我國(guó)豬用病毒類(lèi)生物制品質(zhì)量情況分析及建議

吳華偉，陳曉春，秦義嫻，高金源，李俊平，鄧永，曹明慧，高月異

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

我國(guó)作為世界上最大的生豬生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)，生豬產(chǎn)業(yè)體量巨大。據(jù)統(tǒng)計(jì)[1-2]，我國(guó)生豬養(yǎng)殖量約占世界生豬總養(yǎng)殖量的60%，豬肉消費(fèi)量約占世界豬肉消費(fèi)量的50%，豬肉在中國(guó)國(guó)內(nèi)肉類(lèi)產(chǎn)量和消費(fèi)量占比均超過(guò)60%，生豬飼養(yǎng)產(chǎn)值接近1.3萬(wàn)億。隨著我國(guó)生豬養(yǎng)殖規(guī)模的日益擴(kuò)大，豬病發(fā)生率也逐漸上升，呈現(xiàn)老病滅不盡，新病又發(fā)生的現(xiàn)狀，嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展。疫苗接種是預(yù)防和控制動(dòng)物病毒性疾病最經(jīng)濟(jì)和最有效的手段，其質(zhì)量的好壞事關(guān)重大動(dòng)物疫病防控成效和養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展，事關(guān)動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全。本文對(duì)我國(guó)豬用病毒類(lèi)生物制品現(xiàn)狀及2008-2017年豬用病毒類(lèi)生物制品的質(zhì)量情況進(jìn)行總結(jié)，分析存在的問(wèn)題，提出做好豬用病毒類(lèi)制品質(zhì)量控制的建議。

1 我國(guó)豬用病毒類(lèi)生物制品基本現(xiàn)狀

1.1 主要種類(lèi) 目前，我國(guó)豬用病毒類(lèi)生物制品主要有4類(lèi)：(1)疫苗類(lèi)：包括活疫苗(傳統(tǒng)弱毒活疫苗和基因缺失活疫苗)、滅活疫苗(如全病毒滅活疫苗、亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因缺失滅活疫苗等)以及細(xì)菌和病毒的聯(lián)苗。(2) 抗體類(lèi)：包括卵黃抗體、高免血清、單克隆抗體類(lèi)。(3) 診斷制品類(lèi)：抗體檢測(cè)試劑或試劑盒(如ELISA試劑盒、瓊脂擴(kuò)散抗原、HI抗原、乳膠凝集抗原等)以及抗原或核酸檢測(cè)試劑或試劑盒(如ELISA試劑盒、膠體金試紙條、PCR或RT-PCR試劑盒等)。(4)其他類(lèi)：促性腺激素釋放因子類(lèi)似物、干擾素、豬脾轉(zhuǎn)移因子等。

1.2 生產(chǎn)和銷(xiāo)售情況 據(jù)中國(guó)獸藥協(xié)會(huì)統(tǒng)計(jì)[3]，截至2017年年底，豬用生物制品共有有效文號(hào)515個(gè)，實(shí)際使用的391個(gè)，批準(zhǔn)文號(hào)使用率為75.92%，其中豬用生物制品產(chǎn)品文號(hào)數(shù)量較多的產(chǎn)品為豬瘟活疫苗、偽狂犬活疫苗、仔豬副傷寒活疫苗、豬敗血性鏈球菌病活疫苗、仔豬大腸埃希氏菌病三價(jià)滅活疫苗和豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗。從銷(xiāo)售額看，豬用生物制品銷(xiāo)量為70.46億頭份/億毫升，總銷(xiāo)售為52.64億元，約占獸用生物制品總銷(xiāo)售額的39.39%；其中豬用強(qiáng)制性免疫疫苗銷(xiāo)售額為12.89億元，占所有強(qiáng)制性免疫疫苗銷(xiāo)售額的21.96%以及豬用生物制品總銷(xiāo)售額的24.49%，其中豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗、偽狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)、豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗銷(xiāo)售額均超億元，總銷(xiāo)售額約12.21億元。

1.3 臨床試驗(yàn)和新獸藥審批情況 從臨床試驗(yàn)和新獸藥審批的情況看，近年來(lái)豬用生物制品研究已成為熱點(diǎn)。從臨床試驗(yàn)批準(zhǔn)的數(shù)據(jù)看(圖1)，2013年至2017年8月31日，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部共批準(zhǔn)臨床試驗(yàn)376個(gè)，其中豬用生物制品164個(gè)，約占已批準(zhǔn)臨床試驗(yàn)的43%；批準(zhǔn)的豬用生物制品臨床試驗(yàn)中，豬用病毒類(lèi)生物制品115個(gè)，約占豬用生物制品批準(zhǔn)量的70%。從新獸藥審批的情況看(圖2)，2013-2017年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部共新批準(zhǔn)各類(lèi)獸用生物制品285個(gè)，其中豬用生物制品為52個(gè)，約占總批準(zhǔn)品種的18%；批準(zhǔn)的豬用生物制品中，豬用病毒類(lèi)生物制品33個(gè)，約占豬用生物制品批準(zhǔn)量的64%。

數(shù)據(jù)來(lái)源于中國(guó)獸藥信息網(wǎng)上國(guó)家獸藥基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)，2018年數(shù)據(jù)截至8月31日?qǐng)D1 2013-2018年獸用生物制品臨床試驗(yàn)批準(zhǔn)件數(shù)Fig 1 The number of approved clinical trials of veterinary biologics from 2013 to 2018

數(shù)據(jù)來(lái)源于中國(guó)獸藥協(xié)會(huì)網(wǎng)站公布的行業(yè)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)圖2 2013-2017年新批準(zhǔn)各類(lèi)獸用生物制品數(shù)量統(tǒng)計(jì)Fig 2 The number of approved new veterinary biologics from 2013 to 2017

2 2008-2017年我國(guó)豬用病毒類(lèi)生物制品質(zhì)量情況分析

為了解我國(guó)豬用病毒類(lèi)制品的質(zhì)量情況，對(duì)2008-2017年中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“中監(jiān)所”)承擔(dān)的所有類(lèi)別(包括注冊(cè)檢驗(yàn)、復(fù)核檢驗(yàn)和監(jiān)督檢驗(yàn))的豬用病毒類(lèi)生物制品檢驗(yàn)情況進(jìn)行了匯總，并對(duì)檢測(cè)出的不合格批次及檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。

2.1 不合格批次及主要不合格項(xiàng)目情況 由圖3、圖4和圖5可知，2008-2017年，豬用病毒類(lèi)制品共檢出不合格產(chǎn)品96批，年均不合格批數(shù)約為10批，不合格項(xiàng)目涉及外源病毒檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、效力(效價(jià))檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)、敏感性檢驗(yàn)、特異性檢驗(yàn)、總蛋白含量測(cè)定、無(wú)菌檢驗(yàn)、甲醛含量測(cè)定和剩余水分測(cè)定等10個(gè)參數(shù)，其中主要不合格項(xiàng)目集中在純凈性檢驗(yàn)(外源病毒檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)和無(wú)菌檢驗(yàn))、效力(效價(jià))檢驗(yàn)和安全檢驗(yàn)三個(gè)方面，尤其以純凈性檢驗(yàn)中的外源病毒檢驗(yàn)和支原體檢驗(yàn)項(xiàng)目為主要不合格項(xiàng)目。

圖3 2008-2017年豬用病毒類(lèi)生物制品不合格批次逐年分布Fig 3 The annual distribution of unqualified swine virus biologics from 2008 to 2017

圖4 2008-2017年各類(lèi)豬用病毒類(lèi)生物制品不合格批次匯總情況Fig 4 The batches of different test parameters for unqualified swine virus biologics from 2008 to 2017

圖5 2008-2017年各類(lèi)豬用病毒類(lèi)生物制品不合格項(xiàng)目占比情況統(tǒng)計(jì)Fig 5 The percentage of different test parameters for unqualified swine virus biologics from 2008 to 2017

從不合格批次排名前4位的檢驗(yàn)項(xiàng)目看，外源病毒檢驗(yàn)31批、支原體檢驗(yàn)19批、效力檢驗(yàn)17批，安全檢驗(yàn)7批，分別占所有不合格項(xiàng)目的比例為32.3%、19.8%、17.7%和7.3%，4項(xiàng)合計(jì)占所有不合格項(xiàng)目的比例為77%。從該4項(xiàng)主要不合格項(xiàng)目逐年分布情況看(圖6)，外源病毒檢驗(yàn)不合格是目前各類(lèi)檢驗(yàn)最突出問(wèn)題，其次為效力檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)和安全檢驗(yàn)。敏感性檢驗(yàn)和特異性檢驗(yàn)作為診斷試劑制品的主要質(zhì)量控制參數(shù)，2008-2017年共檢出不合格產(chǎn)品9批，約占所有不合格項(xiàng)目的9.4%；而總蛋白含量測(cè)定、無(wú)菌檢驗(yàn)、甲醛含量測(cè)定和剩余水分測(cè)定等4個(gè)項(xiàng)目不合格批次基本一致，合計(jì)占所有不合格項(xiàng)目的比例為13.5%。

圖6 2008～2017年豬用病毒類(lèi)生物制品主要不合格項(xiàng)目逐年分布情況Fig 6 The annual distribution of major unqualified parameters for unqualified swine virus biologics from 2008 to 2017

2.2 不合格風(fēng)險(xiǎn)較高產(chǎn)品 從不合格批次排名前4位的項(xiàng)目對(duì)應(yīng)的具體產(chǎn)品情況看(表1)，各種病毒類(lèi)活疫苗的外源病毒檢驗(yàn)和支原體檢驗(yàn)不合格的風(fēng)險(xiǎn)均較高，效力檢驗(yàn)不合格產(chǎn)品主要集中在批簽發(fā)數(shù)量較多且市場(chǎng)需要較大的豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗、豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗以及豬流性行腹瀉類(lèi)疫苗，而安全檢驗(yàn)不合格產(chǎn)品主要為偽狂犬病活疫苗豬和豬細(xì)小病毒病滅活疫苗。

表1 豬用病毒類(lèi)生物制品主要不合格項(xiàng)目風(fēng)險(xiǎn)較高產(chǎn)品Tab 1 The major risk products of unqualified parameters for swine virus biologics

2.3 不合格批次在各類(lèi)檢驗(yàn)中逐年分布情況 由圖7可以看出，2008-2009年不合格批次主要集中在監(jiān)督檢驗(yàn)方面，2010年開(kāi)始注冊(cè)檢驗(yàn)不合格批次一直持續(xù)存在且處于較高水平(2012年、2015年和2017年均為當(dāng)年不合格主要因素)，但從2014年開(kāi)始文號(hào)復(fù)核試驗(yàn)不合格批次持續(xù)存在并與注冊(cè)檢驗(yàn)一并成為不合格批次的主要來(lái)源，而監(jiān)督檢驗(yàn)不合格批次逐年減少，呈現(xiàn)較穩(wěn)定狀態(tài)。由此可見(jiàn)，目前新制品注冊(cè)檢驗(yàn)和文號(hào)復(fù)核檢驗(yàn)是豬用病毒類(lèi)生物制品不合格批次的主要來(lái)源，提示必須加強(qiáng)新制品及文號(hào)復(fù)核樣品的質(zhì)量控制。

2.4 各類(lèi)檢驗(yàn)的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn) 從豬用病毒類(lèi)生物制品不合格項(xiàng)目在各類(lèi)檢驗(yàn)中的分布情況看(圖8)，外源病毒檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)是各類(lèi)檢驗(yàn)都應(yīng)密切關(guān)注的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，支原體檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)、無(wú)菌檢驗(yàn)、剩余水分檢驗(yàn)和總蛋白測(cè)定(主要為口蹄疫滅活疫苗)是監(jiān)督檢驗(yàn)需重點(diǎn)關(guān)注的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，安全檢驗(yàn)、甲醛含量測(cè)定以及診斷試劑類(lèi)的敏感性檢驗(yàn)和特異性檢驗(yàn)是注冊(cè)檢驗(yàn)的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。需指出的是，外源病毒檢驗(yàn)是豬用病毒類(lèi)制品各類(lèi)檢驗(yàn)不合格的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，也是近幾年各類(lèi)檢驗(yàn)中暴露問(wèn)題最集中的檢驗(yàn)項(xiàng)，必要引起高度重視。

圖7 2008-2017年豬用病毒類(lèi)生物制品不合格批次在各類(lèi)檢驗(yàn)中的逐年分布情況Fig 7 The annual distribution of unqualified items for swine virus biologics in various tests from 2008 to 2017

圖8 2008-2017年豬用病毒類(lèi)生物制品不合格項(xiàng)目在各類(lèi)檢驗(yàn)中的分布Fig 8 The batches distribution of unqualified parameters for swine virus biologics in various tests from 2008 to 2017

3 關(guān)于做好豬用病毒類(lèi)制品質(zhì)量控制的建議

3.1 以動(dòng)物源性原輔材料質(zhì)量控制為重點(diǎn)，加強(qiáng)外源病毒檢驗(yàn) 血清、胰酶、細(xì)胞、含有動(dòng)物源性成分的培養(yǎng)基等原輔材料是獸用生物制品生產(chǎn)和檢驗(yàn)中必不可少的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是造成制品外源病原污染的重要來(lái)源。如牛血清中經(jīng)常會(huì)污染BVDV、呼腸孤病毒，豬源胰酶中污染PCV1、PPV、TGEV等[4]。從近10年豬用病毒類(lèi)生物制品檢驗(yàn)結(jié)果看，外源病毒檢驗(yàn)不合格是各類(lèi)檢驗(yàn)中存在的最突出問(wèn)題，也是近年來(lái)檢驗(yàn)不合格項(xiàng)目的主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)。目前，我國(guó)獸用生物制品中常規(guī)外源污染(如BVDV、PPV、RHDV等)已得到充分重視，但對(duì)于原輔材料(如牛血清、胰酶、細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞用培養(yǎng)基等)的控制尚未引起足夠關(guān)注，存在較為嚴(yán)重的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)隱患。如2015版《中國(guó)獸藥典》僅制定了牛血清、生產(chǎn)用細(xì)胞(細(xì)胞系)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，但缺乏使用量較大的胰酶、動(dòng)物細(xì)胞用培養(yǎng)基以及檢驗(yàn)用細(xì)胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，造成相關(guān)原輔材料控制無(wú)標(biāo)準(zhǔn)可依，或者企業(yè)制定的原輔材料內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)缺乏針對(duì)性，無(wú)法起到質(zhì)控目的。需要注意的是，檢驗(yàn)用細(xì)胞作為外源病毒檢驗(yàn)的最重要基質(zhì)，其質(zhì)量情況對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果也有直接影響。研究表明[5]，不同來(lái)源的相同細(xì)胞敏感性差異較大，如適應(yīng)PCV2培養(yǎng)的PK15必須經(jīng)特殊克隆篩選才能適應(yīng)病毒增殖。因此，采用不同來(lái)源的細(xì)胞進(jìn)行外源病毒檢驗(yàn)，也可能造成檢驗(yàn)結(jié)果的差異。但《中國(guó)獸藥典》(2015年版)對(duì)檢驗(yàn)用細(xì)胞尚無(wú)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，各企業(yè)在進(jìn)行外源病毒檢驗(yàn)時(shí)采用的細(xì)胞差異也較大，細(xì)胞的來(lái)源也不盡相同，甚至背景不清楚，且多數(shù)企業(yè)未對(duì)檢驗(yàn)用細(xì)胞按規(guī)定進(jìn)行系統(tǒng)鑒定、代次控制并建立種子批。因此，建議應(yīng)盡快制定完善胰酶、動(dòng)物用細(xì)胞培養(yǎng)基以及檢驗(yàn)用細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并由中監(jiān)所統(tǒng)一制備并供應(yīng)外源病毒檢驗(yàn)的細(xì)胞(如MDBK、ST、Vero細(xì)胞等)，并限定其代次使用范圍，以實(shí)現(xiàn)全行業(yè)檢驗(yàn)結(jié)果的一致性，為提升獸用生物制品質(zhì)量提供可靠保障。

3.2 以獸用生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究為重點(diǎn)，夯實(shí)獸用生物制品檢驗(yàn)物質(zhì)基礎(chǔ) 獸用生物制品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主要用于獸用生物制品效價(jià)、活性和含量等質(zhì)量檢驗(yàn)或?qū)ζ涮匦澡b別、檢查或技術(shù)驗(yàn)證。豬用病毒類(lèi)生物制品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)主要有生產(chǎn)和檢驗(yàn)用標(biāo)準(zhǔn)毒株(如生產(chǎn)用豬瘟兔化弱毒株以及檢驗(yàn)用石門(mén)系豬瘟強(qiáng)毒株)、抗血清或單克隆抗體、參考疫苗(如PCV2參考疫苗)、抗原(如PPV HI抗原)以及診斷試劑(如PPV熒光抗體)等，其中特異性抗血清效價(jià)不高、特異性差是影響豬用病毒類(lèi)活疫苗外源病毒檢驗(yàn)和病毒含量測(cè)定(特別是對(duì)于多聯(lián)或多價(jià)活疫苗)結(jié)果以及造成檢驗(yàn)結(jié)果不合格的主要因素。與先進(jìn)國(guó)家相比，目前我國(guó)提供的非禽源標(biāo)準(zhǔn)抗血清和診斷用試劑種類(lèi)還比較少，質(zhì)量參差不齊，且獸用生物制品行業(yè)使用的抗血清大都是多克隆抗體，單克隆抗體較少。這些日益成為制約我國(guó)獸用生物制品行業(yè)持續(xù)、健康發(fā)展的瓶頸，亟待進(jìn)一步加大我國(guó)獸用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制和引進(jìn)力度，盡快解決困擾獸用生物制品行業(yè)的基礎(chǔ)性物質(zhì)短缺問(wèn)題。建議應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)新批準(zhǔn)獸用生物制品相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的審查力度，特別是加強(qiáng)對(duì)研制單位研制數(shù)據(jù)的核查機(jī)制，新制品審批時(shí)堅(jiān)持制品申報(bào)資料與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制資料并重，復(fù)核檢驗(yàn)時(shí)堅(jiān)持對(duì)制品及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)同時(shí)進(jìn)行檢驗(yàn)，強(qiáng)化制品研制單位將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)足量指定保存與農(nóng)業(yè)農(nóng)村部新獸藥證書(shū)核發(fā)的關(guān)聯(lián)機(jī)制，并建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)強(qiáng)制換批要求及換批不及時(shí)的懲處機(jī)制，以確保新制品上市后檢驗(yàn)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的足量、有效供應(yīng)。同時(shí)，建議國(guó)家獸藥監(jiān)管部門(mén)牽頭，整合國(guó)內(nèi)研究和生產(chǎn)單位現(xiàn)有資源，以建立我國(guó)獸用生物制品檢測(cè)用單克隆抗體試劑庫(kù)為切入點(diǎn)，指定生產(chǎn)單位定點(diǎn)生產(chǎn)，由中監(jiān)所統(tǒng)一鑒定并對(duì)外供應(yīng)，實(shí)現(xiàn)資源和利益共享，并逐步建立和完善其他檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的生產(chǎn)-供應(yīng)新模式[6]，不斷夯實(shí)獸用生物制品物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.3 以檢驗(yàn)關(guān)鍵參數(shù)新技術(shù)和新方法研究為重點(diǎn)，提升獸用生物制品質(zhì)量檢測(cè)水平 近年來(lái)，各種檢驗(yàn)新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)，獸用生物制品檢驗(yàn)也理應(yīng)與時(shí)俱進(jìn)，兼收并蓄。從2008-2017年豬用病毒類(lèi)生物制品檢驗(yàn)不合格項(xiàng)目看，外源病毒檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)和效力檢驗(yàn)是目前豬用病毒類(lèi)生物制品的主要質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，可以嘗試研究或引進(jìn)新的檢驗(yàn)技術(shù)或方法。

一是在外源病毒檢驗(yàn)方面，可借鑒OIE國(guó)際貿(mào)易指定試驗(yàn)或各國(guó)的農(nóng)業(yè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)推薦的PCR方法作為現(xiàn)有檢驗(yàn)方法的必要補(bǔ)充，特別是在取代傳統(tǒng)方法難以檢測(cè)或針對(duì)新出現(xiàn)的病原的檢測(cè)(如非洲豬瘟病毒)。目前，我國(guó)部分獸用生物制品已經(jīng)開(kāi)始使用分子生物學(xué)方法(PCR或RT-PCR)作為非禽源外源病毒檢測(cè)的補(bǔ)充方法，如華中農(nóng)業(yè)大學(xué)和中牧實(shí)業(yè)股份有限公司的豬偽狂犬病活疫苗(HB-98株)采用PCR方法檢測(cè)鄂A野毒株污染，青島易邦生物工程有限公司的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液采用RT-PCR檢測(cè)口蹄疫病毒污染。

二是在支原體檢驗(yàn)方面，目前獸用疫苗使用的細(xì)胞(細(xì)胞系)、生產(chǎn)種毒以及制品支原體污染現(xiàn)象較為嚴(yán)重，而《中國(guó)獸藥典》(2015版)對(duì)于支原體的檢驗(yàn)規(guī)定的方法僅有培養(yǎng)法一種方法[7]，該種方法檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)，易受抗生素影響，且不能檢出所有的支原體污染，亟需增加新的方法進(jìn)行補(bǔ)充和完善。實(shí)驗(yàn)室常用的支原體檢驗(yàn)方法除培養(yǎng)法外，還有DNA熒光染色法、PCR方法、ElISA(抗原)檢測(cè)法、血清學(xué)方法、形態(tài)學(xué)檢查(電鏡檢查)等[8]，其中培養(yǎng)法和DNA熒光染色法也是美國(guó)9CFR、歐洲藥典和我國(guó)藥典普遍采用的方法。DNA熒光染色法具有可以檢測(cè)所有支原體污染且不受抗生素影響的優(yōu)點(diǎn)，PCR方法以其高敏感性、快速等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)室支原體檢驗(yàn)的日常控制。三種支原體檢驗(yàn)方法的比較見(jiàn)表2。建議參考美國(guó)9CFR、歐洲藥典和我國(guó)人藥典的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，在目前《中國(guó)獸藥典》(2015版)培養(yǎng)法的基礎(chǔ)上，增加DNA熒光染色法作為法定方法之一，同時(shí)鼓勵(lì)企業(yè)在按照《中國(guó)獸藥典》規(guī)定的培養(yǎng)法方法進(jìn)行支原體檢驗(yàn)外，可在內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)中增加一些快速、通用的檢測(cè)方法，如DNA熒光染色法或PCR方法，將支原體控制的關(guān)口前移，防患于未然。

表2 三種支原體檢測(cè)方法的比較[11]

3.4 以制定通用的標(biāo)準(zhǔn)操作程序?yàn)橹攸c(diǎn)，規(guī)范全行業(yè)獸用生物制品檢測(cè) 與國(guó)外獸用生物制品發(fā)達(dá)國(guó)家相比，目前我國(guó)的獸用生物制品檢驗(yàn)尚缺乏全行業(yè)通用的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，在具體檢驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)于一些共性的檢測(cè)項(xiàng)目(如無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)、外源病毒檢驗(yàn)等)采用的細(xì)胞來(lái)源和代次、設(shè)備的型號(hào)和參數(shù)以及操作程序也各不相同，甚至是同一個(gè)產(chǎn)品的相同檢驗(yàn)參數(shù)在不同的企業(yè)進(jìn)行具體檢驗(yàn)時(shí)檢測(cè)程序也不盡相同，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制及檢驗(yàn)結(jié)果的橫向比較。特別是在目前新建獸用疫苗企業(yè)已超過(guò)100家且有可能繼續(xù)增加的新形勢(shì)下，如何盡快提升行業(yè)從業(yè)人員的檢驗(yàn)技術(shù)和能力，如何維持好來(lái)之不易的獸用生物制品較為穩(wěn)定的質(zhì)量形勢(shì)，是獸藥監(jiān)察系統(tǒng)必須面對(duì)和亟待破解的難題。近年來(lái)豬用病毒類(lèi)生物制品檢驗(yàn)結(jié)果也印證了此點(diǎn)，不合格產(chǎn)品和批次較多的企業(yè)絕大多數(shù)為新建企業(yè)，其不合格項(xiàng)目涵蓋了獸用生物制品檢驗(yàn)的各個(gè)參數(shù)，甚至是無(wú)菌檢驗(yàn)、支原體檢驗(yàn)等常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。為此，可參照美國(guó)獸醫(yī)服務(wù)局規(guī)章第800.93號(hào)的做法，在中監(jiān)所目前制定的《獸用生物制品檢驗(yàn)操作規(guī)程》基礎(chǔ)上，盡快編制我國(guó)獸用生物制品質(zhì)量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，發(fā)布后印發(fā)全行業(yè)執(zhí)行，做到全行業(yè)一套標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)程序，促進(jìn)獸用生物制品檢驗(yàn)工作的標(biāo)準(zhǔn)化、程序化、規(guī)范化。同時(shí)，可定期組織行業(yè)能力比對(duì)，及時(shí)向社會(huì)通報(bào)比對(duì)結(jié)果，并考慮將能力比對(duì)結(jié)果與行業(yè)日常監(jiān)管結(jié)合起來(lái)，促進(jìn)生產(chǎn)企業(yè)自覺(jué)提高檢驗(yàn)?zāi)芰退健?/p>