高效液相色譜法檢測(cè)大棗中溴氰菊酯殘留

劉世軍，唐絨絨，唐志書，雷甜甜，王 錦，劉垚潤

(1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)/陜西省中藥資源產(chǎn)業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，陜西 咸陽 712083;2.陜西省創(chuàng)新藥物研究中心，陜西 咸陽 712083;3.陜西省風(fēng)濕與腫瘤類中藥制劑工程技術(shù)研究中心，陜西 咸陽 712083)

大棗藥食兩用，營養(yǎng)豐富，含有三萜、皂苷、生物堿、黃酮等多種活性成分[1]，具有很高的醫(yī)療和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其深加工技術(shù)正向復(fù)合飲料(將大棗汁和其它果品混合生產(chǎn))、著色劑或食用色素(用于食品、工業(yè)和化妝品)、藥品或保健食品(對(duì)其進(jìn)行深加工，研發(fā)出具有防治心腦血管和糖尿病等方面的制劑)等三方面發(fā)展[2]。由于用量大，涉及人群廣，所以大棗中的農(nóng)藥殘留逐漸引起了人們的重視。

溴氰菊酯為一種中等毒性農(nóng)藥，被棗農(nóng)所常用，該農(nóng)藥常通過皮膚、呼吸道、消化道進(jìn)入體內(nèi)，對(duì)人體有極大的危害性[3]，故檢測(cè)大棗中溴氰菊酯的殘留很有必要。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Waters e2695型)，低速臺(tái)式離心機(jī)(TDL-80-2B型，上海安亭科學(xué)儀器廠)，電熱鼓風(fēng)干燥箱(101-1型，北京科偉永興儀器有限公司)，N-丙基乙二胺固相萃取柱(陜西樂博生化科技有限公司)，超聲波清洗機(jī)(KQ-300DE型，昆山市超聲儀器有限公司)，電子分析天平(準(zhǔn)確度為0.0001 g，F(xiàn)A2004B型，上海佑科儀器儀表有限公司)，予華牌循環(huán)真空泵(SHZ-DⅢ型，鞏義市予華儀器有限責(zé)任)，燒杯，量筒。

1.2 試劑與材料

大棗(購自咸陽嘉惠市場)；氯化鈉、甲醇(500 mL)為分析純；乙腈、甲醇(4 L)為色譜純；活性炭、娃哈哈瓶裝水(500 mL)(陜西娃哈哈乳品有限公司)。

1.3 色譜條件[4]

色譜柱：BDS HYPERSIL C18(250 mm×4.6 m，5 μm)；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長：254 nm；流動(dòng)性：甲醇 ∶水=90 ∶10；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30℃。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 對(duì)照品溶液的配制

對(duì)照品溴氰菊酯的濃度為0.025 g·mL-1，使用時(shí)用甲醇(分析純)稀釋成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)使用液(精密量取溴氰菊酯0.1 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得100 μg·mL-1的對(duì)照品溶液)。

2.2 樣品的測(cè)定[5]

2.2.1 樣品的前處理 取樣品25 g，精密稱定，加入50 mL乙腈，超聲2 min，抽濾，濾液中加入5～7 g氯化鈉，溶解，抽濾，設(shè)計(jì)濾液45 mL，劇烈搖勻，靜置30 min，取上層乙腈相20 mL，加入0.3 g活性炭粉末，以5 000 r·min-1離心1 min，取上清液10 mL于40℃烘干，加2 mL甲醇溶解殘?jiān)芙夂筮^活化好的N-丙基乙二胺固相萃取柱，用甲醇 ∶水(3 ∶2)洗脫，準(zhǔn)確定容2.5 mL，混勻后過0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

2.2.2 制備樣品的定性和定量 定性采用外標(biāo)法(保留時(shí)間)，定量采用標(biāo)準(zhǔn)曲線。在以上所述色譜條件下，吸取待測(cè)樣品10 μL進(jìn)樣，重復(fù)3次，取面積平均值，根據(jù)所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線，查到實(shí)際濃度，通過計(jì)算得到所制樣品中溴氰菊酯的殘留量。

3 結(jié)果與討論

3.1 分析方法的線性關(guān)系[6]

用電子分析天平稱取溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容，配制成溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液母液，隨后稀釋成2、4、6、8、10、12 μg·mL-1等不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述選定的色譜條件下測(cè)定，得到色譜圖，以出峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明溴氰菊酯的濃度與峰面積在特定區(qū)間下呈線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=147164x-11210，R2=0.9995。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。

圖1溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線

3.2 實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、精密度及回收率[7]

3.2.1 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取處理好的對(duì)照品溶液5份，在已經(jīng)選好的色譜條件下依次進(jìn)樣，依法測(cè)定農(nóng)藥含量，計(jì)算RSD為3.04%，表示本方法重復(fù)性良好。

3.2.2 精密度實(shí)驗(yàn) 主要有:

(1)日內(nèi)精密度。取同一種處理好的樣品，在同一天進(jìn)樣5次，計(jì)算溴氰菊酯的含量，RSD為2.33%，表示本方法日內(nèi)精密度良好。

(2)日間精密度。量取處理好的樣品，分別在6 d中每天進(jìn)樣一次，計(jì)算溴氰菊酯的含量，RSD為3.42%，表示本方法日間精密度良好。

3.2.3 回收率實(shí)驗(yàn) 采取標(biāo)樣添加法，加定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液到已經(jīng)知道含量的樣品中，在該色譜條件下測(cè)定，對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果表明本方法的回收率良好，如表1所示。

表1 大棗中溴氰菊酯農(nóng)藥加標(biāo)回收率的測(cè)定結(jié)果(n=3)

4 結(jié)論

目前檢測(cè)食品中農(nóng)藥殘留大多采用氣相色譜法，但是由于溴氰菊酯容易在氣相色譜柱中發(fā)生吸附[7]，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)一些偏差，不能真正反映食品中的農(nóng)藥殘留，會(huì)給消費(fèi)者帶來一定的誤導(dǎo)，故我們課題組通過實(shí)驗(yàn)，建立了溴氰菊酯農(nóng)藥高效液相檢測(cè)方法，可以達(dá)到有效檢測(cè)溴氰菊酯農(nóng)藥農(nóng)殘的目的,課題組為此類農(nóng)藥殘留增加了一種可行的檢測(cè)方法，重現(xiàn)性和靈敏度好，有利于控制不合格大棗流入市場，對(duì)人們的安全增加了一道保障。