牛油果中植物甾醇的鑒定及抗氧化、抑菌活性

田丹丹，李 艷，梅曉宏,*

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083；2.農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)（食用）重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100083）

牛油果（Persea americana Mill.）為常綠植物鱷梨果實(shí)的別稱，也稱為油梨、酪梨等[1-3]。牛油果是一種著名的熱帶水果，其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)成分豐富，含多種維生素、礦物質(zhì)和極豐富的脂肪等[4-6]。此外，牛油果果肉中幾乎不含糖，膽固醇含量極低，是糖尿病患者極好的食品和保健品[2]。另外，牛油果果肉中脂類物質(zhì)含量豐富，其中不飽和脂肪酸含量最高達(dá)80%，有降低膽固醇、血脂，保護(hù)肝臟等重要功能，另有研究表明牛油果有預(yù)防癌癥的功能[7]；因此牛油果備受消費(fèi)者青睞[8]。

植物甾醇是一種結(jié)構(gòu)上與動(dòng)物性膽固醇相似而功能完全不同的天然的植物活性成分，具有環(huán)戊烷全氫菲（甾核）結(jié)構(gòu)，廣泛存在于各種植物種子中，多以谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和菜籽甾醇及其甾醇酯的形式存在。流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室研究顯示，植物甾醇及其甾醇酯可以降低冠狀動(dòng)脈硬化、心臟病、癌癥和良性前列腺肥大等慢性病的發(fā)病率[9-11]。因此，近年來(lái)植物甾醇備受關(guān)注，美國(guó)食品藥品管理局已將基于植物甾醇的人造奶油和色拉醬列入功能食品范疇，將其用于慢性病的預(yù)防。隨著對(duì)植物甾醇功能活性研究的不斷深入，對(duì)其抗氧化性活性和抑菌活性的研究也日益開(kāi)展起來(lái)。

趙雁武等[12]研究了以β-谷甾醇為主要成分的蘋果籽油植物甾醇與天然抗氧化劑VE和人工合成抗氧化劑2,6-二叔丁基對(duì)甲酚（butylated hydroxytoluene，BHT）對(duì)各種自由基的清除能力，結(jié)果表明，植物甾醇清除自由基的能力較VE和BHT高。李萬(wàn)林等[13]采用微波輔助提取大豆油中的植物甾醇，其抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大豆油粗甾醇具有較強(qiáng)的抗氧化性，可作為生產(chǎn)具有清除·OH作用藥物的主要成分。徐雅琴等[14]在研究中發(fā)現(xiàn)，南瓜籽植物甾醇可有效清除自由基，并對(duì)豬油氧化具有一定抑制作用，而且與檸檬酸、VC和VE有協(xié)同抗氧化作用，其中與VE的協(xié)同增效效果最好。對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和沙門氏菌均有很好的抑制作用，當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到3.0 mg/mL時(shí)可以完全抑制供試菌的生長(zhǎng)。由于牛油果果實(shí)中脂類含量豐富，推測(cè)其可能富含植物甾醇，而到目前為止相關(guān)方面的報(bào)道較少。針對(duì)上述實(shí)際情況，本實(shí)驗(yàn)對(duì)牛油果中植物甾醇的種類、含量、抗氧化活性及抑菌活性等進(jìn)行了初步研究和探索，以期為牛油果進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牛油果購(gòu)自當(dāng)?shù)爻小?/p>

大腸桿菌（Escherichia coli）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙門氏菌（Salmonella）均由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)（食用）重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

甾醇標(biāo)準(zhǔn)品（膽固醇、膽甾烷醇、菜籽甾醇、環(huán)木菠蘿烯醇、麥角固醇、菜油甾醇、豆甾醇、β-谷甾醇）、衍生劑（N-甲基-N-三甲基硅烷基七氟丁酰胺、1-甲基咪唑（95∶5，V/V））、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH） 美國(guó)Sigma公司；吩嗪硫酸甲酯（phenazine methosulfate，PMS）、還原性輔酶Ⅰ（nicotinamide adenine dinucleotide，NADH）、氯化氮藍(lán)四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）、VE 西亞試劑公司；正己烷、二氯甲烷、丙酮均為國(guó)產(chǎn)色譜純；鹽酸、乙醚、石油醚、乙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

LGJ-25C型冷凍干燥機(jī) 北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司；FW100型高速萬(wàn)能粉碎機(jī) 天津泰斯特儀器有限公司；SER148型全自動(dòng)脂肪測(cè)定儀 北京盈盛恒泰科技有限公司；TSQ8000氣相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜儀、全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司；高速冷凍離心機(jī)美國(guó)Beckman Coulter公司；牛津杯 北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開(kāi)發(fā)公司；游標(biāo)卡尺 上海精密儀器儀表有限公司。

1.3 方法

1.3.1 牛油果油的制備

將牛油果去皮、去核，取可食部分切成小塊，用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥（－70 ℃、74 h），高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，密封置于4 ℃保存、備用。取約5 g冷凍干燥牛油果于恒質(zhì)量燒杯（m1/g）中，總質(zhì)量為m2/g，110 ℃加熱干燥至恒質(zhì)量（m3/g）。按照公式（1）計(jì)算出牛油果經(jīng)冷凍干燥恒質(zhì)量后干物質(zhì)平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)。取2 g凍存的樣品放于濾紙筒，濾紙筒放入提取筒中，并加入30 mL石油醚。提取筒放入自動(dòng)脂肪提取儀，65 ℃加熱1 h，提起濾紙筒，65 ℃繼續(xù)抽提1.5 h，差量法獲得油脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)，平行測(cè)定3 次。將油脂于－20 ℃黑暗中保存[15-16]。

1.3.2 牛油果中植物甾醇的提取

取50 mg上述油脂樣品，加入20 μg膽甾烷醇作為內(nèi)標(biāo)，加入2 mol/L氫氧化鉀-乙醇溶液2 mL，漩渦振蕩1 min混勻。70 ℃水浴振搖45 min，室溫冷卻。加入二氯甲烷5 mL、超純水3 mL，混合均勻，6 000 r/min離心5 min棄上清液，再用5 mL超純水洗3 次，棄上清液，氮?dú)獯蹈捎袡C(jī)相，4 ℃貯存?zhèn)溆肹17-18]。

1.3.3 牛油果中植物甾醇的鑒定

牛油果中植物甾醇的鑒定參照文獻(xiàn)[19-21]。

1.3.3.1 色譜條件

色譜柱：DB-5石英毛細(xì)管柱（30 mh0.25 mm，0.25 μm）；升溫程序：100 ℃保持1 min，以10 ℃/min升至290 ℃，保持10 min；載氣（He）流速1.2 mL/min，壓力2.4 kPa，進(jìn)樣量0.5 μL；不分流。

1.3.3.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊離子源；電子能量70 eV；傳輸線溫度290 ℃；離子源溫度250 ℃；母離子m/z 285；激活電壓1.5 V；質(zhì)量掃描范圍m/z 35～500；監(jiān)測(cè)方式SRM模式。

1.3.3.3 GC-MS/MS檢測(cè)

稱取各甾醇標(biāo)準(zhǔn)品5 mg（β-谷甾醇10 mg），分別用丙酮配制質(zhì)量濃度梯度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL的甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，氮?dú)獯蹈珊螅薮蓟旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液與1.3.2節(jié)提取的甾醇樣品中均加入100 μL衍生劑，于75 ℃衍生20 min，正己烷定容到1 mL，進(jìn)樣1 μL，用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）檢測(cè)。以甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以各甾醇峰面積（經(jīng)內(nèi)標(biāo)校正）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)試樣進(jìn)行定量，得到其檢測(cè)濃度。

1.3.4 牛油果植物甾醇的抗氧化活性測(cè)定

1.3.4.1 牛油果植物甾醇初步純化

采用1.3.2節(jié)方法提取牛油果中植物甾醇。采用硅膠柱色譜對(duì)植物甾醇進(jìn)行初步純化，具體步驟如下所述。量取約100 mL的層析硅膠，裝柱，洗脫劑為石油醚-丙酮（體積比8∶1）。將甾醇粗提取樣品用少量丙酮溶解后過(guò)硅膠柱。用洗脫劑洗脫，每10 mL收集一次，同1.3.3.3節(jié)中的甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行薄層色譜檢驗(yàn)。展開(kāi)劑為石油醚-乙醚混合液（體積比7∶3），合并相同比移值（Rf）的組分，氮吹濃縮結(jié)晶后，制備出甾醇純化樣品。

1.3.4.2 DPPH自由基清除能力的測(cè)定

DPPH自由基清除能力的測(cè)定參考Larrauri等[22]的方法并適當(dāng)改進(jìn)。精確稱取并配制濃度為1h10－4mol/L DPPH的無(wú)水乙醇溶液。吸取上述DPPH無(wú)水乙醇溶液和無(wú)水乙醇各2 mL，混勻后，在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A0）；分別吸取2 mL質(zhì)量濃度分別為0、2、4、6、8、10、12 μg/mL的甾醇樣品和VE的無(wú)水乙醇溶液，然后各加入上述DPPH無(wú)水乙醇溶液2 mL，于室溫放置30 min后，在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（Ai）；分別吸取2 mL各甾醇樣品，加入無(wú)水乙醇2 mL，混勻，在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（Aj）。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次，取平均值。DPPH自由基的清除率按式（2）計(jì)算。

1.3.4.3 gOH清除能力的測(cè)定

gOH清除能力的測(cè)定參照文獻(xiàn)[23-24]。將1.0 mL 9 mmol/L FeSO4溶液、1.0 mL 8.8 mmol/L H2O2溶液于37 ℃恒溫條件下反應(yīng)15 min后，在536 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度（A0），然后分別加入1 mL質(zhì)量濃度分別為0、10、20、30、40、50、60 μg/mL的甾醇樣品和VE的無(wú)水乙醇溶液，在536 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度（AX）。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次，取平均值。按式（3）計(jì)算·OH清除率。

1.3.4.4 O2－·清除能力的測(cè)定

O2－·清除能力的測(cè)定參照文獻(xiàn)[25]。取含30 μmol/L PMS、338 mmol/L NADH、72 μmol/L NBT的Tris-HCl緩沖液（16 mmol/L、pH 8.0）各1 mL，分別加入1 mL質(zhì)量濃度分別為0、5、10、15、20、25 μg/mL的甾醇樣品和VE的無(wú)水乙醇溶液，靜置5 min后，于560 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各樣品吸光度，對(duì)照為不加樣品的吸光度。每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3 次，取平均值。按式（4）計(jì)算O2－·清除率。

1.3.5 牛油果中植物甾醇抑菌活性的測(cè)定

1.3.5.1 樣品前處理

按照1.3.1節(jié)和1.3.2節(jié)的工藝流程提取牛油果植物甾醇，得到植物甾醇提取物，與甾醇標(biāo)準(zhǔn)品相同，用丙酮配制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的待測(cè)樣品，4 ℃保存，備用。

1.3.5.2 菌種活化

將大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌以劃線法分別接種到LB培養(yǎng)基上，并置于37 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h。將所有供試菌株活化兩代后，分別挑取單菌落，接種于LB液體培養(yǎng)基中，37 ℃搖床振蕩（200 r/min）培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，分別取1 mL于9 mL無(wú)菌生理鹽水即得到待用菌懸液。

1.3.5.3 抑菌實(shí)驗(yàn)

采用抑菌圈法測(cè)定牛油果中植物甾醇的抑菌活性[26-27]。在無(wú)菌條件下取100 μL菌懸液在培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布均勻。用無(wú)菌鑷子夾取滅菌的牛津杯與培養(yǎng)基上，取100 μL甾醇提取物丙酮溶液加入到牛津杯中，采用丙酮作為陰性對(duì)照，青-鏈霉素混合液（100×，雙抗）作為陽(yáng)性對(duì)照，37 ℃培養(yǎng)24 h后取出，用無(wú)菌鑷子取出牛津杯，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑（測(cè)量3 次，取其平均值），并記錄數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用Xcalibur軟件進(jìn)行質(zhì)譜圖鑒定及分析，采用Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 牛油果植物甾醇種類及含量分析

2.1.1 牛油果干物質(zhì)、脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)

牛油果經(jīng)冷凍干燥至恒質(zhì)量后干物質(zhì)平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26.76%，經(jīng)索氏抽提得到黃綠色油脂，得出脂肪平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為58.00%。根據(jù)牛油果干物質(zhì)中脂肪含量計(jì)算出牛油果鮮脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15.51%。

一般果蔬水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)通常會(huì)達(dá)到90%左右，意味著其干物質(zhì)含量比較低。同時(shí)，其脂肪含量一般也很低。除榴蓮和牛油果，一般果蔬的脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)通常在1%以下，有的低至0.2%左右[28]。由此可見(jiàn)，相比較其他果蔬，牛油果中脂肪含量明顯較高。又因植物甾醇廣泛存在于植物油中，因此可以推測(cè)牛油果中應(yīng)該含有較多的植物甾醇。

2.1.2 牛油果植物甾醇種類及含量

按1.3.3.1節(jié)色譜條件進(jìn)行分析，混合標(biāo)準(zhǔn)品中各植物甾醇化合物在上述條件下能到達(dá)很好的分析效果（圖1）。

由表1可知，甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)品中，β-谷甾醇在10～1 000 μg/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.999 9，其他7 種甾醇在10～500 μg/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均大于0.999，β-谷甾醇檢出限為1.0 mg/kg，其他7 種甾醇檢出限為0.5 mg/kg。

圖1 植物甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖Fig.1 GC of mixed phytosterol standards

表1 植物甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)品分析定量參數(shù)和檢出限Table1 Standard curve equations and detection limits for eight phytosterol compounds

以標(biāo)準(zhǔn)樣保留時(shí)間和GC-MS/MS中的離子碎片（表2）對(duì)牛油果中的主要甾醇進(jìn)行定性、定量分析，其主要甾醇的總離子流色譜圖結(jié)果如圖2所示。經(jīng)GC-MS/MS鑒定出牛油果果肉中所含的4 種甾醇：β-谷甾醇、菜油甾醇、膽固醇、豆甾醇，其含量分別為59.47、30.36、15.34、2.72 mg/100 g。此外，在保留時(shí)間為26.51 min和27.17 min的兩種物質(zhì)豐度較高，由于植物甾醇標(biāo)準(zhǔn)品有限而未能鑒定出，確定其主要的離子質(zhì)荷比分別為372、463以及255、369。已鑒定出的4 種甾醇總含量為107.89 mg/100 g。而一般果蔬的甾醇含量均在50 mg/100 g以下，如蘋果、草莓、獼猴桃等甾醇含量均低于20 mg/100 g[29]。顯而易見(jiàn)，牛油果甾醇含量與其他果蔬相比較高。

表2 植物甾醇混合標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)譜數(shù)據(jù)Table2 MS data for eight phytosterol compounds

圖2 牛油果中植物甾醇GC-MS/MS總離子流色譜圖Fig.2 GC-MS/MS total ion current chromatogram of phytosterols from avocado

植物甾醇是一種重要的植物功效成分，幾乎存在于所有植物性食物中。大量流行病學(xué)資料和實(shí)驗(yàn)室研究證明：人群許多慢性?。ㄈ绻跔顒?dòng)脈硬化性心臟病、癌癥、良性前列腺肥大等）的發(fā)生率較低與攝入較多的植物甾醇有關(guān)。牛油果中植物甾醇含量最豐富的是β-谷甾醇，β-谷甾醇作為最主要的植物甾醇，其在降低膽固醇、消炎解熱、抗氧化、抗腫瘤和抗癌等方面發(fā)揮著重要的作用[30]。因此，選取牛油果進(jìn)行植物甾醇功能成分的檢測(cè)是具有一定意義的。

2.2 牛油果植物甾醇抗氧化活性分析

圖3 牛油果植物甾醇對(duì)3 種自由基的清除能力Fig.3 Scavenging activity of avocado phytosterols against three free radicals

由圖3可以看出，牛油果甾醇對(duì)D P P H自由基、gOH、O2－g均具有較強(qiáng)的清除作用，隨著甾醇質(zhì)量濃度的增加，3 種自由基清除率逐漸增大。達(dá)到半數(shù)抑制濃度（half maximal inhibitory concentration，IC50）時(shí)對(duì)應(yīng)的甾醇樣品質(zhì)量濃度分別為6.82、35.92、17.08 μg/mL。

圖3A中，當(dāng)甾醇樣品質(zhì)量濃度為10 μg/mL時(shí)，DPPH自由基清除率達(dá)到80.03%，是對(duì)照VE的2.8 倍。表明牛油果甾醇樣品對(duì)DPPH自由基的清除能力遠(yuǎn)高于VE。圖3B中，當(dāng)甾醇樣品質(zhì)量濃度為50 μg/mL時(shí)，其對(duì)gOH清除率為VE的1.72 倍。可以看出，牛油果甾醇樣品對(duì)·OH的清除率優(yōu)于VE。圖3C中，當(dāng)甾醇樣品質(zhì)量濃度為20 μg/mL時(shí)，其對(duì)O2－g 清除率為VE的1.52 倍?？梢?jiàn)，牛油果甾醇樣品對(duì)O2－g具有較強(qiáng)的清除能力，且清除能力始終高于VE。

圖4 β-谷甾醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.4 Chemical structure of β-sitosterol

圖5 VE的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.5 Chemical structure of VE

結(jié)果表明，牛油果中植物甾醇是一種良好的抗氧化劑，具有很好的清除自由基能力，并且效果明顯優(yōu)于VE。本研究結(jié)果與趙雁武等[12]關(guān)于蘋果籽油中植物甾醇抗氧化活性的研究結(jié)果相一致。這可能與β-谷甾醇羥基的鄰位沒(méi)有官能團(tuán)有關(guān)，而牛油果中含量最多的正是β-谷甾醇。由圖4、5可知，這2 種抗氧化劑的共同特點(diǎn)是只有1 個(gè)酚羥基。植物甾醇的基本骨架是由3 個(gè)六元環(huán)和1 個(gè)五元環(huán)組成的環(huán)戊烷全氫菲的甾核，羥基位于六元環(huán)己烷的3位，羥基周圍沒(méi)有其他官能團(tuán)。而VE的酚羥基位于苯并二氫吡喃結(jié)構(gòu)的苯環(huán)6位上，其相鄰的5位和7位的甲基因位阻作用限制了其與自由基的進(jìn)一步反應(yīng)。植物甾醇可以有效清除自由基，這可能是因?yàn)殓薮紝?位酚羥基的氫提供給了自由基，清除了DPPH自由基、·OH和O2－·，其作用機(jī)理在于它阻斷了自由基引發(fā)的連鎖反應(yīng)，從而抑制其進(jìn)一步的氧化作用。由于自由基與衰老、炎癥、休克、動(dòng)脈粥樣硬化、藥物及酒精中毒等有關(guān)[31]，植物甾醇可作為外源性氧自由基清除劑，其應(yīng)用有待進(jìn)一步研究。而植物甾醇的抗氧化性與其防治心血管疾病和抗癌等作用均密切相關(guān)，因此可針對(duì)牛油果的抗氧化功能作進(jìn)一步應(yīng)用研究。

2.3 牛油果植物甾醇抑菌活性分析

通過(guò)測(cè)定抑菌圈大小，得到甾醇提取物的抑菌結(jié)果如表3所示。

表3 牛油果植物甾醇提取物的抑菌圈直徑（n＝3）Table3 Inhibition zone diameters of avocado phytosterol (n = 3)mm

由表3可得出，陰性對(duì)照丙酮沒(méi)有抑菌圈，說(shuō)明其沒(méi)有抑菌活性，從而排除溶劑影響。陽(yáng)性對(duì)照青-鏈霉素雙抗抑菌效果明顯。質(zhì)量濃度為1 mg/mL的甾醇標(biāo)準(zhǔn)品和牛油果甾醇提取物對(duì)于4 種菌株均有抑制作用，且甾醇標(biāo)準(zhǔn)品的抑菌能力強(qiáng)于牛油果甾醇提取物，二者抑菌效果由強(qiáng)至弱均依次為枯草芽孢桿菌＞金黃色葡萄球菌＞沙門氏菌＞大腸桿菌。因此，植物甾醇對(duì)于枯草芽孢桿菌的抑菌效果較好，大腸桿菌的抑菌作用較差。

對(duì)于革蘭氏陰性菌，甾醇標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)大腸桿菌和沙門氏菌的抑制作用相當(dāng)，而甾醇提取物對(duì)沙門氏菌的抑制效果比大腸桿菌好；對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性菌，二者抑制作用均是枯草芽孢桿菌強(qiáng)于金黃色葡萄球菌。顯而易見(jiàn)，植物甾醇對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制效果要好于革蘭氏陰性菌。這與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的研究結(jié)果[32]相符，主要原因是革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖，并且肽聚糖位于表層，抑菌成分如青霉素和溶菌酶能夠直接效用于肽聚糖，抑制肽聚糖的合成。從而對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌起抑制作用。而革蘭氏陰性菌肽聚糖含量少，且肽聚糖位于較內(nèi)層，其外有外膜保護(hù)，抑菌成分不能直接作用于肽聚糖，因此溶菌酶對(duì)革蘭氏陰性菌無(wú)較強(qiáng)效用。

植物甾醇的種類繁多，結(jié)構(gòu)相異的甾醇類物質(zhì)會(huì)表現(xiàn)出不同的抑菌效果，而影響抑菌效果的因素眾多，抑菌成分的處理方式、抑菌成分的濃度與溶解度均能影響其抑制效果，對(duì)此還需進(jìn)一步探究?，F(xiàn)已有相關(guān)文獻(xiàn)表明植物甾醇具有抑菌作用，彭昕等[32]研究雷竹筍的抑菌實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，總甾醇表現(xiàn)出良好的抑菌作用，并且對(duì)大腸桿菌與金黃色葡萄球菌2 種細(xì)菌的抑制作用比其對(duì)黑曲霉等真菌的抑制效果要好。而天然防腐劑正以其抗菌性強(qiáng)、安全無(wú)毒、熱穩(wěn)定性好、作用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域飛速發(fā)展[33]，因此可以考慮牛油果中植物甾醇提取物作為食源性的抑菌成分而廣泛用作植物源的天然防腐劑。

3 結(jié) 論

本研究采用GC-MS/MS法對(duì)牛油果植物甾醇進(jìn)行提取鑒定，測(cè)定其種類及含量，并利用硅膠柱層析純化提取的植物甾醇進(jìn)行體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，最后采用平板涂布法研究了牛油果植物甾醇提取物的抑菌效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明牛油果相對(duì)于其他果蔬含有較多的植物甾醇，具有比VE更高的抗氧化活性，同時(shí)牛油果植物甾醇提取物對(duì)于常見(jiàn)的4 種致病菌株均有抑制效果。牛油果可以作為良好的天然抗氧化食物和抑菌防腐劑來(lái)源，為進(jìn)一步深入開(kāi)展對(duì)其活性及消化特性的研究提供理論依據(jù)，并有望應(yīng)用于抗氧化功能性食品或食品添加劑，有利于提高牛油果的綜合利用價(jià)值。