不同桑品種的桑葉多酚和黃酮含量的測(cè)定

王瑞嫻，楚 渠，禚 蘇，楊松杰

(1.安康學(xué)院 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與生物科技學(xué)院，陜西 安康 725000；2. 陜西省蠶桑重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西 安康 725000)

桑(Morus alba L.)是?？?Moraceae)桑屬(Morus L.)的落葉喬木或灌木，多年生葉用經(jīng)濟(jì)作物。桑樹具有耐貧瘠、耐干旱、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，有較廣的栽培范圍。我國(guó)桑樹種植的歷史悠久，但對(duì)桑種質(zhì)的開發(fā)利用研究較少，許多桑種質(zhì)的藥用價(jià)值并未完全發(fā)掘。

多酚是植物中的酚類次生代謝產(chǎn)物，在植物葉、果、皮、根中廣泛存在，桑樹中約占桑葉干重的1%～3%左右[1]。桑葉多酚具有抗輻射、抗衰老等功能[2～5]，可以應(yīng)用于非酒精性脂肪性肝病的治療[6]。黃酮類化合物主要包括蘆丁、槲皮素和異槲皮苷等成分，能清除自由基[7]、降血糖[8]、降血壓[9]等作用。安康學(xué)院多年來(lái)收集和保存了數(shù)百份國(guó)內(nèi)外各地不同地域來(lái)源的桑樹資源，其中多數(shù)品種的綜合利用價(jià)值尚未得到基于有效成分的評(píng)估。筆者對(duì)15個(gè)不同桑品種的桑葉多酚和黃酮進(jìn)行提取及含量測(cè)定，為綜合評(píng)估桑樹種質(zhì)資源的利用價(jià)值以及深入研究和開發(fā)桑資源提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)的供試材料分別為浙農(nóng)桑、鏡泊桑、羊角桑、日本早生、望天青、GM41、麻桑、扶桑丸、魯9463、鳳尾桑、黃桑、朝桑、紅頭桑、桐鄉(xiāng)青、烏克蘭。取6～15位的新鮮葉片，洗掉泥沙等雜物，用雙蒸水沖洗干凈，自然晾干后于75℃干燥箱中干燥1 h，粉碎過(guò)60目篩子，-20℃密封保存。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 沒食子酸和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 參照沈維治等人[10]的方法繪制沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。參照康璇[11]等人的方法繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 桑葉多酚的提取與測(cè)定 分別準(zhǔn)確稱取1g桑葉粉，用少許95%乙醇溶解，加入蒸餾水使得固液比為1∶25，于60℃恒溫水浴鍋中浸提90 min，取出后冷卻，5 000 r·min-1離心15 min，轉(zhuǎn)移上清液于50 mL容量瓶中定容。

分別吸取1.0 mL提取液，加入5.0 mL水、1.0 mL福林試劑和3.0 mL 10%碳酸鈉溶液，混勻，靜置2 h，顯色，在765 nm波長(zhǎng)下測(cè)定試樣溶液的吸光度。

1.2.3 桑葉黃酮的提取及測(cè)定 準(zhǔn)確稱取5 g桑葉粉，用60%的乙醇在80℃的水浴鍋中浸提3 h。用4層紗布過(guò)濾浸提液，將濾液濃縮至50 mL，待用。取濃縮液15 mL，5 000 r·min-1離心30 min，取上清，使用60%乙醇定容至100 mL，供試。

取桑葉黃酮供試液5 mL于25 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1三氯化鋁乙醇溶液定容至25 mL，混勻，靜置10 min，以三氯化鋁乙醇溶液為空白，測(cè)定桑葉黃酮供試液400 nm波長(zhǎng)處吸光值，根據(jù)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算桑葉中的黃酮總含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用EXCEL2010和SPSS19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 多酚和黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別在765 nm和400 nm波長(zhǎng)處，測(cè)得沒食子酸和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值，以吸光度為縱坐標(biāo)(圖1)，得沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.0032x+0.0290，R2=0.9952；獲得蘆丁回歸方程為y=17.215x-0.0005，回歸系數(shù)R2=0.9962。表明沒食子酸和蘆丁在一定的范圍內(nèi)濃度與吸光值之間有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2均大于0.99，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性高，分析結(jié)果穩(wěn)定。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 桑葉多酚和黃酮總含量測(cè)定

分別對(duì)15份桑品種桑葉中的多酚和黃酮含量進(jìn)行測(cè)定(表1)。

表1 桑葉多酚和黃酮的含量

分析發(fā)現(xiàn)15份桑樹種質(zhì)中桑葉多酚含量介于0.358～4.256 mg·g-1之間，紅頭桑的含量最低，其值為0.358 mg·g-1，浙農(nóng)桑的多酚含量最高，達(dá)到4.256 mg·g-1，紅頭桑的11.89倍，這體現(xiàn)了浙農(nóng)桑在桑葉多酚的開發(fā)利用領(lǐng)域所蘊(yùn)含的潛在價(jià)值。

桑葉黃酮的含量在14.389-32.200 mg·g-1之間，其中望天青品種的桑葉中含有的黃酮含量最低，每克桑葉中僅含有14.389 mg的黃酮，鳳尾桑的桑葉中黃酮含量最高，每克桑葉中含有32.200 mg的黃酮，黃桑次之，每克桑葉中含有31.294 mg的黃酮。說(shuō)明鳳尾桑和黃桑在黃酮利用領(lǐng)域具有較大的價(jià)值。

2.3 供試桑品種中多酚和黃酮的相關(guān)性分析

對(duì)同一桑種質(zhì)桑葉中多酚和黃酮含量進(jìn)行相關(guān)系數(shù)矩陣分析(表2)。桑葉多酚與黃酮含量的相關(guān)系數(shù)為-0.168，且觀測(cè)到的顯著性水平為0.548，遠(yuǎn)大于0.05，因此在同一桑品種桑葉中多酚和黃酮含量之間沒有相關(guān)關(guān)系。

表2 桑葉中多酚和黃酮含量的相關(guān)性

3 討論

不同品種的桑葉中黃酮類化合物含量的差異一般是由外部因素和內(nèi)部因素影響的，外部因素主要包括生長(zhǎng)環(huán)境、桑葉位置等影響。內(nèi)部因素主要是品種的差異，其中，品種的差異是不同桑品種桑葉中黃酮含量不同的主要原因。劉利等人的研究顯示，桑樹中黃酮類化合物的含量與桑樹的抗逆性有關(guān)，抗逆性強(qiáng)的桑品種，其桑葉中的黃酮含量明顯較高[12]。研究中鳳尾桑的桑葉中黃酮含量最高，望天青的含量最低，經(jīng)查閱資料發(fā)現(xiàn)，鳳尾桑和望天青同屬于魯桑，前者抗萎縮病能力較強(qiáng)，而后者抗細(xì)菌病、萎縮病較弱，體現(xiàn)出抗逆性較高的鳳尾桑黃酮含量較高，與前人的研究結(jié)果相一致。研究為提高桑樹種質(zhì)資源的開發(fā)利用價(jià)值提供了一定的理論基礎(chǔ)。