細(xì)胞凋亡主要檢測(cè)方法及其應(yīng)用

何玉婷，楊 雯，王改琴，張旭東※

(1.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院第一臨床學(xué)院2015級(jí)，山西 長(zhǎng)治 046000； 2.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，山西 長(zhǎng)治 046000)

細(xì)胞凋亡現(xiàn)象最早由Lockshin等于1965年發(fā)現(xiàn)，然而直到1972年Kerr等[1]才初次提出細(xì)胞凋亡這一概念。細(xì)胞凋亡定義為細(xì)胞為維持其內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，由基因控制的自主、有序而無(wú)炎癥性的消亡過(guò)程[2]。細(xì)胞凋亡過(guò)程是細(xì)胞主動(dòng)死亡的過(guò)程，涉及基因的激活、表達(dá)和調(diào)控等事件，由基因嚴(yán)格控制[3]。細(xì)胞凋亡的異常會(huì)使細(xì)胞失去控制，與腫瘤的發(fā)生、先天性畸形形成以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病、免疫系統(tǒng)疾病等疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[2,4]。細(xì)胞在凋亡過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)一系列特征性變化，包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成等形態(tài)學(xué)變化以及DNA特征性片段化、新基因表達(dá)、某些生物大分子合成等生物化學(xué)變化[5]。細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法正是基于凋亡細(xì)胞特殊的形態(tài)學(xué)改變和生物化學(xué)變化而設(shè)計(jì)的。近年來(lái)，凋亡細(xì)胞的判斷和機(jī)制的產(chǎn)生等方面進(jìn)展顯著，許多細(xì)胞凋亡檢測(cè)的方法得到更廣泛的應(yīng)用。現(xiàn)就近年來(lái)細(xì)胞凋亡主要檢測(cè)方法的進(jìn)展及其應(yīng)用進(jìn)行綜述，以期為相關(guān)研究領(lǐng)域的工作者提供參考與借鑒。

1 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)

細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)會(huì)出現(xiàn)一系列獨(dú)特的形態(tài)學(xué)特征，如細(xì)胞體積變小；核固縮，核仁碎裂，染色質(zhì)密度增高；胞質(zhì)濃縮，細(xì)胞器密度增高；細(xì)胞膜皺褶、卷曲、內(nèi)陷，并將胞質(zhì)和DNA分割包裹形成凋亡小體[2,6]。細(xì)胞凋亡過(guò)程中，凋亡小體被吞噬細(xì)胞或鄰周細(xì)胞識(shí)別、吞噬或自然脫落，無(wú)溶酶體及細(xì)胞膜破裂現(xiàn)象，無(wú)細(xì)胞內(nèi)含物外泄發(fā)生，周圍組織無(wú)炎癥反應(yīng)，也無(wú)次級(jí)損傷[2,6]。借用光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡或熒光顯微鏡可不同程度、不同層次地觀測(cè)到形態(tài)學(xué)特征。李媛媛和吳洪娟[7]用雙氫青蒿素體外誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞凋亡，借助透射電子顯微鏡觀察到凋亡晚期細(xì)胞核膜間隙增大，核膜完整性被破壞；染色質(zhì)高度濃縮、凝聚，呈半月形或團(tuán)塊狀，且堆積在核膜內(nèi)側(cè)緣或聚集于核中央部；線粒體腫脹，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)許多空泡和凋亡小體；細(xì)胞外可見(jiàn)大量細(xì)胞碎片。王宏剛等[8]用吖啶橙、Hoechst 33342等染色劑對(duì)DNA特異性染色，借助熒光顯微鏡、共聚焦激光顯微鏡清楚地觀察到染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化，細(xì)胞核裂解為碎塊等微細(xì)結(jié)構(gòu)變化。細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)的方法因簡(jiǎn)易、直觀和定位較好的優(yōu)點(diǎn)至今仍被使用，但也有不足之處：對(duì)結(jié)果的判定缺乏特定標(biāo)準(zhǔn)，主觀性大，因人而異；不能滿足定量的要求；對(duì)大樣本的檢測(cè)耗時(shí)費(fèi)力。由于形態(tài)學(xué)有較大局限性，因而多用于固定組織細(xì)胞檢測(cè)，常作為其他技術(shù)的基礎(chǔ)[2]。

2 細(xì)胞凋亡的DNA片段檢測(cè)

DNA斷裂是細(xì)胞凋亡最顯著的特點(diǎn)，細(xì)胞凋亡時(shí)，核酸內(nèi)切酶將DNA切割為更小的片段，可通過(guò)檢測(cè)DNA片段來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。常見(jiàn)的DNA片段檢測(cè)有瓊脂糖凝膠電泳法、原位末端標(biāo)記法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。

2.1瓊脂糖凝膠電泳法 瓊脂糖凝膠電泳法是利用具有網(wǎng)格結(jié)構(gòu)的瓊脂糖凝膠作為“過(guò)濾器”，不同分子量和帶電量的核酸和蛋白質(zhì)等生物結(jié)構(gòu)通過(guò)時(shí)受到的阻力大小不同，遷移的速度也不同，因此可將其分離[9]。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，Ca2+、Mg2+依賴型核酸內(nèi)切酶與相關(guān)蛋白水解酶被激活，將DNA降解，形成長(zhǎng)度為180～200 bp或其整倍數(shù)的DNA片段。生理情況下，活細(xì)胞DNA不斷裂，凝膠電泳為一正常條帶；壞死細(xì)胞的DNA隨機(jī)斷裂，凝膠電泳表現(xiàn)為彌漫連續(xù)模糊的條帶；而凋亡細(xì)胞的凝膠電泳一般形成等腰梯形條帶，這是凋亡具有代表性的重要的生化結(jié)果[2,10]。此法操作簡(jiǎn)單，定性準(zhǔn)確，但特異性和敏感性差，只能進(jìn)行半定量，不可定位檢測(cè)，且不適于檢測(cè)細(xì)胞凋亡初期DNA鏈的輕微損傷。

2.2原位末端標(biāo)記法 原位末端標(biāo)記法包括DNA聚合酶或克列諾酶介導(dǎo)的原位缺口平移法以及末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP原位缺口末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)，能很好地檢測(cè)DNA的分步降解。①原位缺口平移法[11]：細(xì)胞凋亡時(shí)，DNA多聚酶表達(dá)外切酶活性，使核苷酸由5′端切向3′端，借助DNA多聚酶Ⅰ(或Klenow)，并用帶有標(biāo)記的游離核苷酸從3′-OH末端連接到斷片上以修復(fù)DNA，可顯示出含有斷裂DNA的細(xì)胞，可用于細(xì)胞凋亡的觀察。②TUNEL[12-14]：其原理與原位缺口平移法相似，不同的是TUNEL所需的酶為末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶，該酶修復(fù)單鏈或雙鏈的DNA過(guò)程中不需DNA模板，可直接催化3′端的核酸聚合反應(yīng)，加入帶有熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素標(biāo)記的核苷酸，發(fā)生顯色反應(yīng)后可特異地進(jìn)行原位凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。正?；蛟鲋臣?xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂，因而近乎沒(méi)有3′-OH 形成，故很少被染色。原位末端標(biāo)記法對(duì)完整的凋亡細(xì)胞或凋亡小體進(jìn)行原位檢測(cè)，能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞凋亡最典型的生化和形態(tài)特征，并可檢測(cè)出少量凋亡細(xì)胞，適用于冰凍切片、石蠟包埋組織切片，以及培養(yǎng)的或從組織中分離的凋亡細(xì)胞測(cè)定，其敏感性高、操作較簡(jiǎn)便快捷，是目前應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡的熱門(mén)方法。需要注意的是，由于細(xì)胞壞死時(shí)胞內(nèi)也產(chǎn)生DNA片段，只有廣泛的DNA鏈發(fā)生斷裂才能說(shuō)明細(xì)胞發(fā)生凋亡；該法過(guò)程如果處理不恰當(dāng)極易造成假陽(yáng)性，且結(jié)果受實(shí)驗(yàn)者主觀影響較大，必須設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照，且成本偏高，若與其他方法結(jié)合使用可顯示出更好的優(yōu)越性。

2.3酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是將已知的特異性抗原或抗體吸附在固相載體(如聚丙酰胺、纖維素或聚苯乙烯等)表面并保存其免疫活性，使酶標(biāo)抗原或抗體有序地在固相表面進(jìn)行反應(yīng)的技術(shù)[15]。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，DNA發(fā)生核小體間的斷裂，形成由DNA與組蛋白(包含H、H2A、H2B、H3、H4五組分)緊密結(jié)合的核小體單位的片段[2]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)采用雙抗體(抗組蛋白抗體和抗DNA抗體)夾心免疫法檢測(cè)細(xì)胞凋亡后形成的核小體，酶催化后形成有色產(chǎn)物，根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺定性定量分析細(xì)胞的凋亡情況[2]。此方法所需細(xì)胞數(shù)量少，敏感性高，凋亡早中晚期均可進(jìn)行檢測(cè)，既可定性又可定量，且適合大批量樣本的檢測(cè)，無(wú)需特殊設(shè)備。缺點(diǎn)是因檢測(cè)對(duì)象是細(xì)胞質(zhì)中的核小體，故細(xì)胞裂解的時(shí)長(zhǎng)應(yīng)嚴(yán)格控制，否則裂解細(xì)胞時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則細(xì)胞核中的DNA片段也被顯色，最終影響檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性[16]，另外，也不能進(jìn)行細(xì)胞的組織學(xué)定位。

3 流式細(xì)胞術(shù)

流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)可對(duì)浮在液相中且分散著的生物細(xì)胞進(jìn)行定性、定量分析與分選，不僅速度快、敏感性和精確度高，而且對(duì)于不同細(xì)胞發(fā)生凋亡進(jìn)度不同的過(guò)程，F(xiàn)CM的檢測(cè)更準(zhǔn)確[17]。FCM檢測(cè)的信號(hào)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)相似，只是用熒光代替了催化酶。FCM通過(guò)檢測(cè)熒光參數(shù)及光射特征來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡，檢測(cè)得到的并非單個(gè)細(xì)胞的凋亡情況，而是對(duì)所有加入的懸浮細(xì)胞進(jìn)行凋亡情況統(tǒng)計(jì)。工作原理為當(dāng)待檢測(cè)的細(xì)胞依次排列進(jìn)入該儀器的液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)，經(jīng)激光照射，被熒光標(biāo)記了的細(xì)胞向空間各個(gè)方向散射光線，其中前向散射光(forward scatter，F(xiàn)SC)強(qiáng)度代表了細(xì)胞的大小，而側(cè)向散射光(side scatter，SSC)與細(xì)胞顆粒的復(fù)雜程度，即細(xì)胞內(nèi)部細(xì)胞器及胞質(zhì)的折射率有關(guān)。細(xì)胞凋亡時(shí)，細(xì)胞固縮，體積變小，細(xì)胞內(nèi)顆粒往往增多，故凋亡細(xì)胞的FSC降低，SSC增高；相反，正常細(xì)胞的FSC增高，SSC降低；而壞死細(xì)胞的FSC和SSC同時(shí)增高[18]。因此，可區(qū)分正常、壞死和凋亡細(xì)胞。郭茜茜等[19]認(rèn)為FCM適用于早、中期凋亡階段凋亡率的測(cè)定。但對(duì)于凋亡晚期，相關(guān)學(xué)者使用FCM的同時(shí)配合相關(guān)染色劑也得到了滿意結(jié)果[20]。需要注意的是，細(xì)胞胞質(zhì)是否均一、核與胞質(zhì)比率差異等均可使檢測(cè)結(jié)果不同，從而影響對(duì)凋亡細(xì)胞的判斷。

3.1細(xì)胞周期的測(cè)定 一個(gè)細(xì)胞周期可以人為地劃分為G1期、S期、G2期和M期，其中S期、M期為細(xì)胞增殖的關(guān)鍵時(shí)期，完成DNA的合成及細(xì)胞分裂。DNA含量隨這4個(gè)時(shí)期的變化而呈周期性變化[21]。線粒體介導(dǎo)的、膜受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡均與細(xì)胞周期密切相關(guān)，總是發(fā)生在細(xì)胞周期的特定時(shí)相(如星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡大多發(fā)生在G1期、G1期的阻留狀態(tài)即G0期)，細(xì)胞凋亡是細(xì)胞周期事件[22]。細(xì)胞凋亡后發(fā)生DNA斷裂，用碘化丙啶(propidine iodide，PI)、苯基吲哚、吖啶橙等染色劑標(biāo)記DNA，通過(guò)FCM分析，可以得到細(xì)胞各時(shí)期的分布狀態(tài)，便可計(jì)算出G1、S、G2和M期各占多少，以判定細(xì)胞凋亡的程度和比率[23]。其缺點(diǎn)是受反應(yīng)時(shí)間、溫度等影響，溢出DNA小片段的程度不同，會(huì)出現(xiàn)凋亡細(xì)胞與非凋亡細(xì)胞的重疊峰[14]。

3.2胱天蛋白酶(caspase)活性檢測(cè) 主要有4種蛋白分子家族參與細(xì)胞凋亡機(jī)制的發(fā)生，包括caspase家族、銜接蛋白、Bcl-2家族和凋亡抑制因子[24]。caspase家族在細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)和執(zhí)行中的作用十分關(guān)鍵，其中caspase-3被認(rèn)為是各種因素導(dǎo)致凋亡的關(guān)鍵酶，生理狀態(tài)下它以酶原的形式存在，并不表現(xiàn)活性，其活化是細(xì)胞凋亡的必由之路，預(yù)示著細(xì)胞執(zhí)行凋亡程序的開(kāi)始，是凋亡進(jìn)入不可逆階段的標(biāo)志[25]。目前，壞死細(xì)胞中尚未發(fā)現(xiàn)有caspase-3的活化，因此，通過(guò)檢測(cè)caspase-3活力強(qiáng)弱可判斷細(xì)胞是否凋亡或壞死。檢測(cè)caspase-3活性方法較多，可借助免疫電泳法、免疫凝膠擴(kuò)散法等分析caspase-3酶原加工的中間產(chǎn)物和底物水解后的最終產(chǎn)物，或用發(fā)色底物法(Trinder反應(yīng))合成底物檢測(cè)酶活力，或?qū)⒒罨腸aspase-3還原，在還原體系中加入化學(xué)試劑生成顯色物質(zhì)，通過(guò)比色法得出還原物質(zhì)的量，進(jìn)而計(jì)算酶的活性[17]。這些方法再結(jié)合FCM可定性和定量檢測(cè)凋亡細(xì)胞，且準(zhǔn)確性好、敏感性高、特異性強(qiáng)，但是在凋亡晚期，caspase-3活性大幅下降，因此這種方法更適用于細(xì)胞凋亡的早期檢測(cè)。

3.3磷脂酸結(jié)合蛋白V(Annexin V)/PI雙染法對(duì)凋亡細(xì)胞的檢測(cè) 磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，PS)又稱復(fù)合神經(jīng)酸，位于正常細(xì)胞膜的胞質(zhì)一側(cè)，在細(xì)胞凋亡早期，PS可從細(xì)胞膜胞質(zhì)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜外表面[26]?；诖爽F(xiàn)象，利用Ca2+依賴性Annexin V可與PS特異性結(jié)合，且親和力高，用Annexin V(熒光素或生物素標(biāo)記)作為熒光探針，采用FCM或熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)，此法敏感性較高，適用于細(xì)胞凋亡早中期。不足之處是壞死細(xì)胞的PS亦暴露于細(xì)胞膜外表與Annexin V結(jié)合，出現(xiàn)假陽(yáng)性，干擾檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。PI為一種核酸染色劑，與細(xì)胞核結(jié)合將細(xì)胞核染為紅色。PI不可透過(guò)正常的細(xì)胞膜，可透過(guò)凋亡中晚期以及壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜，適用于在排除細(xì)胞壞死的前提下細(xì)胞凋亡中晚期檢測(cè)[27]。將Annexin V與PI同時(shí)使用，借助FCM分析Annexin V和PI的示色情況，其中Annexin V-/PI-、Annexin V+/PI+、Annexin V+/PI-、Annexin V-/PI+分別表示正常、壞死、凋亡和機(jī)械性損傷的細(xì)胞[28-29]。該方法的特點(diǎn)是細(xì)胞分群明顯，結(jié)果靈敏，但是為防止造成細(xì)胞膜損傷，操作要求嚴(yán)格，費(fèi)用昂貴。

4 線粒體膜電位變化的檢測(cè)

線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential，Δψm)是指線粒體內(nèi)膜兩側(cè)質(zhì)子分布不均一而形成的電化學(xué)梯度。研究表明，細(xì)胞凋亡時(shí)，線粒體膜孔道大小及膜電位會(huì)發(fā)生改變，許多刺激因子可通過(guò)線粒體誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。凋亡早期的細(xì)胞，線粒體鏡下還未出現(xiàn)顯著變化時(shí)，實(shí)際上其膜電位已經(jīng)開(kāi)始改變：膜通透性增加，跨膜電位下降[30-31]。因此Δψm下降被認(rèn)為是凋亡最早的步驟，如果Δψm被破壞，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)[31]。一些親脂陽(yáng)離子熒光染料，如羅丹明123、JC-1、DiOC6(3)等可與線粒體基質(zhì)緊密結(jié)合，細(xì)胞聚集染料能力的下降程度與膜電位的下降程度呈正相關(guān)[32]。細(xì)胞凋亡時(shí)，線粒體內(nèi)膜負(fù)電位絕對(duì)值減小，熒光強(qiáng)度降低，借助FCM以及熒光顯微鏡均可精確地檢測(cè)出線粒體跨膜電位的變化情況，可判斷細(xì)胞凋亡的發(fā)生。岳磊等[17]用紫外線照射HeLa細(xì)胞后，經(jīng)羅丹明123染色，熒光強(qiáng)度減弱，Δψm明顯下降，認(rèn)為結(jié)合FCM可快速的定性、定量分析凋亡細(xì)胞。需要注意的是，Δψm變化的檢測(cè)屬于電化學(xué)方法，pH值的改變會(huì)影響細(xì)胞膜電位變化，在應(yīng)用時(shí)需保持平衡染液pH值前后一致。

5 細(xì)胞凋亡相關(guān)基因及其產(chǎn)物的檢測(cè)

細(xì)胞凋亡是在基因調(diào)控下的細(xì)胞自我消亡過(guò)程。細(xì)胞凋亡時(shí)某些基因表達(dá)異常產(chǎn)物，這些基因轉(zhuǎn)錄翻譯出來(lái)的產(chǎn)物可促進(jìn)或抑制細(xì)胞凋亡，如細(xì)胞凋亡蛋白家族、凋亡蛋白酶活化因子1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)及Fas(Apo-1，CD95)等。線粒體在細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起中心調(diào)控的重要作用，病理狀態(tài)下，其結(jié)構(gòu)破壞以及功能紊亂與細(xì)胞凋亡有不可分割的關(guān)系[33]。Bcl-2、Bax、Bad、Bak組成的細(xì)胞凋亡蛋白家族主要作用在線粒體膜上，其中調(diào)控因子Bcl-2和Bcl-xl具有減緩細(xì)胞異常凋亡的作用；而B(niǎo)ax、Bad與Bak可加快細(xì)胞的凋亡[34]。Apaf-1是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的腫瘤抑制基因，Apaf-1和caspase-9酶原(procaspase-9)與細(xì)胞色素C結(jié)合后形成的凋亡體可激活procaspase-9，引起caspase(如caspase-3等)一系列反應(yīng)，從而引發(fā)細(xì)胞發(fā)生凋亡[35]。Apaf-1是C-myc癌基因誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的相關(guān)因子，參與線粒體途徑的凋亡[36]。Fas是一種膜蛋白受體分子，多數(shù)分布于細(xì)胞表面，少數(shù)存在于血液系統(tǒng)。Fas與Fas抗體/配體結(jié)合后，促使細(xì)胞凋亡[37]。這些相關(guān)基因及其表達(dá)產(chǎn)物的測(cè)定可為細(xì)胞凋亡檢測(cè)提供依據(jù)。

6 細(xì)胞凋亡的細(xì)胞色素C檢測(cè)

細(xì)胞色素C是一種信號(hào)蛋白質(zhì)，生理情況下存在于線粒體內(nèi)外膜之間，不能自由通過(guò)線粒體的外膜。接收到凋亡信號(hào)后，細(xì)胞色素C可從膜間隙轉(zhuǎn)移至胞質(zhì)中，在ATP作用下特異地與Apaf-1緊密結(jié)合，啟動(dòng)一系列caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而引發(fā)細(xì)胞凋亡[35]。蛋白印跡法(Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，再利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的方法。細(xì)胞色素C作為蛋白質(zhì)，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，再進(jìn)行化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，從而判斷凋亡的發(fā)生[38]。

7 細(xì)胞凋亡的Ca2+濃度變化測(cè)定

細(xì)胞的生命活動(dòng)都離不開(kāi)Ca2+，Ca2+超載時(shí)，心肌細(xì)胞的線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放，細(xì)胞色素C等凋亡因子通過(guò)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔釋放或使線粒體膨脹破裂進(jìn)入胞質(zhì)，活化細(xì)胞色素C依賴的細(xì)胞凋亡通路后激活caspase-3，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[39-41]。細(xì)胞內(nèi)外Ca2+平衡與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)主要是通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)來(lái)維持的，當(dāng)平衡被破壞后可引起細(xì)胞凋亡[42]。用Ca2+特異性熒光探針，如Rhod-2、Indo-1等對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記后，再用FCM或熒光、共聚焦激光顯微鏡檢測(cè)。這種方法可以準(zhǔn)確地得出細(xì)胞凋亡的生理免疫指標(biāo)，且實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明性較強(qiáng)。

8 小 結(jié)

細(xì)胞凋亡是一個(gè)步驟繁多的過(guò)程，在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)以及臨床診斷中，細(xì)胞凋亡的檢測(cè)占有非常重要的地位。細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法較多，以上均是主要而常用的檢測(cè)方法，還有一些檢測(cè)方法，如端粒酶的檢測(cè)、mRNA水平的檢測(cè)、乙酰膽堿酯酶的檢測(cè)及微流體技術(shù)等沒(méi)有列入。每種方法均有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)針對(duì)不同凋亡階段的細(xì)胞采用多種檢測(cè)方法相結(jié)合，這樣才可以觀察到實(shí)驗(yàn)細(xì)胞真實(shí)準(zhǔn)確的凋亡結(jié)果，從而對(duì)該結(jié)果進(jìn)一步深入分析得出相應(yīng)結(jié)論。相信隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展以及人類對(duì)細(xì)胞凋亡機(jī)制的探索進(jìn)一步深入，會(huì)出現(xiàn)更多準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)和耗費(fèi)少的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的新方法。