某規(guī)模化豬場主要豬繁殖障礙性傳染病抗體檢測及分析

宋 敏，吳圓圓，屈勇剛*，于會舉，楊慧敏,2，任 敏，魏 其，谷思穎

（1.石河子大學動物科技學院 ，新疆 石河子 832000；2.石河子市添元生物科技有限公司，新疆 石河子 832000）

隨著新疆畜牧業(yè)的迅速發(fā)展，南疆養(yǎng)殖的規(guī)模也在逐年擴大，在生豬養(yǎng)殖數(shù)量日益增多的同時，豬只流動頻繁，疫病發(fā)生的條件變得愈加復雜。豬群的感染發(fā)病受諸多因素的影響，必須嚴密結合豬場生產狀況、發(fā)病特點和時間等具體情況進行免疫程序的制定或調整，科學制定的免疫程序需要依靠血清抗體水平的監(jiān)測[1]來配合。南疆某規(guī)?；i場生豬存欄2.8萬頭，其中母豬存欄共2?400頭。為了掌握豬群常見繁殖障礙性傳染病的整體抗體水平，采集307份血清樣品進行常見繁殖障礙性傳染病的抗體檢測和分析，以期為制定合理的免疫程序或調整免疫程序提供依據(jù)，現(xiàn)將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

血清樣品共307份，其中0～10日齡仔豬12份、14日齡仔豬29份、25日齡保育豬29份、53日齡保育豬28份、103日齡育肥豬30份、145日齡育肥豬30份、妊娠30～60日母豬30份、妊娠90日母豬30份、哺乳母豬30份、后備母豬30份、種公豬29份。采血后自然凝固，分離血清，置4?℃冰箱保存待測。

1.2 檢測試劑盒

實驗采用的診斷試劑盒分別為99-43220豬瘟病毒（CSFV）ELISA抗體檢測試劑盒（批號：H931）、99-40959豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）ELISA抗體檢測試劑盒（批號：J051）、99-09836豬偽狂犬病gI（PRV-gE）抗體檢測試劑盒（批號：KM818），99-09732豬偽狂犬病 gB（PRV-gB）抗體檢測試劑盒（批號：HM634）均購自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

1.3 檢測方法與結果判定

1.3.1 檢測方法

按照上述ELISA試劑盒說明書對307份血清進行CSFV、PRRSV抗體水平的檢測，從所采集各類別豬群血清樣本中抽取20%進行PRV-gB和PRV-gE蛋白抗體水平的檢測。

1.3.2 結果判定

1.3.2.1??抗體陽性率測定

對于CSFV，計算阻斷率，阻斷率=（陰性對照OD450nm平均值-樣品OD450nm值）÷陰性對照OD450nm平均值×100%。對于PRRSV，計算S/P值，S/P=（樣品OD650nm值-陰性對照OD650nm平均值）÷（陽性對照OD650nm平均值-陰性對照OD650nm平均值），S/P≥0.40判為陽性；S/P＜0.40判為陰性。對于PRV-gB及PRV-gE，計算S/N比值，S＝樣品孔OD650nm值，N＝陰性對照孔平均OD650nm值，若S/N比值≤0.35，樣品判為陽性；S/N比值＞0.4，判為陰性；S/N介于0.35和0.4之間，判為可疑。以上述判定標準對CSFV、PRRSV、PRV-gB三項抗體檢測結果進行判定。

1.3.2.2??離散度計算

各類別豬群抗體水平的離散度通過變異系數(shù)來反映，用SPSS?軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計算平均數(shù)x-、標準差SD，變異系數(shù)C·V=（標準差SD÷平均數(shù)x-）×100%。

2 結果

2.1 該豬場4種抗體檢測結果

307份血清樣品中豬瘟病毒抗體陽性率為81.11%（249/307），陰性率為12.70%（39/307）， 可 疑 率 為 6.19%（19/307），阻斷率平均值為65.06%，離散度為37.69%。307份血清樣品中豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性率為90.23%（277/307），陰性率為 9.77%（30/307），S/P平 均 值 為 1.64， 離散度為52.69%。63份血清中豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體陽性率為95.24%（60/63），陰性率為0%（0/63），可疑率為4.76%（3/63），檢測平均S/N值為0.088，離散度為161.30%；63份血清中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體陽性率為69.84%（44/63），陰性率為28.57%（18/63）， 可 疑 率 為 1.59%（1/63），檢測平均S/N值為0.35，離散度為103.59%，結果見表1。

表1 某規(guī)?；i場豬常見傳染病抗體檢測結果

2.2 ?該豬場不同豬群的抗體水平檢測結果

2.2.1 不同豬群血清中CSFV抗體水平（75.27±13.32）%、（57.15±27.88）%、（31.19±22.43）%、（63.26±20.06）%、（55.37±24.75）%、（68.44±18.06）%、（77.88±13.09）%、（75.21±20.50）%、（88.18±6.59）%、（68.42±15.46）%；抗體水平離散度分別為83.72%、17.7%、48.78%、71.92%、31.7%、44.69%、26.39%、16.81%、27.26%、7.48%、22.6%。實驗統(tǒng)計結果見表2。

表2 不同類別豬群CSFV免疫抗體陽性率檢測結果

2.2.2 不同豬群血清中PRRSV抗體水平

對該豬場不同類別豬群的CSFV抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率分別為：41.67%、96.55%、72.41%、21.43%、83.33%、76.67%、90%、100%、90%、100%、93.1%；阻斷率平均值分別為（31.57±26.43）%、

對該豬場不同類別豬群的PRRSV抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率分別為：50%、86.21%、72.41%、100%、100%、100%、90%、93.33%、86.67%、100%、93.1%；S/P平均值分別為1.15±1.18、0.88±0.39、0.74±0.53、2.35±0.28、2.34±0.53、2.38±0.62、1.42±0.65、1.32±0.69、1.16±0.69、2.59±0.29、1.41±0.59；抗體水平離散度分別為103%、44.2%、70.83%、11.86%、22.87%、25.92%、45.71%、52.31%、59.28%、11.18%、41.65%。統(tǒng)計結果見表3。

2.2.3 不同豬群血清中PRV-gB蛋白抗體水平

對該豬場不同類別豬群的PRV-gB蛋白抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的抗體陽性率除145日齡育肥豬抗體陽性率為66.67%外，其余豬群抗體陽性率均為100%；S/N 平 均 值 分 別 為 ：0.036±0.007?6、0.029±0.030、0.030±0.0011、0.11±0.11、0.17±0.11、0.37±0.31、0.036±0.014、0.030±0.0012、0.031±0.0019、0.067±0.023、0.031±0.0019；抗體水平離散度分別 為：20.82%、104.55%、3.78%、100.7%、62.12%、83.08%、38.69%、3.99%、6.21%、33.56%、6.12%。 實驗統(tǒng)計結果見表4。豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體水平曲線圖見圖1。

2.2.4 不同豬群血清中PRV-gE蛋白抗體水平

對該豬場不同類別豬群的PRV-gE蛋白抗體水平進行分析發(fā)現(xiàn)，0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、25日齡保育豬、53日齡保育豬、103日齡育肥豬、145日齡育肥豬、妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬、后備母豬、公豬的陽性率分別為：100%、100%、100%、83.33%、0%、0%、100%、66.67%、66.67%、100%、83.33%；S/N平均值分別為：0.18±0.081、0.13±0.12、0.33±0.12、0.42±0.25、0.88±0.11、0.92±0.090、0.061±0.015、0.30±0.38、0.36±0.43、0.15±0.070、0.20±0.36；抗體水平離散度分別為：45.19%、91.19%、35.31%、59.29%、12.59%、9.71%、23.99%、126.2%、117.84%、45.63%、180.3%。實驗統(tǒng)計結果見表4。豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體水平曲線圖見圖2。

3 分析與討論

3.1 該豬場4種抗體檢測結果

從整體看豬群CSFV、PRRSV、PRV-gB蛋白抗體水平陽性率較高，免疫防控效果較好，均在80%以上，大于吳群等檢測的粵西地區(qū)3種豬病病毒的平均合格率[2]，根據(jù)具體情況應對陰性豬只或抗體水平低的豬只進行補免。PRV-gE蛋白抗體陽性率為69.84%，離散度較高，提示豬群可能存在PRV野毒感染；豬場應對豬偽狂犬病野毒防控引起重視，從圖1可以看出豬群部分豬只抗體低影響了豬群抗體整齊度，應時刻觀察仔豬、保育豬有無站立時后肢打顫，明顯麻痹癥狀伴抽搐、癲癇等[3]癥狀。

3.2 該豬場不同豬群的抗體水平分析

3.2.1 不同豬群血清中CSFV抗體水平分析

0～10日齡仔豬陽性率只有41.67%，離散度為83.72%，14日齡陽性率為96.55%，說明有部分剛出生仔豬獲得母乳抗體較少，需加強飼養(yǎng)管理，多關注搶不到奶頭的小豬，若臨床有仔豬發(fā)病需及時隔離處理。有研究表明，提升母豬分娩時的抗體含量可提高仔豬母源抗體水平[4]。25日齡時，抗體阻斷率從14日齡的（75.27±13.32）%下 降 到（57.15±27.88）%， 說 明首免時間定在此時間段后，較為合適，避免母源抗體干擾[5]；53日齡豬群陽性率為21.43%，阻斷率下降至（31.19±22.43）%，離散度較大，說明抗體水平整齊度低，需配合保健增強抵抗力，盡快進行豬瘟二免提高豬群抗體水平；育肥豬陽性率分別為83.33%、76.67%均保持較高水平；陰性豬只是否存在漏免現(xiàn)象，需結合臨床情況具體分析，對于抗體水平較低的豬只可進行補免，1個月后再次采血檢測抗體，仍為陰性進行淘汰[6]；后備母豬、公豬豬瘟的免疫防控效果良好，整齊度高。

表3 不同類別豬群PRRSV免疫抗體陽性率檢測結果

表4 不同類別豬群PRV抗體陽性率檢測結果

3.2.2 不同豬群血清中PRRSV抗體水平分析

本次檢測中，53日齡保育豬、育肥豬、后備母豬免疫抗體陽性率最高，為100%，離散度相對穩(wěn)定，但S/P值＞2.5的比例也相對較高，應根據(jù)臨床觀察是否有PRRSV毒血癥等癥狀發(fā)生；妊娠30～60日母豬、妊娠90日母豬、哺乳母豬的陽性率分別為90%、93.33%、86.67%，產后母源抗體呈下降趨勢，離散度分別為45.71%、52.31%、59.28%逐漸增大；0～10日齡仔豬的PRRSV抗體陽性率最低，只有50%，其中S/P值＞2.5的樣品份數(shù)占25.00%，離散度為103%，14日齡仔豬和25日齡保育豬陽性率分別為86.21%、72.41%，S/P平均值較低分別為0.88±0.39、0.74±0.53，抗體水平整齊度不佳，表明在采樣時，疫苗免疫后仔豬群體內抗體水平尚未上升到穩(wěn)定水平，經過保健等綜合防控措施，53日齡后的豬群中抗體達到穩(wěn)定水平；后備母豬100%，S/P值為2～2.5樣品數(shù)為30.00%，S/P值＞2.5的樣品份數(shù)占66.67%，離散度為11.18%，抗體整齊度較高，說明后備母豬經過入群前馴化達到理想效果，抗體水平穩(wěn)定于可抵御豬藍耳病野毒的較高水平，但仍需加強飼養(yǎng)管理，密切關注高抗豬群日常生長狀況[7]；公豬群陽性率為93.1%，離散度為41.65%，需對抗體較高豬只進行重點觀察，必要時對其精液進行病毒抗原檢測[8]，避免因精液中帶有病毒，導致相互感染傳播[9]。對抗體較低豬只進行補免。由于間接ELISA只能檢測出抗體水平高低，卻不能鑒別是疫苗毒與野毒，需時刻關注S/P值＞2.5的豬只生長狀況，并通過日常飼養(yǎng)管理，減少病毒傳播可能。

圖1 某規(guī)模化豬場豬偽狂犬病毒gB蛋白抗體水平

圖2 某規(guī)?；i場豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體水平

3.2.3 不同豬群血清中PRV-gB蛋白抗體水平分析

豬偽狂犬病毒只有一種血清型，越早讓仔豬進行滴鼻免疫，疫苗毒會搶先與機體的天然靶位產生“占位效應”，降低野毒感染風險[10]。0～10日齡仔豬、14日齡仔豬、母豬和公豬的S/N平均值維持在0.1以下，且抗體整齊度較高表明免疫效果較好；14日齡仔豬、53日齡保育豬、育肥豬陽性率較高，但離散度較大，其中145日齡豬陽性率為66.67%，需加強免疫。

3.2.4 不同豬群血清中PRV-gE蛋白抗體水平分析

從本次抽檢結果看，該豬場PRV-gE蛋白抗體陽性率較高，公豬陽性率為83.33%，母豬中后備母豬與妊娠30～60日母豬陽性率為100%，妊娠90日母豬及哺乳母豬陽性率為66.67%，提示野毒感染比較普遍，有研究表明[11-13]各省份豬場PRV-gE蛋白抗體陽性率呈逐年上升趨勢。本次檢測哺乳仔豬與母豬PRV-gE蛋白抗體陽性率較接近，0～25日齡仔豬陽性率為100%、53日齡為83.33%、之后育肥豬陽性率為0%，PRV-gE蛋白抗體逐漸降低，這與段群棚等[14]調查結果相符，其原因很可能是來自母豬感染野毒后的母源抗體在仔豬群內隨時間逐漸消失。免疫缺失疫苗后豬群臨床無明顯發(fā)病癥狀，這與左玉柱曾表示“如果母豬gE抗體陽性，仔豬在7～8周齡之前為陽性，其后逐漸轉陰性，說明仔豬偽狂犬病疫苗免疫是有效的，使仔豬沒有再感染偽狂犬野毒”結論一致[1]。