老年冠心病病人血漿microRNA表達譜的篩選及其臨床意義分析

，，冬梅，

據(jù)有關(guān)研究表明，老齡已成為引發(fā)冠心病(CAD)的一項危險因素，冠心病是一種由冠狀動脈粥發(fā)生硬化而導(dǎo)致的心臟病[1]。目前CAD在我國老年人中的發(fā)病率正逐年遞增，常見的癥狀有心律失常、心絞痛等，嚴重者會發(fā)生猝死。冠心病已被列為嚴重威脅我國老年人健康的重要疾病。降低冠心病死亡率的最有效方法就是早期診斷與及時對癥治療，但根據(jù)現(xiàn)階段的醫(yī)療技術(shù)還未能對冠心病作出高效、明確的診斷，這一問題目前還沒有理想的解決辦法[2]。目前僅能借助心肌酶測定、常規(guī)心電圖及冠狀動脈造影等檢查方式來診斷是否為冠心病，其中冠狀動脈造影是臨床上最常用的冠心病檢查診斷方式。這些檢查方式都具有明顯的局限性，不能準確診斷出冠狀動脈功能障礙及損傷程度，由于現(xiàn)階段對冠心病的診斷機制還不夠完善，因此，臨床上對冠心病的預(yù)防與診治也受到了制約[3]。冠心病診斷的局限性在于沒有較為直觀的標志物來表明冠心病的發(fā)生與演變這一病理過程，因此，探尋一種可明確診斷冠心病的標志物，對老年冠心病的早期診斷與防治有著重要意義，能夠延緩病情的進程，有效降低老年冠心病的發(fā)病率與死亡率，提高老年病人的生活質(zhì)量[4]。本研究主要是對老年冠心病病人血漿與正常人血漿中microRNA表達譜進行篩選，并探討microRNA在臨床冠心病的診斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年4月—2015年5月心內(nèi)科診斷為冠心病的老年病人80例為研究組，均經(jīng)冠狀動脈造影明確診斷，接受冠狀動脈支架植入術(shù)38例，主干冠狀動脈狹窄程度超過50%，有血運受阻癥狀。選取同期到我院的健康體檢者80名為對照組，冠狀動脈造影結(jié)果正常。兩組研究對象一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 兩組研究對象基本資料比較

注：兩組各項比較，P>0.05

1.2 排除標準 伴有嚴重室性心律失常、重度心力衰竭及心源性休克者，罹患惡性腫瘤或其他重要臟器功能性疾病者。

1.3 方法 采集兩組研究對象的靜脈外周血漿5 mL，兩組血樣標本分別存放在真空采血管中，室溫4 ℃，20 000 r/min離心10 min分離血漿；再將上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，重復(fù)之前的離心操作，以此去除血樣標本中的雜質(zhì)。血樣標本采集完成后，應(yīng)用microRNA基因芯片技術(shù)分別對5例老年冠心病病人與5名健康體檢者血漿中的表達進行測定與分析；再運用逆轉(zhuǎn)錄定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)做擴量驗證。應(yīng)用microRNA基因芯片技術(shù)對兩組血漿中microRNA基因表達進行篩選與檢測，統(tǒng)計并記錄miR-206、miR-92a、miR-208、miR-574-5p在兩組的表達水平。應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)做擴量檢驗，比較兩組miR-206 和 miR-574-5p的表達。

2 結(jié) 果

2.1 5例老年冠心病病人與5名健康體檢者microRNAs表達比較 研究組血漿microRNA基因的表達均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 5例老年冠心病病人與5名健康體檢者microRNAs表達比較(±s) μL

2.2 兩組miR-206 和 miR-574-5p的表達 擴量檢測結(jié)果顯示：研究組miR-206、miR-574-5p表達均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 兩組miR-206 和 miR-574-5p的表達(±s) μL

3 討 論

冠心病因其發(fā)病急，臨床診斷機制尚不完善，難以做到真正意義上的防范，成為我國乃至全球范圍發(fā)病率、致死率最高的一種危險疾病。此外，還有研究指出，年齡成為評估冠心病起病風(fēng)險的一項臨床指標[5]。臨床上將冠心病的病因歸結(jié)于動脈粥樣硬化，據(jù)相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，大部分動脈粥樣硬化的形成都會對冠心病的發(fā)生產(chǎn)生直接的影響，兩者存在明顯的相關(guān)性[6]。動脈粥樣硬化一旦形成并繼續(xù)發(fā)展，就會累及人體各項重要臟器，表現(xiàn)為各器官的炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細胞損傷及氧化應(yīng)激反應(yīng)等。冠狀動脈粥樣硬化致使冠狀動脈堵塞，血運不暢，心臟及周圍組織出現(xiàn)供血不足，進而導(dǎo)致心肌血氧嚴重不足甚至壞死[7]。據(jù)國外研究者表明，microRNA參與冠狀動脈血管細胞增殖、血管生成、炎癥反應(yīng)等過程，對重要細胞功能表現(xiàn)出基因調(diào)控特性，以此來影響冠心病發(fā)展的全部過程[8]。曾有研究學(xué)者認為，通過調(diào)控miR-133a、miR-126、miR-320、miR-155等的表達可明顯改善心肌缺血、心肌損傷，說明血漿microRNA在冠心病的發(fā)生與演變過程中有著重要的作用[5]。此外，國外相關(guān)機構(gòu)對CAD生物標志物的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-1、miR-223、miR-126、miR-499等具有特異性的microRNA也參與了冠心病的演變過程[9]，這些發(fā)現(xiàn)對提高老年冠心病的診斷率具有極大的促進作用。雖然目前已發(fā)現(xiàn)一些與冠心病的發(fā)生及演變相關(guān)的特異性microRNA，但仍需要更多對冠心病敏感的生物標志物，這樣才能為冠心病提供更加準確的診斷，降低該疾病的死亡率，延緩冠心病的進程，提高老年病人的生活質(zhì)量。microRNA在血漿中的狀態(tài)較為穩(wěn)定，microRNA的穩(wěn)定性為血樣標本的采集以及檢測提供了便利，血漿 microRNA 極有可能成為一種新的冠心病診斷標志物，從而在冠心病的診斷方面發(fā)揮重要的作用。但現(xiàn)階段對microRNA表達與冠心病診斷的相關(guān)性研究還不夠深入、不夠全面，在老年冠心病發(fā)生時，其血漿中的microRNA 會如何表達，表達機制又是一個什么樣的過程，這些問題都有待進一步探索[10]。但隨著標志物檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，有望提高對microRNA表達檢測的靈敏性，microRNA表達檢測可能成為臨床上診斷老年冠心病的一種新型、安全的手段。此外，對microRNA調(diào)控藥物的研究，極有可能拓展現(xiàn)有藥物對治療病種的范圍。目前，臨床上對冠心病的治療方法主要有：經(jīng)皮冠狀動脈介入(PCI)治療，服用洛伐他汀、普伐他汀等降脂藥物控制病情，采用卡托普利、依那普利等血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)控制血壓及治療心力衰竭，服用厄貝沙坦、氯沙坦等血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)保護病人腎臟功能，采用這兩類傳統(tǒng)藥物對冠心病進行治療均會出現(xiàn)頭痛、眩暈及心悸等不良反應(yīng)。關(guān)于基因調(diào)控治療冠心病的研究是當(dāng)前的一大熱點課題，研究microRNA的表達機制、調(diào)控機制，從而掌握micro RNA與冠心病的確切相關(guān)性，有助于研發(fā)預(yù)防與治療冠心病的新型藥物[11]。

本研究結(jié)果顯示，研究組血漿microRNAs表達明顯高于對照組，說明microRNA在老年冠心病病人體內(nèi)的表達要明顯高于正常人；經(jīng)過擴量檢測后發(fā)現(xiàn)：研究組miR-206、miR-574-5p表達均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示miR-206及miR-574-5p表達極有可能成為診斷老年冠心病的一種新的標志物。

綜上所述，血漿microRNAs在老年冠心病病人中的基因表達要明顯高于健康體檢者，尤其是血漿中miR-206 和 miR-574-5p的表達在老年冠心病病人中的升高幅度更明顯，這兩種基因的表達變化情況有望成為臨床診斷老年冠心病的重要指標。