較采用方差分析法,兩組數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn),正態(tài)分布變量用Pearson相關(guān)分析。將單因素分析中對(duì)母乳中重要PUFA含量有顯著影響的因素,納入線性回歸分析[14]。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn),P<0.05,差異顯著。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 研究對(duì)象基本信息

    乳母的生育年齡、體質(zhì)量、身高、孕前BMI、血型及嬰兒出生體質(zhì)量、胎次等資料統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表1所示。

    表1 研究對(duì)象基本信息Table 1 Basic information about the study objects

    2.2 母乳中脂肪含量

    表2 不同泌乳階段母乳脂肪質(zhì)量濃度Table 2 Fat contents of breast milk at different lactation stages g/100 mL

    由表2可知,初乳(0~5 d)中脂肪含量最低,過(guò)渡乳(12~14 d)中達(dá)到最高,初乳、過(guò)渡乳、成熟乳(1~6 月)中脂肪含量差異顯著。

    2.3 母乳中脂肪酸含量

    本研究測(cè)定初乳、過(guò)渡乳、成熟乳中脂肪酸的組成及相對(duì)含量,共檢測(cè)到37 種脂肪酸,多以偶數(shù)碳原子脂肪酸形式存在,其中飽和脂肪酸(saturated fatty acid,SFA)17 種,單不飽和脂肪酸(monounsaturated fatty acid,MUFA)9 種,n-3系列PUFA 4 種,n-6系列PUFA 7種。如表3所示,總SFA含量隨著泌乳期的延長(zhǎng)而增加,并且維持在26.50%~46.62%范圍內(nèi),在初乳與成熟乳中差異顯著;中鏈飽和脂肪酸(medium chain saturated fatty acids,MCSFA)C10:0、C12:0在初乳中的含量較過(guò)渡乳、成熟乳低,差異顯著;另外,C4:0、C11:0、C14:0、C15:0、C17:0、C20:0、C21:0、C24:0含量在各組間無(wú)顯著差異??侻UFA質(zhì)量分?jǐn)?shù)在初乳中最高為37.14%,成熟乳中最低為33.67%;油酸是MUFA主要組成成分,隨著泌乳期的延長(zhǎng)含量逐漸降低,但差異不顯著??侾UFA質(zhì)量分?jǐn)?shù)在初乳、過(guò)渡乳、成熟乳中分別為27.68%、27.31%、28.72%,組間差異不顯著;初乳、過(guò)渡乳中n-6系列PUFA含量均較成熟乳中低,并且差異顯著;LA是n-6系列PUFA的主要組成成分,在初乳、過(guò)渡乳中含量均顯著低于成熟乳;AA質(zhì)量分?jǐn)?shù)在初乳中最高為0.83%,成熟乳中最低為0.66%;總n-3系列PUFA含量在各組間無(wú)顯著差異,其中ALA、EPA在初乳中質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.85%、0.05%,均比過(guò)渡乳、成熟乳中的含量低,但是DHA含量在初乳中最高為0.68%。

    表3 不同泌乳期母乳脂肪酸測(cè)定結(jié)果Table 3 Fatty acid composition of breast milk at different lactation stages%

    續(xù)表3

    2.4 成熟乳中5 種重要PUFA影響因素分析

    2.4.1 乳母年齡對(duì)母乳PUFA的影響

    表4 生育年齡與母乳中5 種PUFA相關(guān)性Table 4 Correlation analysis of childbearing age and the contents of five PUFAs in breast milk

    如表4所示,乳母年齡與母乳中5 種PUFA含量之間不存在相關(guān)性。

    2.4.2 乳母孕周對(duì)母乳PUFA的影響

    表5 孕周與母乳中5 種PUFA相關(guān)性Table 5 Correlation analysis of gestational age and the contents of five PUFAs in breast milk

    由表5可知,足月胎兒孕周的長(zhǎng)短與母乳中5 種PUFA之間不存在相關(guān)性。

    2.4.3 嬰兒胎次對(duì)母乳PUFA的影響

    表6 嬰兒胎次對(duì)母乳5 種PUFA影響Table 6 Effect of parity on the contents of five PUFAs in breast milk

    根據(jù)嬰兒的胎次,將納入研究的乳母分為2 組,頭胎、二胎,由表6可知,兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但生頭胎的乳母母乳中5 種PUFA的含量均比生二胎的高。

    2.4.4 嬰兒性別對(duì)母乳PUFA的影響

    根據(jù)乳母分娩的嬰兒性別,將納入研究的乳母分為2 組,男嬰、女嬰組,由表7可知,乳母母乳中LA含量在男女嬰組間有顯著差異,并且女嬰組含量高于男嬰組。ALA、AA、EPA、DHA含量在男女嬰組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表7 嬰兒性別對(duì)母乳5 種PUFA的影響Table 7 Effect of infant sex on the contents of five PUFAs in breast milk

    2.4.5 分娩方式對(duì)母乳PUFA的影響

    將納入研究的乳母按分娩方式分為順產(chǎn)、剖腹產(chǎn)2 組,由表8可知,剖腹產(chǎn)組5 種PUFA含量均比順產(chǎn)組高,但差異不顯著。

    表8 分娩方式對(duì)母乳5 種PUFA的影響Table 8 Effect of delivery modes on the contents of five PUFAs in breast milk

    2.4.6 乳母血型對(duì)母乳PUFA的影響

    根據(jù)乳母血型,將納入研究的乳母分為4 組,A型、B型、AB型、O型,由表9可知,AB血型乳母母乳中AA、EPA、DHA含量均高于其他血型,并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,LA、ALA含量在不同血型乳母母乳中差異不顯著。

    表9 乳母血型對(duì)母乳5 種PUFA的影響Table 9 Effect of maternal blood types on the contents of PUFAs in breast milk

    2.4.7 乳母產(chǎn)前BMI對(duì)母乳PUFA的影響

    依據(jù)“中國(guó)肥胖問(wèn)題工作組”提出我國(guó)成人BMI標(biāo)準(zhǔn),將納入研究的乳母按孕前BMI分成4 組,消瘦(≤18.5)、正常(18.5~23.9)、超重(24~27.9)、肥胖(≥28)。由表10可知,產(chǎn)前超重組乳母母乳中ALA、DHA含量均高于消瘦、正常、肥胖組,并且差異顯著,LA、AA、EPA含量在4 組間差異不顯著。

    表10 乳母產(chǎn)前BMI對(duì)母乳5 種PUFA的影響Table 10 Effect of prenatal BMI on the contents of five PUFAs in breast milk

    以母乳L(zhǎng)A含量(Y1)為因變量,以單因素分析得到的對(duì)其有顯著影響的嬰兒性別(X1)為自變量,進(jìn)行線性回歸分析,得回歸方程為:Y1=27.160-2.487X1,X1=1(女)、2(男),R2=0.052,P=0.022,說(shuō)明LA水平的變異可由自變量解釋5.2%,男嬰乳母母乳中LA含量低于女嬰母乳中的,與單因素分析結(jié)果一致;以母乳ALA含量(Y2)為因變量,以單因素分析中對(duì)其有顯著影響的乳母孕前BMI(X2)為自變量,進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為:Y2=1.646+0.405X2,X2=1(≤18.5)、2(18.5~23.9)、3(24~27.9)、4(≥28),R2=0.045,P=0.036,說(shuō)明ALA水平的變異可由自變量解釋4.5%,BMI與母乳ALA含量呈正相關(guān),整體BMI越大,ALA含量越大,與單因素分析結(jié)果基本一致;以母乳DHA含量(Y5)為因變量,以單因素分析中對(duì)其有顯著影響的乳母孕前BMI(X2)、乳母血型(X3)為自變量做多元線性回歸,納入方程的只有乳母孕前BMI(X2),得到回歸方程Y5=0.188+0.079X2,X2=1(≤18.5)、2(18.5~23.9)、3(24~27.9)、4(≥28),R2=0.089,P=0.024,說(shuō)明DHA水平的變異可由自變量解釋8.9%,BMI與DHA含量呈正相關(guān),整體與單因素分析結(jié)果一致;以母乳AA含量(Y3)為因變量,以單因素分析有顯著影響的乳母血型(X3)為自變量,進(jìn)行回歸分析,得回歸方程:Y3=0.616+0.002X3,X3=1(A)、2(B)、3(AB)、4(O),R2=0.026,P=0.917,P值大于0.05,說(shuō)明AA和乳母血型間線性關(guān)系不顯著;以母乳中EPA含量(Y4)為因變量,以單因素分析有顯著影響的乳母血型(X3)為自變量,進(jìn)行回歸分析,得回歸方程:Y4=0.188+0.011X3,X3=1(A)、2(B)、3(AB)、4(O),R2=0.001,P=0.281,P值大于0.05,說(shuō)明EPA和乳母血型間線性關(guān)系不顯著。

    3 討 論

    本研究采用GC-MS聯(lián)用技術(shù)測(cè)定河南洛陽(yáng)地區(qū)母乳脂肪酸的組成,并探討乳母母乳中對(duì)嬰兒發(fā)育具有重要作用的5 種PUFA LA、ALA、AA、EPA和DHA含量的影響因素。

    母乳中脂肪及脂肪酸含量呈動(dòng)態(tài)變化。初乳中脂肪含量最低,過(guò)渡乳中最高,成熟乳中趨于穩(wěn)定,脂肪的變化,尤其是早期的變化是為了適應(yīng)新生嬰兒消化器官發(fā)育尚不完善,胃腸功能差的狀況,攝入含過(guò)多脂肪的母乳會(huì)引起生理腹瀉。母乳中SFA、MCSFA(C10:0、C12:0)的含量隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加,與國(guó)內(nèi)外其他報(bào)道中各種脂肪酸所占的比例范圍類似[7,9,15]。不同泌乳階段中MUFA含量差異不顯著,其中成熟乳中MUFA含量(33.67%)高于日照(32.27%)和徐水(29.28%),但低于江蘇句容地區(qū)(37.52%)[16],油酸是嬰幼兒所需能量的重要來(lái)源及組織和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的重要組分[17],是母乳中含量最高的MUFA,而且在初乳中含量最高,這可能是由于嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育初期,組織、器官生長(zhǎng)發(fā)育旺盛,對(duì)能量需求較高[18],另外,在不同的泌乳期均檢測(cè)到芥酸(C22:1),可能與河南洛陽(yáng)地區(qū)人們普遍食用菜籽油有關(guān),還需進(jìn)一步研究。初乳、過(guò)渡乳中PUFA的含量與北京地區(qū)相當(dāng),成熟乳中PUFA含量較北京地區(qū)高[9]。n-6系列PUFA中的LA和n-3系列PUFA中的ALA是人體必需脂肪酸,可通過(guò)脫氫和碳鏈延長(zhǎng)分別合成AA、DHA,歐洲兒科胃腸病學(xué)和營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)推薦母乳中LA/ALA理想范圍為5~15,本研究中各泌乳期LA/ALA比例較適宜。初乳中AA、DHA含量最高,并且隨著泌乳期的延長(zhǎng)顯著下降,與劉靜[6]、Weiss[19]等的研究一致。這是由于胎兒期和新生兒早期,AA和DHA通常在胎兒及嬰兒大腦中大量聚集,以促進(jìn)大腦細(xì)胞的分化及視網(wǎng)膜的正常發(fā)育,雖然DHA和AA在體內(nèi)可分別由ALA和LA合成,但此時(shí)嬰兒體內(nèi)的脂肪酸碳鏈延長(zhǎng)酶和去飽和酶活性較低,合成能力有限,其體內(nèi)的DHA和AA多半是孕期經(jīng)胎盤及產(chǎn)后經(jīng)母乳得來(lái)[20],隨著嬰幼兒發(fā)育的成熟,自身合成能力的提高,母乳中AA、DHA含量逐漸下降。

    對(duì)可能會(huì)影響母乳中5 種PUFA含量的7 個(gè)因素分析發(fā)現(xiàn),母乳中LA含量與嬰兒性別有關(guān),女嬰乳母組母乳中LA含量顯著高于男嬰乳母組。孕前超重乳母母乳中ALA、DHA含量顯著高于其他3 組,另除LA外,超重組、肥胖組乳母母乳中其他4 種PUFA,ALA、AA、EPA、DHA含量均較消瘦組、正常組高,這可能由于PUFA與促進(jìn)代謝有關(guān),可使心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)降低,是對(duì)后代心臟的保護(hù)機(jī)制[21]。AB血型乳母母乳中AA、EPA、DHA含量均高于A型、B型、O型血乳母母乳中含量,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,血脂是乳母母乳脂肪酸的重要來(lái)源,研究表明非O型血人群血脂濃度較高[22],這可能是AB血型乳母母乳中AA、EPA、DHA含量較其他血型乳母高的原因,另外,本研究中B型血乳母母乳中總脂肪酸含量也顯著高于O型血乳母。分娩方式對(duì)5 種PUFA含量均無(wú)顯著影響,但剖腹產(chǎn)乳母母乳中5 種PUFA含量均高于順產(chǎn)乳母,可能是由于剖腹產(chǎn)乳母產(chǎn)后傷口愈合需要大量的熱能和蛋白質(zhì),更加注重膳食營(yíng)養(yǎng)搭配。生頭胎乳母母乳中5 種PUFA含量與生二胎乳母相比,差異不顯著,但是生頭胎的乳母母乳中5 種PUFA含量均較生二胎的高,可能是由于生二胎的乳母合成PUFA能力較生頭胎乳母弱造成的[12]。乳母孕周、生育年齡不影響5 種PUFA的組成,與Esther等[23]的研究一致。Guerra等[24]對(duì)早產(chǎn)和足月分娩乳母母乳研究時(shí)發(fā)現(xiàn)由于早產(chǎn)兒自身組織中PUFA存儲(chǔ)量較少,并且對(duì)LA、ALA碳鏈延長(zhǎng)和去飽和能力弱,其乳母母乳中PUFA含量顯著高于足月分娩乳母。Argovargaman等[25]研究顯示孕周只影響年齡較大乳母(>37 歲)過(guò)渡乳中n-3、n-6系列脂肪酸的組成,另外,產(chǎn)婦年齡在懷孕后期會(huì)以脂肪含量和組成的形式影響母乳的成熟[26],并且隨著懷孕和分娩年齡的增高,母親和孩子會(huì)有健康與代謝問(wèn)題,如增加母親患高血壓、糖尿病的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致早產(chǎn)和低體質(zhì)量?jī)旱某錾鶾27],從母嬰健康角度考慮,應(yīng)適齡生育。母乳中PUFA含量與編碼哺乳動(dòng)物長(zhǎng)鏈脂肪酸延長(zhǎng)酶基因ELOVL1-ELOVL7有關(guān)[28-29],另外,林麒等[30]的研究表明,母乳脂肪酸含量還與社會(huì)因素有關(guān)。對(duì)于造成女嬰乳母母乳中LA含量顯著高于男嬰乳母的原因,需要結(jié)合乳母基因型及社會(huì)因素等進(jìn)行深入研究。另外,由于本研究資料信息收集有限,乳母孕期體質(zhì)量的增加、產(chǎn)后體質(zhì)量的變化、睡眠等是否也會(huì)對(duì)母乳中5 種PUFA含量造成差異也需要進(jìn)一步研究。

    總之,為滿足嬰幼兒生長(zhǎng)發(fā)育的需求,母乳中各種脂肪酸特別是PUFA含量隨著泌乳時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷發(fā)生著變化,并且母乳中與嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要的PUFA受不同因素的影響。因此,在進(jìn)行新生兒喂養(yǎng)以及配方奶粉的配制時(shí)應(yīng)充分考慮脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)素的微觀變化及乳母遺傳背景、身體狀況等,使之更符合嬰幼兒的營(yíng)養(yǎng)需求。

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