幾種抗球蟲藥物對獺兔球蟲感染和幼兔生長性能的影響

蘭加花 福建省福安市潭頭鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站 福建福安 355014

兔球蟲病是家兔最常見且危害最為嚴重的寄生蟲病之一，目前據(jù)國內(nèi)外文獻報道已檢測出17種兔球蟲，其中包括16種艾美耳屬（Eimeria）和1種等孢屬（Isospora）球蟲[1-3]，除了斯氏艾美耳球蟲寄生肝臟膽管上皮細胞內(nèi)，其余均寄生在腸上皮細胞內(nèi)，多數(shù)為混合感染[4-5]，主要危害1～3月齡幼兔，60日齡內(nèi)最為敏感，感染率高達90%以上，患病幼兔死亡率高達40%～70%，成年兔多為臨床型或帶蟲者[6]。如不及時防治，常常導(dǎo)致幼兔大批死亡，給養(yǎng)兔業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。因此，應(yīng)用抗兔球蟲藥對防?治兔球蟲病大面積的暴發(fā)具有重要意義。在獺兔抗球蟲藥物預(yù)防和臨床治療上，先后有開展過莫能菌素、鹽霉素、氯苯胍、地克珠利、磺胺六甲氧嘧啶、復(fù)方抗球散等試驗[7-9]。我們先期調(diào)查了福建省某獺兔場球蟲感染情況，40～65日齡幼兔感染率最高，達98%以上；檢出的球蟲種類有11種[10]；該場有些抗球蟲藥物使用效果不佳，幼兔球蟲病死亡率最高達27%。因此，選取妥曲珠利等抗球蟲藥，觀測抗球蟲感染的效果以及對獺兔幼兔生長的影響，為獺兔養(yǎng)殖場正確防控球蟲病提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗用動物及分組 選取福建省福安市某獺兔場母兔健康狀況良好、出生時間相近的斷乳幼兔210只，隨機分為7組，抗球蟲藥物為2.5%妥曲珠利、5%腸球雙效和5%優(yōu)球樂，分為一次給藥組和二次給藥組，另設(shè)對照組。每組試驗幼兔死亡不補充、不寄養(yǎng)，按常規(guī)飼養(yǎng)和免疫。幼兔飼料采用臨沂市瑞泰飼料有限公司生產(chǎn)的兔用1號粒料，粗蛋白≥17%，斷乳后少量飼喂，逐漸加量，以15 min內(nèi)吃完為標準，每天投喂量約為體重的4%～5%，分2次投喂。

1.2 試驗器材 電子稱，最大稱量20 kg（精確度0.01 g）；注射器（1 mL）；生物顯微鏡；麥克馬斯特計數(shù)板；飽和食鹽水等。

1.3 試驗藥物 2.5%妥曲珠利溶液，拜耳（四川）動物保健有限公司生產(chǎn)（批號：CN18887）；5%腸球雙效（有效成分為鹽酸氨丙啉+磺胺喹噁啉鈉），南京龍馬動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號：20150123）；5%優(yōu)球樂（有效成分為癸氧喹酯），廣州華農(nóng)大實驗獸藥有限公司生產(chǎn)（批號：14060501）。

1.4 抗球蟲藥物試驗劑量、給藥及稱重、糞便采樣2.5%妥曲珠利、5%腸球雙效（鹽酸氨丙啉+胺喹噁啉鈉）、5%優(yōu)求樂（癸氧喹酯）分別設(shè)2個試驗組（一組為一次給藥組，另一組為二次給藥組），對照組為生理鹽水組，每組30只幼兔。試驗幼兔在斷乳時進行分籠、稱重和標記。2.5%妥曲珠利組按有效劑量30 mg/kg體重，5%腸球雙效組和5%優(yōu)球樂組按有效劑量50 mg/kg體重，分別用注射器經(jīng)口灌服，對照組每只灌服1 mL生理鹽水；1周后，二次給藥組再分別按上述劑量灌服。定期測定各組獺兔從斷乳到用藥后第8周的體重。

定期采集各組獺兔從斷乳到用藥后第8周新鮮糞樣（每籠采集2份樣品，每份20 g左右），分別裝入干凈鏈封塑料袋，注明兔籠編號、日齡、用藥情況等，最后將所采集的新鮮樣品裝入放有冰袋的采樣箱中帶回實驗室鏡檢。

1.5 OPG值檢測 用電子稱（精確度0.01 g）稱取2 g糞樣置于l00 mL燒杯中，用長柄藥匙將糞便搗碎，先加入l0 mL飽和食鹽水，充分攪拌成糞漿，再加入飽和鹽水至60 mL，用玻璃棒混勻；先用80目金屬篩網(wǎng)過濾一次，再用120目金屬篩網(wǎng)過濾，即刻用膠頭滴管吸取濾液注入到麥克馬斯特氏計數(shù)板的2個計室內(nèi)（避免產(chǎn)生氣泡），室溫下靜置2 min，然后在顯微鏡（×100）下檢查，計算左右2個刻度室的卵囊數(shù)（n1、n2），求得2個計室卵囊的平均數(shù)（單個該計數(shù)室的容積：1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 cm3），乘200即為每克糞樣中的卵囊數(shù)，即：OPG=（n1+n2）/2×200。

1.6 統(tǒng)計方法 用統(tǒng)計軟件SPSS 17.0的ANOVA模塊對不同藥物組的不同日齡獺兔體重、獺兔球蟲卵囊OPG值（原始數(shù)據(jù)對數(shù)化后）分別進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 獺兔斷乳時球蟲感染情況 共采集福建省福安市某獺兔場母兔健康狀況良好、出生時間相近的斷乳幼兔糞樣1 980份，通過高倍顯微鏡下觀察孢子化的卵囊，根據(jù)其具體特征結(jié)合相關(guān)參考文獻鑒定卵囊種類，共檢測出穿孔艾美耳球蟲（Eimeria perforans）、小型艾美耳球蟲（E.exigu）、納格浦爾艾美耳球蟲（E.nagpurens）、松林艾美耳球蟲（E.matsubayashi）、盲腸艾美耳球蟲（E.coecicola）、維氏艾美耳球蟲（E.vejdovsky）、中型艾美耳球蟲（E.media）；兔艾美耳球蟲（E.lepori）、大型艾美耳球蟲（E.magna）、斯氏艾美耳球蟲（E.stieda）、腸艾美耳球蟲（E.intestinal）、長型艾美耳球蟲（E.elongat）、無殘艾美耳球蟲（E.irresidu）、黃艾美耳球蟲（E.flavescens）、新兔艾美耳球蟲（E.neotepor）、梨形艾美耳球蟲（E.piriformi）等16種艾美耳球蟲，其孢子化卵囊的形態(tài)、大小、結(jié)構(gòu)與相關(guān)文獻描述一致；感染率達到100%，平均OPG值為4.98×104。

2.2 抗球蟲藥物對獺兔球蟲感染的影響

2.2.1 不同藥物作用下獺兔球蟲感染率 該獺兔場試驗幼兔在斷乳時的球蟲感染率為100%，用藥后第1周，2.5%妥曲珠利1次用藥組獺兔幼兔球蟲感染率降為86.77%，腸球雙效組與優(yōu)球樂組的感染率仍為100%，比對照組（97.56%）高。用藥后第2周，妥曲珠利2次用藥組球蟲卵囊陽性率降至77.42%，顯著低于其他各組（P＜0.05）；用藥第3周后各組獺兔球蟲卵囊的陽性率出現(xiàn)升高趨勢；用藥后第8周，妥曲珠利組和優(yōu)球樂2次用藥組球蟲卵囊陽性率低于其他組（見表1）。

2.2.2 妥曲珠利等抗球蟲藥物對獺兔幼兔球蟲感染強度的影響 獺兔各組試驗幼兔用藥前球蟲平均OPG值在46 833～57 933，差異不顯著（P＞0.05）。給藥后第1周，妥曲珠利組幼兔球蟲OPG值比用藥前減少了78.39%，下降幅度極顯著高于優(yōu)球樂組（P＜0.01）；其2次用藥組獺兔在給藥后第2周球蟲OPG值比用藥前減少了88.35%，下降幅度極顯著高于其他藥物組和對照組（P＜0.01），此后均保持較低感染水平。說明妥曲珠利2次用藥對獺兔幼兔球蟲感染有較為穩(wěn)定的抑制作用（見圖1）。用藥后第8周比用藥前減少了92.99%，下降幅度極顯著高于其他藥物組和對照組（P＜0.01）；自第8周起，各試驗組獺兔幼兔球蟲感染均轉(zhuǎn)歸為相對較低水平。

表1 不同藥物作用下獺兔球蟲感染率情況

2.3 妥曲珠利等抗球蟲藥物對獺兔幼兔生長的影響 測定獺兔幼兔口服不同抗球蟲藥物后的個體增重，結(jié)果顯示，幼兔用藥前各組間平均體重差異不顯著（P＞0.05），至用藥后第8周，2.5%妥曲珠利組獺兔平均增重顯著高于對照組（P＜0.05），料重比則顯著低于對照組和5%腸球雙效1次用藥組（P＜0.05），見表2。

3 討 論

大樣本調(diào)查結(jié)果顯示，該獺兔場兔球蟲多樣性豐富，有16種艾美爾球蟲，比此前調(diào)查增加5種[10]；感染比例最高的為穿孔艾美耳球蟲，與喬軍等[11]、宋鴻雁等[12]以及孟慶玲等[13]對兔球蟲的調(diào)查結(jié)果相同。

圖1 妥曲珠利等藥物對獺兔幼兔球蟲卵囊OPG值的影響

表2 試驗獺兔體平均增重情況

在獺兔不同生長階段，以40～65日齡幼兔球蟲感染率最高，接近100%；從感染率變化曲線看，哺乳仔兔球蟲感染率最低（19.23%），40日齡左右的斷乳仔兔球蟲感染率急劇升高到98.61%，此后仍可保持高感染率，150日齡左右成年兔和懷孕母兔的感染率下降至70%～80%。獺兔球蟲感染強度（OPG值)變化前期與感染率變化基本一致，亦為哺乳仔兔最低（OPG值：330），40～65日齡幼兔平均OPG值很快上升至5×104～6×104，80日齡后平均OPG值下降至1.5×104，150日齡后平均OPG值下降至1.64×103[9]。成年兔球蟲病多為亞臨床型或帶蟲者[14]，母兔的球蟲感染強度也不高，但可傳播球蟲卵囊使幼兔感染，導(dǎo)致兔球蟲病[15-16]，因此，獺兔幼兔球蟲病防控是獺兔場球蟲病防控的重點。

藥物防控仍是目前兔球蟲病防控的主要手段。聚醚類、喹啉類、嘧啶類、磺胺類、三嗪類、中草藥類等抗球蟲藥在兔球蟲病防控中均有應(yīng)用，尤其在幼兔階段抗球蟲藥物基本上是必用藥物。在獺兔抗球蟲藥物預(yù)防和臨床治療方面先后進行過一些試驗，曾有報道在獺兔日糧中添加莫能菌素、鹽霉素、氯苯胍以及地克珠利均能很好地預(yù)防球蟲病的發(fā)生，其中在降低死亡率方面，鹽霉素最低、效果最好[7]；在交替使用抗球蟲藥物方面，有研究者在氯苯胍、地克珠利、磺胺六甲氧嘧啶、三字球蟲粉等抗球蟲藥物中選擇2～3種交替使用，抗球蟲感染效果好于使用單種藥物[8]。在中草藥應(yīng)用方面，由白頭翁、常山、貫仲、大黃、苦參等10味中藥組成的復(fù)方抗球散試驗組球蟲卵囊減少率可達97.84%[9]；常山、蛇床子、大黃、苦楝皮、蒼術(shù)、使君子、苦參、玉片、地榆炭、白茅根、柴胡、黃連等中草藥煎劑與球蟲血痢散（主要成分為磺胺喹噁啉鈉）結(jié)合使用，防治獺兔球蟲病總有效率達97%[17]。

在該獺兔場使用過多種抗球蟲藥，檢測球蟲卵囊強度仍高居不下，幼兔常發(fā)球蟲病，說明該場兔球蟲對一些抗球蟲藥物產(chǎn)生耐藥性。妥曲珠利系新一代的抗球蟲藥，可阻斷球蟲整個生活周期，破壞球蟲細胞內(nèi)有性生殖和無性生殖，降低球蟲卵囊排出，阻止球蟲病流行[18]。妥曲珠利在體內(nèi)生物半衰期長，生物利用度高，不易產(chǎn)生耐藥性[19]。妥曲珠利口服溶液能夠有效用于雞、豬和兔球蟲病的治療，顯著降低球蟲病所導(dǎo)致的球蟲卵囊排出量[20-21]。妥曲珠利運用于兔球蟲病防治的研究較少，我們選擇該藥物觀察其對獺兔幼兔球蟲感染及生長性能的影響，以腸球雙效（有效成分為鹽酸氨丙啉和磺胺喹噁啉鈉）和優(yōu)球樂（有效成分是癸氧喹酯）作參照藥物進行比較。以獺兔的球蟲卵囊陽性幼兔試驗，用藥后第1周、第2周和第8周妥曲珠利組獺兔幼兔球蟲平均OPG值分別下降了78.39%、88.35%和92.99%，下降幅度顯著高于其他藥物組和對照組（P＜0.01），死亡率也比對照組顯著下降。對于生長性能提高，累積到用藥第8周時才體現(xiàn)出來，有報道在13～14日齡肉仔雞飲水中按7 mg/kg體重添加妥曲珠利溶液，能夠顯著提高飼料轉(zhuǎn)化率和體重[20]；在3～6日齡哺乳仔豬口服5%妥曲珠利1.0 mL后，等孢球蟲OPG值和球蟲病的發(fā)生率下降，斷乳仔豬的生長率有所提高[21-22]。本試驗獺兔幼兔用藥前期差異不顯著，表明妥曲珠利以30 mg/kg體重的劑量能有效防控兔球蟲的感染，且2次用藥效果更佳。表明妥曲珠利能有效控制獺兔幼兔球蟲感染，這與Peeters等[23]報道一致。

參照藥物腸球雙效（有效成分：鹽酸氨丙啉和磺胺喹噁啉鈉）和優(yōu)球樂（有效成分是癸氧喹酯）對該場球蟲抑制作用不明顯。鹽酸氨丙啉為廣譜抗球蟲藥，可競爭性抑制球蟲對硫胺（維生素B1）的攝取，從而妨礙蟲體細胞內(nèi)的糖代謝過程，抑制球蟲的發(fā)育；磺胺喹噁啉鈉為治療球蟲病的專用磺胺藥，對雞的各種球蟲均有作用，一般認為鹽酸氨丙啉與磺胺喹噁啉鈉合用可擴大抗球蟲范圍，增強療效；但兩種藥物的試驗效果不好，原因可能為，一是該場球蟲已經(jīng)產(chǎn)生了對鹽酸氨丙啉和磺胺喹噁啉鈉藥物的耐藥性，二是給藥方式不足以達到抗球蟲效果。

優(yōu)球樂藥物的有效成分為癸氧喹酯，主要用于雞球蟲病的預(yù)防。目前，少見抗兔球蟲作用機制方面的研究。有關(guān)資料介紹，癸氧喹酯對雞柔嫩艾美耳球蟲的子孢子有抑制作用，對第1代裂殖體有殺滅作用，對第2代及第3代裂殖體沒有影響[24]。索勛等[25]研究了癸氧喹酯抗柔嫩艾美耳球蟲豪頓株的效果，發(fā)現(xiàn)以20 mg/kg、30 mg/kg、40 mg/kg三種濃度拌料給藥，其抗球蟲指數(shù)均為180以上，且試驗動物盲腸中未發(fā)現(xiàn)卵囊，當時認為該藥為高效抗球蟲藥物。本次試驗按高劑量50 mg/kg溶解水中口服給藥，未見明顯的抗球蟲效果，原因可能也是球蟲耐藥性和給藥方式問題，具體原因尚需進一步研究。