液質(zhì)聯(lián)用儀測定辣椒中氟蟲腈及其代謝物的殘留

隨著人們物質(zhì)生活和文化生活水平的提高，辣椒作為一種低脂肪的健康辛香食品備受人們喜愛，從而有力地促進(jìn)了辣椒的快速發(fā)展和辣椒需求量的不斷增加。由于農(nóng)戶在種植過程中忽視對農(nóng)藥的正確、合理使用，農(nóng)藥超標(biāo)現(xiàn)象逐年增加。為保障人們的身體健康，有效控制農(nóng)藥在辣椒生產(chǎn)中的使用和對其殘留量進(jìn)行監(jiān)控，大力開展農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)特別是相關(guān)的前處理技術(shù)的研究是非常必要的。本文主要介紹了檢測氟蟲腈及其代謝物在辣椒中的殘留分析方法。氟蟲腈英文通用名稱為Fipronil，商品名稱銳勁特，化學(xué)名稱5-氨基-1-（2.6-二氯-4-三氟甲基苯基）-4-三氟甲基亞磺?；吝?3-腈，是法國羅納普朗克農(nóng)化公司于1987 年開發(fā)研制的苯基吡唑類新型高活性殺蟲劑，用于防治水稻、蔬菜、棉花等多種作物害蟲，因防蟲效果好、用量低、生效時間長等優(yōu)點是代替高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的首選藥劑。隨著氟蟲腈的廣泛應(yīng)用，在正常施用下，氟蟲腈代謝物主要有氟甲腈（MB46513）、氟蟲腈砜（MB46136）、氟蟲腈硫醚（MB45950），殘留物之和以氟蟲腈表示，辣椒中氟蟲腈最大殘留限量為0.02 mg/kg，它們都具有一定的毒性，有的毒性甚至高于母體。

一、試驗部分

（一）主要儀器、試劑與材料

1.主要儀器。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有電噴霧離子源（美國AB公司 QTRAP5500）；高速勻漿機(jī)（德國IKA）；Milli-Q超純水儀（美國Millipore公司）；快速混合器（SK-1，金壇市華峰儀器有限公司）；分析天平，感量0.01 mg（梅特勒-托利多PL602-S）；離心機(jī)，最大轉(zhuǎn)速8000 r/min（上海飛鴿TGL-15B）。

2.試劑。氟蟲腈標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%），氟甲腈標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%），氟蟲腈硫醚標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%），氟蟲腈砜標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞99%），由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所提供。用甲醇稀釋1000 mg/L氟蟲腈及其代謝標(biāo)準(zhǔn)溶液，配置成100 mg/L單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置于-20 ℃保存，使用時用甲醇水（1+1）溶液稀釋配置標(biāo)準(zhǔn)工作液，有效期3個月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液避光在0～4 ℃下保存，有效期1個月?；|(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

3.材料。甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；氯化鈉：分析純；復(fù)合凈化柱：填料為50 mg PSA、50 mg C18、50 mg MgSo4。

（二）樣品前處理

稱取25.0 g試樣（精確至0.01 g）于廣口瓶中，加入50.0 mL乙腈，用高速組織搗碎機(jī)在15 000 r/min下勻漿提取高速勻漿1 min，放入盛有5～7 g氯化鈉的具塞量筒中，收集濾液40～50 mL，蓋上塞子劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置20 min，使乙腈相和水相分層。從上述具塞量筒中吸取2.0 mL上層液于復(fù)合柱凈化管中，混勻器混勻；于8000 r/min下離心5 min，從凈化管中準(zhǔn)確吸取1 mL上清液于5 mL離心管中，離心管中再加入1 mL的超純水，在混勻器上混勻；經(jīng)0.2μ m的有機(jī)濾膜過濾并轉(zhuǎn)移到2 mL的進(jìn)樣瓶中，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

（三）儀器條件

色譜柱：XR-ODS 2.0 mmi.d×75 mm；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：1uL；離子源：ESI；掃描方式：負(fù)離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測；電噴霧電壓：5500V；離子源溫度：550 ℃；霧化氣壓力：0.38 mpa；流動相及梯度洗脫條件見表1；氟蟲腈及其代謝物離子選擇參數(shù)見表2。

二、測定與分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線

取10.0 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液，用辣椒的空白基質(zhì)液逐級稀釋，配置成濃度分別為0.005 ug/mL、0.01 ug/mL、0.025 ug/mL、0.035 ug/mL、0.045 ug/mL系列溶液，經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用儀分析測定，檢測各個濃度的峰面積。橫坐標(biāo)為質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)為峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出氟蟲腈及其代謝物的相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表3。由此可見，氟蟲腈及其代謝物的峰面積響應(yīng)值與其質(zhì)量濃度0.005～0.045 ug/mL線性回歸方程r≥ 0.998 53。

表1 流動相及梯度洗脫條件

表2 氟蟲腈及其代謝物質(zhì)譜參數(shù)

（二）方法的靈敏度

在上述儀器條件下以3倍的信噪比S/N計算方法檢出限，結(jié)果見表3。

（三）方法的準(zhǔn)確度與精密度

用空白辣椒樣品進(jìn)行添加回收試驗，添加濃度為0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.05 mg/kg，每個添加濃度重復(fù)5遍，分別按照上述前處理操作以及儀器分析方法計算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（R SD），結(jié)果辣椒中氟蟲腈及其代謝物的添 加 回 收 率 0.01～0.05 mg/kg為85.2%～93.3%，變異系數(shù)為 4.54%～8.16%。

三、結(jié)論

由于近年來液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)得到了快速發(fā)展而且可以提高方法的選擇性和靈敏度，簡化前處理的操作步驟。本試驗采用相對簡單的前處理方法，以乙腈作為提取劑，復(fù)合凈化柱凈化，經(jīng)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法分析。該方法簡單、快速、靈敏度高，可作為辣椒中氟蟲腈及其代謝物殘留的定性定量檢測。

表3 氟蟲腈及其代謝物的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限