浮游植物葉綠素a測(cè)定方法研究進(jìn)展

楊 琳

(池州市環(huán)境保護(hù)監(jiān)測(cè)站，安徽 池州 247000)

1 前 言

葉綠素a是水生態(tài)調(diào)查中必不可少的調(diào)查項(xiàng)目，是反映浮游植物生物量乃至水體富營(yíng)養(yǎng)化程度的最直接有效的指標(biāo)[1]。浮游植物長(zhǎng)期以來(lái)就被用作水質(zhì)的生物指標(biāo)，特別對(duì)湖庫(kù)而言，測(cè)定浮游植物的物種和數(shù)量，對(duì)水質(zhì)評(píng)價(jià)有著更為重要的實(shí)用意義，而葉綠素a是現(xiàn)場(chǎng)觀測(cè)中必不可少的測(cè)量參數(shù)[2]。目前，浮游植物葉綠素a的監(jiān)測(cè)方法主要有分光光度法、熒光法、色譜法，其中傳統(tǒng)的分光光度法因所需儀器價(jià)格較低、操作簡(jiǎn)單、測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，因此應(yīng)用最為廣泛。不過(guò)，由于不同研究對(duì)于葉綠素a測(cè)定要求時(shí)限和精度要求不同，采用研究方法也有所差異，此外，由于當(dāng)前研究方法眾多，往往給研究者在方法選擇方面帶來(lái)困惑，因此，本文將重點(diǎn)對(duì)浮游植物葉綠素a監(jiān)測(cè)方法進(jìn)行綜述以為今后相關(guān)研究工作提供借鑒和參考。

2 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展

目前，國(guó)內(nèi)外葉綠素a測(cè)定方法主要有分光光度法、熒光法、高效液相色譜法以及遙感影像法等。現(xiàn)對(duì)各種方法綜述如下。

2.1 分光光度法

葉綠素a的最大吸收峰位于663nm，根據(jù)Lambert Beer 定律，在一定濃度的范圍內(nèi)，葉綠素a吸光度值與其濃度成正比。水樣經(jīng)過(guò)濾濃縮、提取、定容后，在最大吸收波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定其吸光度值，去除干擾值，再根據(jù)葉綠素a 的標(biāo)準(zhǔn)曲線就能計(jì)算出葉綠素a 的濃度。目前，測(cè)定葉綠素一般較多采用分光光度法來(lái)進(jìn)行準(zhǔn)確的定量，分光光度法是基于物質(zhì)分子對(duì)光具有選擇吸收的特性而建立起來(lái)的分析方法，屬于光度法的一種[3]。國(guó)內(nèi)水體浮游植物葉綠素測(cè)定方法常用的是《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》(第四版)[4]推薦的分光光度法。

1999年，汪志國(guó)等用雙波長(zhǎng)分光光度法同時(shí)測(cè)定葉綠素a，該法不進(jìn)行預(yù)分離，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果與先分離、再以強(qiáng)氧化劑消解后分別測(cè)定鎂離子濃度進(jìn)而推算葉綠素a濃度，與原子吸收法具有較好的相關(guān)關(guān)系[5]。

2005年，韓桂春等[6]對(duì)葉綠素測(cè)定的國(guó)標(biāo)法、金相燦和屠清瑛主編的《湖泊富營(yíng)養(yǎng)化調(diào)查規(guī)范》(第二版)中葉綠素a 測(cè)定方法與改進(jìn)后的第二種方法進(jìn)行了比較。比較而言，前兩種方法樣品處理方法繁瑣，研磨使用的丙酮有毒，研磨樣品轉(zhuǎn)移的時(shí)候會(huì)造成損失。第二種方法的加酸量不容易掌握，并且酸化后還需穩(wěn)定 15min，不適宜進(jìn)行大批量監(jiān)測(cè)。論文提出將濾膜直接放入帶塞的試管中，加入10 mL 90%丙酮直接浸提。這種方法葉綠素a 浸提完全沒(méi)有損失，而且具有操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等種種優(yōu)點(diǎn)。

2008年，馮菁等采用8種不同方法提取微囊藻樣品，并且對(duì)提取液分別采用三色法、單色法測(cè)定吸光度，結(jié)果顯示單色法的變異系數(shù)普遍稍大于三色法，即從方法的穩(wěn)定性來(lái)說(shuō)，三色法稍?xún)?yōu)于單色法；從方法的適用范圍來(lái)講，三色法基本上適用于各種溶劑，而單色法僅適用于丙酮提取液。另外，從方法的簡(jiǎn)便性來(lái)說(shuō)，三色法操作簡(jiǎn)單，產(chǎn)生誤差幾率小，耗時(shí)比單色法短。因此，Chl-a的測(cè)定可以根據(jù)實(shí)際情況的要求選取[7]。

2012 年，童桂鳳等[8]將《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》(第四版)和 ISO 10260∶1992(E)中測(cè)定葉綠素 a 的典型方法作了比較，比較結(jié)果表明，兩種方法的測(cè)定結(jié)果不僅存在顯著性的差異，而且具有一定的相關(guān)性，他們從提取方法、提取溶劑和計(jì)算公式等方面討論了原因，指出ISO方法提取效率更高，操作更簡(jiǎn)便。

2017年，李會(huì)玲等對(duì)《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法》(第四版)[4]書(shū)中葉綠素a測(cè)定方法進(jìn)行了簡(jiǎn)化改進(jìn)，提高了葉綠素a的提取率和穩(wěn)定性，確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度[9]。

現(xiàn)行的分光光度法按照提取劑不同主要分為丙酮法、乙醇法等，其中，丙酮法由于丙酮毒性較大，目前使用較少，乙醇法使用逐漸增多。按照測(cè)定方法不同分為單色法和三色法。分光光度法作為浮游植物葉綠素a常規(guī)測(cè)定方法，多應(yīng)用于科研工作和環(huán)保地表水例行監(jiān)測(cè)，適合室內(nèi)大批量水環(huán)境樣品測(cè)定。為提高該方法測(cè)定準(zhǔn)確度，分光光度法可以從以下幾個(gè)方面進(jìn)行完善：改變細(xì)胞破碎的方式，如超聲波、反復(fù)融凍；選擇更好的萃取試劑，如混合試劑；優(yōu)化提取方法，如延時(shí)或加熱提??；選擇更優(yōu)質(zhì)的濾膜，如玻璃纖維濾膜，冷凍避光保存等。

2.2 熒光法

熒光現(xiàn)象是指物質(zhì)在吸收波長(zhǎng)比較短并且其能量較高的光以后，把光能轉(zhuǎn)換成可見(jiàn)光，即波長(zhǎng)比較長(zhǎng)的光的現(xiàn)象叫做熒光現(xiàn)象。由于檢測(cè)的熒光物質(zhì)有所不同，所以吸收光譜也就不同，熒光的光譜特性因而也有所不同。因此，可以根據(jù)熒光光譜的特點(diǎn)來(lái)區(qū)分熒光物質(zhì)的性質(zhì)[3]。當(dāng)葉綠素a的分子吸收了光量子，這樣就得到能量，之后便從基態(tài)躍遷到了激發(fā)態(tài)，躍遷到激發(fā)態(tài)便產(chǎn)生熒光，再用熒光光度計(jì)來(lái)測(cè)量植物體內(nèi)所含葉綠素a的熒光強(qiáng)度，進(jìn)而確定葉綠素a的含量[10-11]。

國(guó)外應(yīng)用熒光法測(cè)定浮游植物葉綠素a起步較早，并且在實(shí)際應(yīng)用中取得了大量的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。

1973年，H.H.Kim首次利用機(jī)載激光熒光計(jì)實(shí)現(xiàn)了海藻濃度及其分布的原位測(cè)量。該系統(tǒng)采用脈沖燃料激光器作為激發(fā)光源，通過(guò)測(cè)量海水表層葉綠素a所發(fā)出的熒光強(qiáng)度，獲得有關(guān)海藻分布的信息，能夠探測(cè)到mg/m3量級(jí)的葉綠素a含量。之后，基于激光誘導(dǎo)熒光和Raman散射機(jī)理的機(jī)載和船載激光雷達(dá)遙測(cè)系統(tǒng)引起了人們極大興趣，后續(xù)出現(xiàn)了大量相關(guān)研究報(bào)道[12]。

1979年，Yentsch首次提出采用光譜熒光信號(hào)探測(cè)藻類(lèi)群落結(jié)構(gòu)，但是熒光法結(jié)果不夠穩(wěn)定，雖然通過(guò)用DCMU處理浮游植物分子能部分抑制熒光的變化，但很難自動(dòng)地分析藻類(lèi)群落的結(jié)構(gòu)。此后，熒光法更多的應(yīng)用于單一藻類(lèi)培養(yǎng)物的測(cè)定分析和的監(jiān)測(cè)[12]。

1994年，Kaitala 等發(fā)現(xiàn)輔助色素與葉綠素的熒光比值不隨生長(zhǎng)時(shí)期的變化而變化，可以通過(guò)“選擇激發(fā)浮游植物色素”來(lái)分析浮游植物群落的色素組成[13]。先在實(shí)驗(yàn)室建立重要浮游藻純種的光譜特征分類(lèi)方法，通過(guò)天然水體光譜與純種光譜基本特征的比較分析，繼而得到天然水體色素組成，進(jìn)一步對(duì)浮游藻分類(lèi)。只能對(duì)實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)建立純種藻類(lèi)光譜特性的藻種進(jìn)行區(qū)分局限性大，需要消耗大量的人力和物力。

1995年，Lee等發(fā)現(xiàn)藍(lán)藻可以敏感而有選擇性地從混合浮游植物中檢測(cè)通過(guò)藻藍(lán)蛋白，激發(fā)波長(zhǎng)620 nm和葉綠素激發(fā)波長(zhǎng)440 nm，前者用于檢測(cè)自身的藍(lán)細(xì)菌，后者是為減去真核藻類(lèi)存在于樣品中的干涉[14]。根據(jù)藍(lán)藻所具有的藻藍(lán)蛋白發(fā)出的特征熒光譜，建立了現(xiàn)場(chǎng)活體監(jiān)測(cè)藍(lán)藻葉綠素質(zhì)量濃度的熒光分析技術(shù)，在 0.01～10μg/mL的范圍內(nèi)可準(zhǔn)確測(cè)定海水樣品的藍(lán)藻葉綠素質(zhì)量濃度。研究了淡水中藍(lán)藻進(jìn)行了定性和定量的分析，用葉綠素的濃度值來(lái)反映藍(lán)藻的生物量，并不能真正意義上說(shuō)明藍(lán)藻的數(shù)量。

1997年，D. Mckee等報(bào)道了一種新型的能同時(shí)測(cè)量葉綠素?zé)晒?、光線衰減及大角度散射的組合式儀器[15]。

該儀器包括三個(gè)光學(xué)傳感器(熒光計(jì)、濁度計(jì)和渾濁度儀)以及配套子系統(tǒng)包括微處理單元、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)單元和能量供給單元，并且全部密封在不銹鋼管殼內(nèi)，能潛入水中工作。三個(gè)光學(xué)傳感器共用一個(gè)脈沖氙燈作光源。在蘇格蘭西海岸進(jìn)行的現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)表明，該組合儀器具有良好的線性關(guān)系、較高的分辨率和較大的動(dòng)態(tài)范圍。

2002年，M.Beutler等人研制出了多波長(zhǎng)激發(fā)熒光的葉綠素濃度現(xiàn)場(chǎng)測(cè)量?jī)x，整個(gè)儀器置于放入水中的圓筒內(nèi)，能在幾秒鐘的時(shí)間內(nèi)對(duì)種藻類(lèi)葉綠素濃度分別進(jìn)行測(cè)量，并把測(cè)量結(jié)果與測(cè)得的結(jié)果進(jìn)行比較,實(shí)驗(yàn)證明這種方法是有效的[16]。

國(guó)內(nèi)應(yīng)用熒光法對(duì)水體浮游植物進(jìn)行監(jiān)測(cè)的研究始于80年代末[17]。國(guó)家海洋局第二海洋研究所于1989年應(yīng)用熒光高度成像光譜儀測(cè)的葉綠素 a 濃度值與現(xiàn)場(chǎng)船測(cè)結(jié)果以及美國(guó)空間中心的機(jī)載海洋激光雷達(dá)所測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)關(guān)系[18]。

1996年，中國(guó)科學(xué)院海洋研究所報(bào)道了一種適用于各種船只的海水葉綠素含量走航自動(dòng)測(cè)定系統(tǒng)[19]。其設(shè)計(jì)方案是：用水泵從船底連續(xù)汲取海水，現(xiàn)場(chǎng)海水連續(xù)和穩(wěn)定地進(jìn)入熒光光度計(jì)樣品室，測(cè)定海水中浮游植物活體細(xì)胞的熒光強(qiáng)度，測(cè)定結(jié)果經(jīng)模數(shù)轉(zhuǎn)換由主計(jì)算機(jī)記錄。

1998年，燕山大學(xué)的王玉田教授團(tuán)隊(duì)基于葉綠素a的熒光特性，論證了海藻葉綠素a與海藻濃度之間的相關(guān)性，用于海藻生物量測(cè)量[20]。

2004年，唐堯基等[21]用N,N-二甲基甲酰胺作為萃取劑，利用熒光法激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)之差為 237nm，建立了同步熒光法測(cè)定海水中葉綠素 a 含量的新方法。該方法具有快速、靈敏及其他常見(jiàn)色素不干擾測(cè)定的優(yōu)點(diǎn)。同年，J. Gregor等[22]對(duì)標(biāo)準(zhǔn) ISO葉綠素 a 定量方法、熒光光譜測(cè)定法和水下熒光探針在現(xiàn)場(chǎng)對(duì)浮游植物進(jìn)行定量測(cè)定的方法在淡水環(huán)境中的性能進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)水下熒光探針靈敏高效，適合現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定。

2012 年，馬永山等[23]建立了對(duì)葉綠素 a 的導(dǎo)數(shù)同步熒光檢測(cè)法。這種方法簡(jiǎn)便快速，而且并不需要進(jìn)行復(fù)雜的前處理。因此得出，葉綠素 a 的線性范圍是0.02～125μg/L，其檢出限是 0.25μg/L，其回收率是 97.0%～103.8%。同年，董大圣等[24]研究了葉綠素 a 和濁度傳感器技術(shù)及其設(shè)計(jì)。該傳感器技術(shù)基于熒光誘導(dǎo)的葉綠素 a檢測(cè)原理和散射的濁度檢測(cè)技術(shù)原理進(jìn)行設(shè)計(jì)，可以實(shí)時(shí)測(cè)量海水的相關(guān)參數(shù)，實(shí)現(xiàn)設(shè)計(jì)所要求的微弱光信號(hào)檢測(cè)功能。

熒光法具有測(cè)定速度快、靈敏度高、實(shí)時(shí)性較好，不受其它常用色素干擾等優(yōu)點(diǎn), 多應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定，或者是在線監(jiān)測(cè)，特別是水體的富營(yíng)養(yǎng)化測(cè)定，可以隨時(shí)且及時(shí)的監(jiān)測(cè)水體中浮游植物的生長(zhǎng)分布以及其變化的狀態(tài)[3]。這一測(cè)定方法現(xiàn)行主要有普通熒光測(cè)定和同步熒光測(cè)定。可以進(jìn)一步研發(fā)快速、準(zhǔn)確的現(xiàn)場(chǎng)熒光儀，確定最佳測(cè)定條件，豐富地表水原位測(cè)定手段。

2.3 色譜法

色譜法的原理是被分離物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中的吸附力不同，當(dāng)樣品通過(guò)色譜柱的時(shí)候，被分離物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中不斷地發(fā)生吸附、解吸，造成組分通過(guò)色譜柱的時(shí)間不同，不同的物質(zhì)會(huì)先后流出色譜柱，進(jìn)入到檢測(cè)器中進(jìn)行分析，從而達(dá)到分離的目的[3]。

在20世紀(jì)70、80年代薄層色譜分析發(fā)展的較為迅速，這使浮游植物的標(biāo)志色素可輕易分離，但是由于此項(xiàng)技術(shù)專(zhuān)業(yè)性太強(qiáng)、效率較低而沒(méi)有被廣泛應(yīng)用。Mantoura[25]、Suzuki和Wright[26]等很多學(xué)者相繼建立了分析海洋浮游植物光合色素組成的高效液相色譜法。

2005 年，林少君等[11]對(duì)比了葉綠素 a 提取的反復(fù)凍融-浸提法與標(biāo)準(zhǔn)方法中的研磨法，證實(shí)反復(fù)凍融法有穩(wěn)定性好、人為誤差小、結(jié)果準(zhǔn)確和操作簡(jiǎn)單安全等優(yōu)點(diǎn)，非常適合運(yùn)用于常規(guī)的水質(zhì)監(jiān)測(cè)。

2009 年，侯燕松等[27]學(xué)者采用反相高效液相色譜技術(shù)(RP2HPLC)系統(tǒng)的研究了我國(guó)主要的淡水藻類(lèi)的光合色素，在8 種純培養(yǎng)藻類(lèi)中共確定類(lèi)胡蘿卜素、葉綠素及其衍生物 19 種。通過(guò)實(shí)際的監(jiān)測(cè)，證實(shí)了此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用的可行性，為基于HPLC分析技術(shù)的浮游植物化學(xué)分類(lèi)法提供了重要理論依據(jù)。

2010年，程紅艷等[28]研發(fā)使用超聲波輔助快速提取 RP-HPLC測(cè)定滸苔中葉綠素 a 和 b 含量的方法, 樣品前處理簡(jiǎn)便易操作、提取效率高; 在選定的色譜條件下, 葉綠素 a 和 b 分離度高, 方法重復(fù)性好、回收率高, 可作為滸苔中葉綠素 a 和 b 含量快速測(cè)定的有效方法。

色譜法彌補(bǔ)了分光光度法無(wú)法區(qū)分各種色素混合體的缺陷，尤其在湖泊(水庫(kù))營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)分級(jí)測(cè)定時(shí)，可作為分光光度法的有力補(bǔ)充。這一測(cè)定方法現(xiàn)行主要有高效色譜法(HPLC)和反向高效色譜法，具有柱效高、分析速度快、精確程度高的特點(diǎn)。為完善該測(cè)定方法，今后需進(jìn)一步優(yōu)化色譜條件的選擇，探索不同光合因子在不同實(shí)驗(yàn)體系下的變化趨勢(shì)，了解更具體的光譜特征，建立完善的實(shí)驗(yàn)體系，總結(jié)常見(jiàn)光合色素的保留時(shí)間、吸收光譜、校正及影響因子等參數(shù)。

2.4 遙感影像法

水質(zhì)遙感技術(shù)研究是定量遙感技術(shù)研究的一個(gè)重要領(lǐng)域。水體中的葉綠素a含量的遙感監(jiān)測(cè)大多通過(guò)對(duì)水體反射光譜的特征與葉綠素a的濃度之間的關(guān)系進(jìn)行分析從而建立一個(gè)數(shù)學(xué)模型，然后應(yīng)用到遙感圖像上再進(jìn)行反演，進(jìn)而對(duì)大面積水域的葉綠素a的濃度進(jìn)行定量估算[3]。目前，水質(zhì)遙感反演模型構(gòu)建的方法主要有三種：分析方法、經(jīng)驗(yàn)方法和半經(jīng)驗(yàn)方法。其中，主要方法是基于傳統(tǒng)統(tǒng)計(jì)回歸模型的經(jīng)驗(yàn)方法。

1989 年，國(guó)家海洋局第二海洋研究所根據(jù)具有不同葉綠素濃度的水體在藍(lán)綠譜段所輻射的光譜特征有所不同，通過(guò)采用比值法來(lái)監(jiān)測(cè)海面葉綠素的濃度以及分布情況[29]。

2009 年，劉建萍等[30]人選取神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法及遙感指數(shù)法兩種反演方法，來(lái)建立葉綠素 a 與 MODIS波段之間的函數(shù)關(guān)系，并且從反演精度和反演能力兩個(gè)角度對(duì)兩種方法分別進(jìn)行了研究比較。

2012 年，韋玉春等[31]提出使用線性基線校正方法來(lái)削弱水體光譜中懸浮泥沙的貢獻(xiàn)。根據(jù)渾濁水體中懸浮物的光學(xué)性質(zhì)確定的光譜線性基線校正可以較好的提高葉綠素 a 濃度的反演精度，改進(jìn)反演模型的診斷性。

2018年，夏曉蕓等[32]本文利用實(shí)時(shí)遙感影像數(shù)據(jù)與實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)建立了適用于反演大伙房水庫(kù)葉綠素a的線性回歸模型和最小二乘支持向量機(jī)模型。由于水體結(jié)構(gòu)復(fù)雜，影響水質(zhì)參數(shù)光學(xué)性質(zhì)的因素較多，非線性的最小二乘支持向量機(jī)模型的反演精度明顯高于簡(jiǎn)單的線性回歸模型。

2018年，張明慧等[33]結(jié)合MODIS遙感影像及浮標(biāo)實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)，采用“時(shí)間連續(xù)彌補(bǔ)空間稀疏”的建模策略，通過(guò)RF方法構(gòu)建合理的Chl-a濃度反演模型，使用均方根誤差(RMSE)、平均絕對(duì)百分比誤差(MAPE)和決定系數(shù)(R2)進(jìn)行精度評(píng)價(jià)，并與傳統(tǒng)的BR模型進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果表明，RF反演模型穩(wěn)定可靠、精度較高，可彌補(bǔ)傳統(tǒng)水質(zhì)監(jiān)測(cè)無(wú)法提供空間連續(xù)、宏觀、大范圍參量信息分布的局限性。該研究提出了基于機(jī)器學(xué)習(xí)的MODIS時(shí)序Chl-a濃度遙感反演方法，可為福建近岸水環(huán)境連續(xù)、大范圍監(jiān)測(cè)提供技術(shù)支持。

遙感法具有綜合、客觀、便捷的特點(diǎn)，適用于大面積水體或者海洋水體的長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，滿(mǎn)足預(yù)測(cè)預(yù)警的現(xiàn)實(shí)需求。可以實(shí)現(xiàn)對(duì)水華和水體富營(yíng)養(yǎng)化的監(jiān)測(cè)及評(píng)價(jià)，實(shí)現(xiàn)區(qū)域尺度甚至全球尺度上對(duì)水體表層水質(zhì)參數(shù)的時(shí)空動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行監(jiān)測(cè)。接下來(lái)，可以進(jìn)一步研究如何克服氣象、水文等制約因素，研發(fā)高時(shí)間、高空間、高光譜的衛(wèi)星傳感器，優(yōu)化大氣校正算法以及現(xiàn)場(chǎng)測(cè)量和反演算法。

3 結(jié) 論

隨著社會(huì)的快速發(fā)展，水華藍(lán)藻問(wèn)題越來(lái)越突出，成為威脅河海湖庫(kù)生態(tài)環(huán)境的關(guān)鍵要素。葉綠素a監(jiān)測(cè)作為評(píng)價(jià)河海湖庫(kù)富營(yíng)養(yǎng)化水平及水生態(tài)健康的重要指標(biāo)，其監(jiān)測(cè)方式目前越來(lái)越受到環(huán)境監(jiān)管部門(mén)及相關(guān)科研機(jī)構(gòu)的重視。雖然目前已有多種監(jiān)測(cè)方式應(yīng)用于實(shí)踐，不過(guò)每一種監(jiān)測(cè)方法都存在一定的限制條件。因此，環(huán)保部門(mén)進(jìn)行例行監(jiān)測(cè)或者科研機(jī)構(gòu)進(jìn)行長(zhǎng)期跟蹤監(jiān)測(cè)時(shí)要根據(jù)監(jiān)測(cè)對(duì)象的不同選擇合適的方法，甚至選擇幾種監(jiān)測(cè)方法結(jié)合的方式來(lái)進(jìn)行葉綠素a的測(cè)定，以為水環(huán)境管理和科研工作提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。