地塞米松對仔豬十二指腸黏膜免疫的影響

謝文婷 福建省將樂縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所 福建將樂 365500

地塞米松是人工合成的糖皮質(zhì)激素類藥物，常用在豬病治療中，具有明顯的消炎、抗毒素、抗過敏、抗休克等作用；近年來的研究發(fā)現(xiàn)[1]，地塞米松可以誘導(dǎo)(未成熟)胸腺細(xì)胞發(fā)生凋亡；用小鼠作為試驗動物的研究發(fā)現(xiàn)，外源性的地塞米松不僅誘導(dǎo)胸腺細(xì)胞的凋亡，而且可以使脾臟細(xì)胞凋亡。謝玉生報道[2]，地塞米松可引起機(jī)體蛋白質(zhì)異生和蛋白質(zhì)合成的抑制，從而影響抗體生成，降低防御效果。何連琪也提到[2]：某些藥物，如糖皮質(zhì)激素類的潑尼松、氫化可的松和地塞米松，可以使胸腺皮質(zhì)部萎縮，胸腺細(xì)胞明顯消失，淋巴細(xì)胞被解體，產(chǎn)生免疫損傷作用。

查找相關(guān)資料，地塞米松對仔豬十二指腸黏膜免疫的影響未見詳細(xì)的報道，本試驗用不同劑量地塞米松注射仔豬，研究地塞米松對仔豬腸道黏膜免疫的影響，為生產(chǎn)中減少地塞米松對動物生產(chǎn)性能的影響提供理論依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 30頭30日齡仔豬購自福州周邊某規(guī)?；i場。

1.1.2 儀器 ZT-12N自動脫水機(jī)，YR-21自動染色機(jī)，YB-8LF包埋機(jī)，DM2500高級顯微鏡，RM2235切片機(jī)。

1.1.3 試劑 地塞米松，包裝規(guī)格為1 mL：5 mg，購于揭陽市龍陽動物藥業(yè)有限公司；蘇木精、伊紅、PAS試劑盒購于北京羅基生物技術(shù)有限公司；一抗羊抗SIgA多克隆抗體，二抗即用型快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司；3,3-二氨基聯(lián)苯二胺鹽酸鹽（DAB）顯色試劑盒和多聚賴氨酸購于北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 動物分組 試驗共6組，分對照組和試驗組，對照組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個小組，每組5頭；試驗組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個小組，每組5頭；試驗組三個小組分別連續(xù)7 d注射地塞米松1 mL（5 mg）、2 mL（10 mg）、3 mL（15 mg），對照組三個小組則注射與試驗組相同劑量的生理鹽水。

1.2.2 組織處理 綁定動物，快速剖開腹腔，取出小腸，于生理鹽水洗掉內(nèi)容物，多聚甲醛固定24 h，按常規(guī)方法固定、脫水、包埋，5μm切片，24 h烘干待用。

1.2.3 HE染色 切片經(jīng)自動染色機(jī)脫蠟，于蒸餾水水洗5 min，入蘇木精染色6 min，自來水洗凈，1%鹽酸酒精分色20 s，水中浸泡20 min返藍(lán)，入1%伊紅染1 min，自來水沖洗，脫水、透明、封片。染色后測量每組腸絨毛長度、隱窩深度，并對上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。

1.2.4 PAS染色 切片脫蠟至蒸餾水洗10 min；滴加1%阿爾辛藍(lán)醋酸水溶液染色15 min；蒸餾水洗3次；滴加1%過碘酸氧化5 min；滴加Schiff堿侵染15 min；傾去Schiff堿，流水沖洗10 min；滴加明礬蘇木素核染2 min；水洗3 min，烘干、透明、封片。后進(jìn)行酸性黏蛋白陽性細(xì)胞數(shù)量計數(shù)。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，差異顯著后進(jìn)行LSD多重比較，以P＜0.01（差異極顯著），P＜0.05（差異顯著）作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛的影響 由表1可知，注射1 mL、2 mL和3 mL地塞米松仔豬的腸絨毛明顯變短，腸絨毛高度與對照組相比較差異極顯著（P＜0.01），而且隨著劑量的加大絨毛長度逐漸遞減。說明地塞米松對仔豬的腸絨毛生長具有抑制作用，劑量越大抑制作用越明顯。

表1 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛長度的影響

2.2 不同劑量地塞米松對仔豬隱窩深度的影響由表2可知，1 mL劑量的試驗組與對照組相比，仔豬腸隱窩深度差異不顯著（P＞0.05），2 mL和3 mL劑量的試驗組與對照組差異極顯著（P＜0.01），試驗組隱窩深度明顯比對照組更深；各劑量試驗組間相比差異顯著（P＜0.05），隨著劑量的增加，隱窩深度依次變深。說明地塞米松使仔豬隱窩深度變深，劑量越大癥狀越明顯。

表2 不同劑量地塞米松對仔豬腸隱窩深度的影響

2.3 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛長度和隱窩深度比值影響 由表3可知，試驗組仔豬腸絨毛長度和隱窩深度比值與對照組相比差異極顯著（P＜0.01）；1 mL與2 mL劑量的試驗組相比差異顯著（P＜0.05），與3 mL劑量組相比則差異極顯著（P＜0.01）；2 mL與3 mL劑量組間差異顯著（P＜0.05）。說明地塞米松使腸黏膜吸收面積減少，動物營養(yǎng)物質(zhì)吸收能力減弱。

表3 仔豬腸絨毛長度和隱窩深度比值

2.4 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛黏液細(xì)胞的影響 AB/PAS染色結(jié)果表明，含有AB陽性的酸性黏多糖陽性細(xì)胞即Ⅱ型黏液細(xì)胞，染色結(jié)果細(xì)胞質(zhì)呈藍(lán)色。1 mL劑量的試驗組Ⅱ型黏液細(xì)胞數(shù)量與對照組差異不顯著（P＞0.05），黏液細(xì)胞的數(shù)量并沒有多大的變化；2 mL和3 mL劑量試驗組腸絨毛上皮Ⅱ型黏液細(xì)胞數(shù)量與對照組差異極顯著（P＜0.01），黏液細(xì)胞的數(shù)量隨著劑量的增加而逐漸減少，即酸性黏多糖分泌減少（見表4）。

表4 不同劑量地塞米松對Ⅱ型黏液細(xì)胞數(shù)量的影響

2.5 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞個數(shù)的影響 由表5可得，1 mL和2 mL劑量試驗組與對照組相比差異不顯著（P＞0.05），而3 mL劑量試驗組與對照組差異顯著（P＜0.05），說明試驗組上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量比對照組顯著減少。結(jié)果表明，仔豬在長時間大劑量地塞米松的作用下，使仔豬十二指腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞減少，降低了腸道黏膜免疫應(yīng)答能力。

表5 不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響

3 討 論

1）小腸是動物營養(yǎng)物質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的主要部位，而營養(yǎng)物質(zhì)在動物體內(nèi)的吸收受多種因素的影響，其中腸道黏膜形態(tài)是影響營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要因素之一。腸黏膜細(xì)胞中存在糖皮質(zhì)激素及其類似物的受體，糖皮質(zhì)激素可影響?zhàn)つぜ?xì)胞的發(fā)育，進(jìn)而影響動物營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，使得動物機(jī)體營養(yǎng)物質(zhì)匱乏、飼料中營養(yǎng)物質(zhì)大量浪費(fèi)，更甚者導(dǎo)致動物機(jī)體免疫機(jī)能紊亂。在規(guī)?；曫B(yǎng)環(huán)境下，應(yīng)激尤其是長期及急性應(yīng)激可嚴(yán)重影響畜禽產(chǎn)品品質(zhì)，影響畜禽養(yǎng)殖業(yè)的效益[3]。大量研究表明，面對應(yīng)激，動物主要通過下丘腦-垂體-腎上腺（hypothalamic-pituitaryadrenal axis，HPA axis），以級聯(lián)方式分泌相關(guān)激素，進(jìn)而調(diào)整機(jī)體代謝，使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的應(yīng)激反應(yīng)，其中糖皮質(zhì)激素是HPA軸分泌一系列激素中直接作用于靶細(xì)胞及靶組織的關(guān)鍵激素，并且對HPA軸有反饋抑制作用[4]。利用糖皮質(zhì)激素構(gòu)建的應(yīng)激模型，在家禽應(yīng)激研究中常見[5]，且研究表明，外源性糖皮質(zhì)激素及類似物可減少動物內(nèi)源皮質(zhì)激素的分泌[5]，李家駒等[6]研究發(fā)現(xiàn)皮下注射糖皮質(zhì)激素能顯著降低肉仔雞血漿內(nèi)源皮質(zhì)酮含量，注射后肉仔雞出現(xiàn)腹瀉及羽毛凌亂現(xiàn)象。

2）研究表明，腸絨毛高度和隱窩深度反映了腸道功能狀態(tài)，腸絨毛長度增加，吸收表面積增大，消化吸收功能增強(qiáng)，腹瀉率降低，生長發(fā)育加快[7]；隱窩深度反映了細(xì)胞的生成率，隱窩越深，細(xì)胞成熟率下降，分泌能力減弱[8]；Mitchell等[9]研究表明，腸道黏膜形態(tài)相關(guān)指標(biāo)中，腸絨毛高度、絨毛高度與隱窩深度的比值，與腸黏膜吸收面積與動物營養(yǎng)物質(zhì)吸收能力的增強(qiáng)呈正相關(guān)[10]；小腸是蛋白質(zhì)消化和吸收的主要場所，Ⅱ型黏液細(xì)胞的酸性分泌物有利于潤滑食物，易與蛋白酶形成復(fù)合物，起到穩(wěn)定酶的作用，所以要求有較高的酸性黏多糖[11-12]；腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞位于腸上皮細(xì)胞間和絨毛頂端，是一組CD8+抑制性T淋巴細(xì)胞，其免疫應(yīng)答以Th1和IgG為主，在防御腸道病原體入侵方面發(fā)揮重要作用[13-14]，IEL的主要功能是細(xì)胞殺傷和抑制黏膜部位的過敏反應(yīng)，在于免疫應(yīng)答抑制和損傷上皮細(xì)胞的消除，是黏膜免疫系統(tǒng)的一個免疫效應(yīng)部位，參與黏膜免疫應(yīng)答[15]，因此，IEL的數(shù)量可以反映小腸局部黏膜免疫屏障的完整及免疫防御功能的完善程度。

3）本次試驗結(jié)果也表明，長時間大劑量注射地塞米松，仔豬腸道絨毛變短，吸收面積減少；隱窩變深，腸黏膜細(xì)胞分泌下降，消化吸收能力減弱；隨著劑量加大，分泌的酸性黏多糖越少；上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞減少，腸道免疫應(yīng)答能力降低。皮質(zhì)激素能促進(jìn)胃酸分泌和胃蛋白酶的生成，抑制黏液分泌，阻礙組織修復(fù)，因而可誘發(fā)或加劇胃和十二指腸潰瘍的發(fā)生，引起出血甚至穿孔。王芳等[16]報道臨床上短期常規(guī)應(yīng)用Dex引起的不良反應(yīng)主要以消化系統(tǒng)為主，表現(xiàn)為嘔吐、膈肌痙攣、下腹部絞痛等，而且大部分病例在給藥后數(shù)分鐘至24 h出現(xiàn)上述反應(yīng)；可見本次試驗結(jié)果與臨床上報道的地塞米松可引起消化系統(tǒng)的不良反應(yīng)具有相似性。Taylar和Harrison也曾報道[17]，嚴(yán)重性哮喘患者使用氫化可的松磷酸鈉時可發(fā)生同樣的副作用。因此，在臨床上和科研中應(yīng)用地塞米松時應(yīng)嚴(yán)格掌握適應(yīng)癥和給藥劑量，合理使用，盡可能避免地塞米松不良反應(yīng)的發(fā)生，確保用藥安全有效，減少生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)上的損失。

4 結(jié) 論

本試驗研究不同劑量地塞米松對仔豬腸絨毛長度、隱窩深度、酸性黏多糖數(shù)量及上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響，結(jié)果表明地塞米松可使仔豬腸道的消化吸收能力減弱，腸道免疫應(yīng)答能力降低。