高泌乳素血癥中巨泌乳素篩查方法的研究

楊青青，張曉梅，李 輝，張士榮，周 靜，嚴(yán) 鳴

正常人血清中泌乳素(prolactin，PRL)有3種形式：相對(duì)分子質(zhì)量為23 000單體泌乳素(monomeric prolactin，mono-PRL)、相對(duì)分子質(zhì)量為40 000～60 000大泌乳素(big prolactin，big-PRL)以及相對(duì)分子質(zhì)量為100 000巨泌乳素 (macro prolactin，M-PRL)[1]。真性高泌乳素血癥是指血液中高水平的mono-PRL和big-PRL引起的內(nèi)分泌紊亂性疾病[2]。真性巨泌乳素血癥(MP)病人血液中PRL以M-PRL為主，mono-PRL和big-PRL水平正常且無明顯的臨床癥狀[3]。M-PRL是PRL與其IgG 型抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，因其相對(duì)分子質(zhì)量大不能通過毛細(xì)血管壁，無法與靶細(xì)胞PRL受體結(jié)合，因而不能發(fā)揮出生物學(xué)效應(yīng)[4-5]，再加上其在體內(nèi)的半衰期較長，易于在體循環(huán)中累積，可造成PRL濃度假性增高[6]，進(jìn)而導(dǎo)致不必要的檢查及藥物治療，因此篩查并排除M-PRL的影響十分重要。目前實(shí)驗(yàn)室診斷MP主要方法為25%聚乙二醇(PEG)沉淀法：其原理是PEG與蛋白質(zhì)混合，隨著濃度的升高，蛋白質(zhì)的溶解度下降，分子量大的蛋白質(zhì)首先被沉淀出來。這項(xiàng)方法有一些缺點(diǎn)，如M-PRL測定不精確，低濃度的活性PRL(mono-PRL及big-PRL)被共沉淀[7]。CHEN等[8]研究證明使用25%PEG沉淀稀釋5倍后的血清樣本，可以有效地降低M-PRL的濃度，提高PRL的回收率。為了提高對(duì)更小分子活性PRL的沉淀效率，本研究分別使用25%PEG沉淀法及25%PEG沉淀稀釋5倍后的血清樣本2種方法檢測M-PRL，分析比較2種方法對(duì)真性高泌乳素血癥的檢出率有無差異。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2016年11月至2017年4月我院門診84例 PRL>30 ng/mL的病人血清樣本，其中女74例，男10例，年齡12～73歲。所有標(biāo)本經(jīng) SIEMENS Immulite 2000型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測定血清PRL后，留取血清-80 ℃保存待檢，同時(shí)搜集該病例的臨床診斷及影像學(xué)資料，根據(jù)臨床診斷、影像學(xué)資料及實(shí)驗(yàn)室檢測分為真性高泌乳素血癥組69例及MP組15例。

1.2 檢測方法 PRL檢測：IEMENS Immulite 2000型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑均購自美國西門子公司，嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行檢測。M-PRL篩查試驗(yàn)：25%PEG(相對(duì)分子質(zhì)量為6 000)購自無錫市亞泰聯(lián)合化工有限公司，溶液 4 ℃保存用作M-PRL的沉淀劑。經(jīng)檢測為高泌乳素的血清標(biāo)本再經(jīng)PEG沉淀處理，200 μL 血清樣本和200 μL 配好的25%PEG溶液放入離心管混勻，另取血清200 μL血清樣本0.9%氯化鈉溶液稀釋5倍后加等量的25%PEG溶液充分混勻，分別于3 500 r/min(離心半徑15 cm) 離心10 min，分別測定上清液PRL，PEG沉淀法PRL測定回收率=[(PEG沉淀后PRL值×2)/PEG沉淀前PRL值]×100%，血清稀釋PEG沉淀法中PRL測定回收率=[(PEG沉淀后PRL值×2×稀釋倍數(shù))/PEG沉淀前PRL值]×100%，回收率<50%可認(rèn)為有M-PRL的存在[9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)。采用ROC曲線下面積評(píng)價(jià)血清稀釋PEG沉淀法和PEG沉淀法對(duì)MP的診斷準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果

2.1 2種檢測方法PRL回收率的比較 84例高泌乳素血癥中有15例MP、69例真性高泌乳素血癥。當(dāng)使用血清稀釋PEG沉淀法時(shí)，真泌組和巨泌組的PRL回收率分別是116.0%和63.0%,PRL回收率明顯高于傳統(tǒng)的PEG沉淀法(P<0.05和P<0.01)(見表1～2)。

2.2 2種檢測方法檢出率的比較 84例高泌乳素血癥中，血清稀釋PEG沉淀法對(duì)真性高泌乳素血癥檢出率為94.05%(79/84)，高于PEG沉淀法的檢出率84.52%(71/84)(χ2=3.98，P<0.05)。69例有癥狀的真性高泌乳素血癥病人(月經(jīng)紊亂33例，不孕不育3例，更年期7例，顱內(nèi)占位24例，溢乳2例)，血清稀釋PEG法檢出率為97.1%(67/69)，高于PEG沉淀法的檢出率87.0%(60/69)(χ2=4.84，P<0.05)。繪制 ROC 曲線，發(fā)現(xiàn)血清稀釋PEG沉淀法和PEG沉淀法對(duì)MP的診斷均有一定的價(jià)值(AUC：0.932～0.939 )(見表3)。

表1 MP組血清稀釋PEG沉淀法和PEG沉淀法對(duì)PRL回收率的比較

表2 真性高泌乳素血癥組血清稀釋PEG沉淀法和PEG沉淀法對(duì)PRL回收率的比較

3 討論

既往大量研究表明高泌乳素血癥可以由M-PRL升高引起，據(jù)國外文獻(xiàn)[10-11]報(bào)道，M-PRL所致的高泌乳素血癥誤診率達(dá)10%，并可導(dǎo)致22%～87%誤診病例接受錯(cuò)誤的藥物治療，所以，確認(rèn)病人是否為M-PRL所致的高泌乳素血癥顯得尤為重要。凝膠色譜層析(gel filtration chromatograpy，GFC)法被公認(rèn)為檢測M-PRL的金標(biāo)準(zhǔn)[12]，但因檢測技術(shù)復(fù)雜、耗時(shí)長、費(fèi)用昂貴，不適合臨床常規(guī)使用。目前臨床上常使用25%PEG 6000沉淀法測定高泌乳素血癥病人的M-PRL，其準(zhǔn)確性高，可操作性強(qiáng)，已在臨床上廣泛使用[13-16]。

但CHEN等[8]研究發(fā)現(xiàn)，25%PEG 6000沉淀法僅僅依據(jù)分子量選擇性沉淀PRL，當(dāng)向含有mono-PRL、big-PRL及M-PRL的洗脫液中加入額外的蛋白質(zhì)時(shí)，隨著加入蛋白質(zhì)量的增加，上清液中PRL的檢測濃度逐漸下降，且向PRL的標(biāo)準(zhǔn)液中加入不同量的蛋白質(zhì)后可以得到相似的結(jié)果。當(dāng)總蛋白的濃度從55.0 g/L增至90.0 g/L時(shí)，mono-PRL的回收率從81.9%降至71.3%，20%～30%的mono-PRL被非特異性的共沉淀下來。因此，可以認(rèn)為PEG沉淀法檢測的PRL水平是對(duì)富含蛋白液的mono-PRL選擇性沉淀及非特異性共沉淀的共同結(jié)果。

表3 血清稀釋PEG沉淀法和PEG沉淀法對(duì)MP的診斷價(jià)值

另外，血清蛋白中球蛋白的比率亦可對(duì)沉淀率產(chǎn)生影響，且M-PRL的分子量也是不斷變化的。因此，他們采用了降低血清蛋白的濃度來提高活性PRL的回收率，同時(shí)證明了采用PEG沉淀5倍稀釋后的血清標(biāo)本法可以明顯提高真性高泌乳素血癥的檢出率。

本研究結(jié)果表明，在高泌乳素病人血清中，M-PRL的檢出率為17.9%(15/84)，證實(shí)了M-PRL是造成高泌乳素血癥的常見原因[17]，另外本研究分別使用PEG沉淀法和血清稀釋PEG沉淀法檢測M-PRL的結(jié)果提示,較傳統(tǒng)的PEG沉淀法來說，血清稀釋PEG沉淀法可以明顯提高PRL的回收率及真性高泌乳素血癥的檢出率及靈敏度，這與文獻(xiàn)報(bào)道[8]相似，因此，臨床上可考慮使用血清稀釋PEG沉淀法篩查M-PRL，此種方法更為高效，且簡單、易操作，對(duì)指導(dǎo)高泌乳素血癥的臨床治療和監(jiān)測疾病的進(jìn)展上可起到重要的作用。