殼聚糖絮凝法純化牛蒡多糖的工藝優(yōu)化

許 昕,侯靜宇,王立安

(河北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,河北石家莊 050024)

牛蒡(ArctiumlappaL.)屬菊科兩年生草本植物[1]。據(jù)《本草綱目》記載,牛蒡性溫味甘,可“通十二經(jīng)脈,洗五臟惡氣”,“久服輕身耐老”[2]。牛蒡多糖是由呋喃構(gòu)型的D-2果糖經(jīng)β(2→1)糖苷鍵脫水聚合而成的一種果聚糖,末端有葡萄糖殘基,其聚合度一般在2～60[3]。牛蒡根中的多糖含量高達(dá)45%[4],而且牛蒡多糖作為一種水溶性膳食纖維,具有清除自由基[5]、增強(qiáng)免疫力[6]、降血脂[7]、改善心血管疾病[8]等功效。

殼聚糖是一類天然的陽離子型高分子絮凝劑[9]。由于分子中含有氨基,殼聚糖在酸性條件下帶有正電荷,因此具有中和電荷與吸附架橋的雙重絮凝作用[10-11],可有效除去多糖中的蛋白質(zhì)、色素等雜質(zhì)。它作為甲殼素的脫乙?；a(chǎn)物,具有良好的生物相容性、無毒性、可降解特性等[12]。近年來,殼聚糖已逐漸運(yùn)用到猴頭菇[13]、大棗[14]、合歡皮[15]、香菇[16]、翅果油樹葉片[17]等多糖的純化中,并取得良好的效果。

目前,對于牛蒡多糖提取工藝的研究很多[18],如超聲[19]、微波[20]、酶法[21]、超高壓技術(shù)[22]等均可得到較熱水浸提更高的多糖提取率。但純化工藝的相關(guān)研究較少。按照傳統(tǒng)方法,從多糖提取液中純化多糖需要先經(jīng)過除小分子雜質(zhì)、脫色和去蛋白等處理,然后進(jìn)行乙醇沉析,離心收集濾餅,真空冷凍干燥后制得多糖成品[23]。此傳統(tǒng)工藝步驟繁瑣,雜質(zhì)均需逐步去除,實(shí)驗(yàn)周期長,生產(chǎn)效率較低而且易造成多糖等有效成分的損失[24]。為了更好地保留有效成分和縮短工藝周期,本文以牛蒡根為材料,采用殼聚糖對牛蒡多糖提取液進(jìn)行絮凝純化,以多糖保留率、蛋白清除率以及脫色率為評價(jià)指標(biāo),用正交試驗(yàn)的方法探討殼聚糖絮凝的最佳工藝,以期為牛蒡多糖的研究開發(fā)奠定科學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

鮮牛蒡根 河北省寧晉縣牛蒡生產(chǎn)基地;殼聚糖、BCA蛋白濃度測定試劑盒、1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、抗壞血酸(VC)、丁基羥基茴香醚(BHA)、過氧化氫 北京索萊寶科技有限公司;干酵母 安琪酵母股份有限公司;95%乙醇、鹽酸、氫氧化鈉 中國醫(yī)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;酵母粉、蛋白胨、葡萄糖、瓊脂粉 北京奧博星生物技術(shù)有限公司;實(shí)驗(yàn)所使用水 均為超純水;其余有機(jī)試劑 均為國產(chǎn)分析純。

MULTISKAN GO酶標(biāo)儀 美國Thermo;FW177型中草藥粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器有限公司;MIKRO-22R型臺式冷凍離心機(jī) 德國Hettich公司;YH-M10001型電子天平 瑞安市英衡電器有限公司;RE-52AA 51011型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋 國華電器有限公司;WKH-7-A型熱風(fēng)循環(huán)烘箱 青州市精誠醫(yī)藥裝備制造有限公司;KQ-500E超聲波清洗儀 昆山市超聲波儀器有限公司;FD-1C-50冷凍干燥機(jī) 上海比朗儀器制造有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 殼聚糖絮凝法制備牛蒡多糖

1.2.1.1 牛蒡多糖提取液的制備 將新鮮牛蒡根于55 ℃下烘干后粉碎,過80目篩,得到牛蒡根干粉。稱取一定量牛蒡粉,按照1∶10 (g/mL)的料液比于70 ℃浸提90 min,3500 r/min離心15 min,取濾渣,按照相同步驟再浸提一次,合并前兩次的提取液得到牛蒡多糖提取液[23]。

1.2.1.2 殼聚糖絮凝 精確稱取10.0000 g殼聚糖加入1%(v/v)乙酸溶液溶解并定容至1000 mL,充分?jǐn)嚢杈鶆?于4 ℃條件靜置6 h后使用。取1.2.1.1中的40 mL牛蒡多糖提取液(pH5.4),加入4 mL殼聚糖醋酸溶液,混勻后在一定溫度下靜置一定時(shí)間后,12000 r/min離心15 min后,取少量上清液檢測蛋白質(zhì)、多糖、色素含量的變化。

1.2.1.3 牛蒡多糖制備 將在特定條件下絮凝純化后的多糖上清液減壓濃縮、真空冷凍干燥,得到牛蒡多糖粉末,稱重備用。

1.2.2 殼聚糖絮凝法純化牛蒡多糖單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 殼聚糖用量對絮凝純化效果的影響 在26 ℃條件下,固定絮凝時(shí)間為45 min,向多糖提取液中分別加入不同用量殼聚糖溶液(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL/g,殼聚糖用量定義為:1%殼聚糖醋酸溶液體積/生藥材質(zhì)量),考察殼聚糖用量對絮凝純化效果的影響(換算后1%殼聚糖醋酸溶液量不足4 mL的用超純水補(bǔ)足)。

1.2.2.2 殼聚糖絮凝時(shí)間對牛蒡多糖純化效果的影響 在26 ℃條件下,固定殼聚糖用量為1.2 mL/g,通過改變絮凝時(shí)間(15、45、75、105、135 min),考察絮凝時(shí)間對于牛蒡多糖純化效果的影響。

1.2.2.3 提取液pH對牛蒡多糖絮凝純化效果的影響 調(diào)節(jié)多糖提取液pH,在26 ℃條件下,固定殼聚糖用量為1.2 mL/g,絮凝時(shí)間45 min,考察多糖提取液不同pH(2、3、4、5、6、7)對絮凝效果的影響。

1.2.2.4 絮凝溫度對絮凝純化效果的影響 固定殼聚糖用量為1.2 mL/g,絮凝時(shí)間45 min,多糖提取液pH為4,考察不同溫度(26、30、40、50、60、70 ℃)對牛蒡多糖提取液絮凝效果的影響。

1.2.3 正交試驗(yàn) 考慮到在26 ℃條件下絮凝效果最佳,后續(xù)試驗(yàn)在室溫(26 ℃)條件下進(jìn)行。選取提取液pH、絮凝時(shí)間和殼聚糖用量為考察因素,以多糖保留率、蛋白清除率、脫色率為評價(jià)指標(biāo),采用L9(34)正交試驗(yàn)表(表1)進(jìn)行正交試驗(yàn),從而得出殼聚糖絮凝的最佳工藝條件。

表1 L9(34)正交試驗(yàn)因素水平表Table 1 L9(34)orthogonal experimental design and factors

1.2.4 傳統(tǒng)水提醇沉工藝制備牛蒡多糖方法 多糖提取液的制備方法同1.2.1.1,將所得牛蒡多糖提取液60 ℃真空濃縮至原體積的1/3,采用Sevag法去蛋白,即將氯仿與正丁醇以4∶1 (v/v)混合加入4倍體積多糖提取液中,充分振蕩10 min后4000 r/min離心10 min,重復(fù)去蛋白3次之后,取上層液體加入4倍體積的95%乙醇,邊加邊快速攪拌,于4 ℃條件下靜置10 h后,3500 r/min離心15 min,以無水乙醇洗滌沉淀,后真空冷凍干燥,即可得到牛蒡多糖[25-27]。將其用超純水配制成0.1 mg/mL的多糖溶液,測定多糖含量,計(jì)算得率以及純度,并與正交試驗(yàn)得出的最佳絮凝工藝條件下制得牛蒡多糖的各項(xiàng)指標(biāo)比較。

1.2.5 指標(biāo)測定

1.2.5.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及多糖含量的測定 參照馬寧等[28]的方法并稍作修改。精密稱取10.0 mg葡萄糖,加入適量超純水溶解,并定容至100 mL,搖勻即得0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。分別精密量取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液,并用水補(bǔ)至1 mL,然后依次加入1.6 mL 5%苯酚溶液和7 mL濃硫酸,迅速搖勻,30 min后于490 nm處測定吸光度。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo),繪得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程Y=a1X+b1。將牛蒡多糖樣品用超純水稀釋1000倍后,依照上述方法,測定其490 nm處的吸光度值,結(jié)合以下公式測得多糖含量。

式中,F表示多糖含量,μg;A490為490 nm處吸光度;a1、b1均為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線中的系數(shù)值;N為稀釋倍數(shù);V為樣品溶液的定容體積,mL。

1.2.5.2 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及蛋白含量的測定 參照李海玲等[29]的方法,按BCA試劑A∶B=50∶1的比例配制工作液,將0.5 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)BSA溶液按照0、1、2、4、8、12、16 μL加入96孔板,并用PBS溶液補(bǔ)至20 μL。然后每孔加入200 μL工作液,37 ℃孵育30 min后于562 nm處檢測吸光度。以蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo),繪得蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程Y=a2X+b2。將牛蒡多糖樣品稀釋10倍,依照1.2.2的方法,測定562 nm處的吸光度值,并由蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得蛋白質(zhì)含量:

式中,P表示蛋白含量,μg;A562為562 nm處吸光度,a2、b2均為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線中的系數(shù)值;N為稀釋倍數(shù);V為樣品溶液的定容體積,mL。

1.2.5.3 多糖保留率、蛋白清除率、脫色率的測定 在按照1.2.5.1和1.2.5.2的方法求得多糖含量、蛋白含量后,按照以下公式計(jì)算即可得到多糖保留率、蛋白清除率。

式中,F1表示絮凝純化前多糖含量,μg;F2表示絮凝純化后多糖含量,μg。

式中,P1表示絮凝純化前蛋白含量,μg;P2表示絮凝純化后蛋白含量,μg。

取絮凝后上清液直接檢測420 nm處吸光度值,作為色素含量檢測方法。脫色率計(jì)算公式如下:

式中,A1表示多糖提取液絮凝純化之前的420 nm處吸光度值,A2表示多糖提取液絮凝純化之后的420 nm處吸光度值。

1.2.5.4 多糖得率和純度的測定

式中:m2表示在最佳的絮凝條件下按照1.2.1.3步驟純化的多糖樣品質(zhì)量,g;m1表示原料質(zhì)量,g。

納什在《旅游作為人類學(xué)的一個主題》中指出：在人類社會中，旅游是普遍存在的一種人類活動，而旅游包含著不同文化、亞文化之間的接觸［3］。

將按照1.2.1.3中制備的多糖粉末配制成濃度為100 μg/mL的多糖溶液,取1 mL的多糖溶液用1.2.5.1的方法進(jìn)行檢測,得到吸光度值,多糖純度計(jì)算公式如下:

式中,A490表示490 nm處的吸光度;a1、b1均為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線中的系數(shù)值。

1.2.6 多糖的抗氧化活性檢測

1.2.6.1 DPPH·清除能力檢測 參考Sharma等[30]的方法,并做若干修改。用無水乙醇配制0.2 mmol/L的DPPH·溶液,并將之與不同濃度(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mg/mL)的樣品溶液分別混合,37 ℃暗反應(yīng)30 min,在517 nm處測定吸光度值。同時(shí),采用維生素C作為陽性對照。以下為DPPH·清除率計(jì)算方法:

式中,A0為100 μL DPPH·溶液+100 μL水的517 nm處的吸光度值;A1是100 μL DPPH·溶液+100 μL樣品的517 nm處的吸光度值;A2是100 μL樣品+100 μL無水乙醇的517 nm處的吸光度值。

1.2.6.2 酵母細(xì)胞保護(hù)試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)參照并優(yōu)化了Joshi等[31]的研究方法,實(shí)驗(yàn)操作步驟如下:將培養(yǎng)到對數(shù)期的酵母細(xì)胞經(jīng)離心后混懸于100 mmol/L(pH=7.4)的磷酸鹽緩沖液中,并調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107～2×107個/mL[32]。取不同濃度(5、10、15、20、25、30 mg/mL)的多糖樣品溶液加入酵母細(xì)胞懸浮液中,于37 ℃溫浴2 h后,再加入一定量H2O2溫浴1 h。經(jīng)過上述處理的反應(yīng)體系稀釋適當(dāng)倍數(shù)后,采用YEPD平板進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)[33],BHA做陽性對照,抗氧化劑對酵母細(xì)胞的保護(hù)作用按照以下的公式進(jìn)行計(jì)算:

式中:Ai為3 mL細(xì)胞懸液+1 mL樣品溶液+2.1 mL 0.14% H2O2溶液的平板活菌計(jì)數(shù);Aj為3 mL細(xì)胞懸液+3.1 mL蒸餾水的平板活菌計(jì)數(shù);Ao為3 mL細(xì)胞懸液+1 mL蒸餾水+2.1 mL 0.14% H2O2溶液的平板活菌計(jì)數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 多糖和蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線 以葡萄糖質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),490 nm處的吸光度值為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程Y=0.00368X-0.00464(R2=0.9989),線性范圍為10～60 μg/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

2.1.2 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線 以蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),562 nm處的吸光度值為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程Y=0.00315X+0.0402(R2=0.9884),說明25～400 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,本研究中所有蛋白測定均使用該標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Calibration curve for glucose determination

圖2 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Calibration curve for protein determination

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 殼聚糖用量對牛蒡多糖純化效果 如圖3所示,隨著殼聚糖用量的增加,牛蒡多糖提取液的脫色率和蛋白清除率不斷升高,當(dāng)殼聚糖用量達(dá)1.2 mL/g以后,二者增幅變緩。另外,隨著殼聚糖用量的增加,牛蒡多糖保留率呈逐步下降趨勢。這可能是由于殼聚糖作為一種吸附劑,在絮凝色素和蛋白質(zhì)的同時(shí),也會對與蛋白質(zhì)緊密結(jié)合的多糖起到一定的吸附沉降作用[34]。綜合考慮上述因素,選擇殼聚糖濃度為1.2 mL/g為適宜殼聚糖用量。

圖3 殼聚糖用量對牛蒡多糖保留率、 蛋白清除率和脫色率的影響Fig.3 Effects of chitosan dosages on polysaccharide retention rate,protein removal rate and decolorization rate

2.2.2 絮凝時(shí)間對牛蒡多糖純化效果的影響 如圖4所示,在15～45 min階段,蛋白質(zhì)清除率逐漸增長,在45 min后,蛋白質(zhì)的去除率增勢趨緩。脫色率同樣在絮凝開始階段上升,而在45 min后基本不變。另外,多糖保留率在15～135 min范圍內(nèi)略有下降但不明顯(圖4)。這可能是因?yàn)殡S著絮凝時(shí)間的延長,蛋白質(zhì)和色素已與殼聚糖充分接觸并結(jié)合為絮團(tuán),即殼聚糖對蛋白膠粒吸附飽和[35],綜合考慮選擇45 min為適宜絮凝時(shí)間。

圖4 殼聚糖絮凝時(shí)間對多糖保留率、 蛋白清除率和脫色率的影響Fig.4 Effects of treating time of chitosan on polysaccharide retention rate,protein removal rate and decolorization rate

2.2.3 提取液pH對牛蒡多糖純化效果的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(圖5),在提取液pH從2升至4的過程中,殼聚糖蛋白質(zhì)清除率逐漸增大,此后逐漸變小。這可能是由于殼聚糖在偏酸性的溶液中,分子上的氨基被質(zhì)子化,使得殼聚糖帶有正電荷,較易與牛蒡多糖提取液中呈陰離子型的雜質(zhì)結(jié)合[36]。從圖5還可看出,在pH在2～7之間,多糖保留率和脫色率有微小波動,但整體變化不大。綜合考慮選取提取液pH4為適宜pH。

圖5 pH對多糖保留率、蛋白清除率和脫色率的影響Fig.5 Effect of pH on polysaccharide retention rate, protein removal rate and decolorization rate

2.2.4 絮凝溫度對牛蒡多糖純化效果的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(圖6),隨著絮凝溫度的升高,多糖保留率和脫色率基本不變,而蛋白質(zhì)清除率均逐漸下降,這可能是溫度升高使得分子熱運(yùn)動加快,絮凝劑分子老化,架橋長度變短,不利于形成大的絮團(tuán)[34]。所以,絮凝純化溫度在室溫26 ℃即可。

表2 殼聚糖絮凝實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析Table 2 Result and analysis of chitosan-based flocculation of polysaccharides

注:R表示因素的極差。

圖6 溫度對多糖保留率、蛋白清除率和脫色率的影響Fig.6 Effects of temperature on polysaccharide retention rate,protein removal rate and decolorization rate

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

正交試驗(yàn)結(jié)果及極差分析見表2,多糖保留率、蛋白質(zhì)清除率和脫色率方差分析分別見表3。從表2及表3可知,若以多糖保留率作為評價(jià)指標(biāo),通過極差分析可知,各因素的影響效果A>C>B,即提取液pH>殼聚糖用量>絮凝時(shí)間,最佳工藝條件為A1B1C3。另外,方差分析結(jié)果(表3)顯示,A、B、C因素對多糖保留率均無顯著影響。

若以蛋白清除率作為評價(jià)指標(biāo),通過極差分析可知,各因素的影響效果B>C>A,即絮凝時(shí)間>殼聚糖用量>提取液pH,最佳工藝條件為A2B1C3。另外,方差分析結(jié)果顯示,A因素對蛋白清除率的影響達(dá)顯著水平,B、C因素對蛋白清除率的影響達(dá)到極顯著水平。

若以脫色率作為評價(jià)指標(biāo),通過極差分析可知,各因素的影響效果C>B>A,即殼聚糖用量>絮凝時(shí)間>提取液pH,最佳工藝條件為A2B1C3。另外,方差分析結(jié)果顯示,A、B、C因素對脫色率均無顯著影響。

綜合以上三個考察因素,最終確定牛蒡多糖殼聚糖絮凝法最佳條件為A2B1C3,即提取液pH為4,絮凝時(shí)間15 min,殼聚糖用量1.2 mL/g,、此時(shí),多糖保留率為87.15%±0.24%,蛋白清除率為54.15%±0.48%,脫色率為79.43%±0.31%。

表3 絮凝實(shí)驗(yàn)方差分析表Table 3 Variance analysis of flocculation experiment

2.4 絮凝法和傳統(tǒng)水提醇沉法的比較

2.4.1 純化工藝的比較 由表4可以看出,絮凝法耗時(shí)少,生產(chǎn)周期短,而且在最佳絮凝條件下,多糖得率和純度分別比傳統(tǒng)水提醇沉工藝提高了33%,15%,因此殼聚糖絮凝法是一種較好的純化牛蒡多糖的方法。

表4 絮凝法和水提醇沉法的比較Table 4 Comparison of chitosan-and ethanol-based purification of polysaccharides

圖7 兩種方法制備牛蒡多糖的DPPH·清除率Fig.7 Results of DPPH· scavenging capacity of polysaccharide prepared by two methods

2.4.2 DPPH·清除活性的比較 殼聚糖絮凝法和醇沉法制備多糖樣品的DPPH·清除能力如圖7所示,DPPH·清除率和樣品濃度之間存在明顯的量效關(guān)系,且殼聚糖絮凝法制得的牛蒡多糖比水提醇沉制備的多糖DPPH·清除能力強(qiáng)。當(dāng)殼聚糖絮凝法制備的多糖樣品濃度達(dá)1.2 mg/mL時(shí),DPPH自由基清除率已達(dá)77.61%。

2.4.3 對氧化應(yīng)激酵母細(xì)胞保護(hù)作用的比較 如圖8所示,隨著樣品濃度的增加,其對酵母細(xì)胞的保護(hù)率呈升高趨勢,說明兩種多糖樣品均對H2O2氧化損傷的酵母細(xì)胞有劑量依賴性。當(dāng)樣品濃度為30 mg/mL,絮凝法制得的多糖對氧化損傷酵母細(xì)胞的保護(hù)率為40.04%±1.60%,傳統(tǒng)水提醇沉制得的多糖樣品對氧化損傷的酵母細(xì)胞的保護(hù)率為33.83%±0.81%,說明絮凝法制得的牛蒡多糖的抗氧化活性優(yōu)于水提醇沉法多糖。

圖8 兩種方法制備牛蒡多糖 對氧化損傷酵母細(xì)胞的保護(hù)作用Fig.8 Protective effects of polysaccharide prepared by two methods on oxidative damaged yeast

3 討論與結(jié)論

本文通過正交試驗(yàn)得到殼聚糖絮凝法純化制備牛蒡多糖的工藝條件:殼聚糖用量為1.2 mL/g,絮凝時(shí)間為15 min,提取液pH為4。在此條件下,多糖得率和純度均在傳統(tǒng)水提醇沉工藝的基礎(chǔ)上有一定提高,并證實(shí)絮凝法制備牛蒡多糖不僅用時(shí)短,而且抗氧化活性更強(qiáng),為進(jìn)一步開發(fā)利用牛蒡多糖提供了新方法。但絮凝法制備的牛蒡多糖仍為粗多糖,若后期需要繼續(xù)提高多糖純度或進(jìn)一步對多糖進(jìn)行分級純化[37],則可結(jié)合超濾[38]等方法進(jìn)行。

本文為比較兩種多糖的抗氧化活性采用了兩種方法。其中DPPH自由基清除能力檢測是體外抗氧化實(shí)驗(yàn)中最經(jīng)典的,也是使用最廣泛的方法[39]。而選取酵母細(xì)胞對多糖的抗氧化活性進(jìn)一步檢測是因?yàn)榻湍讣?xì)胞和人有很多的同源基因,所以二者的抗氧化機(jī)制可能有相似之處[40],酵母細(xì)胞可以較好地模擬人體細(xì)胞受到氧化應(yīng)激的狀態(tài)。兩種方法均顯示,殼聚糖法制得的牛蒡多糖均具較好的抗氧化活性,為制備牛蒡多糖產(chǎn)品的功能定位指明了方向。

另外,殼聚糖作為一種有抗菌、抗氧化[41]等作用的食品添加劑,即使少量殘留在多糖產(chǎn)品中也不會影響其品質(zhì)。而且,殼聚糖來源于蝦蟹外殼等水產(chǎn)廢料,是世界上產(chǎn)量僅次于纖維素的第二大天然可再生資源[42]。采用殼聚糖作為絮凝劑是對生物資源的合理利用,充分體現(xiàn)了資源節(jié)約、環(huán)境友好的發(fā)展理念。

綜上,本研究結(jié)果為牛蒡的精深加工提供了科學(xué)依據(jù)。