蔥、蒜粗提取液對(duì)貯藏期梨黑斑病的防治研究

高小寬

（衡水學(xué)院生命科學(xué)系，河北衡水 053000）

梨黑斑病是由絲孢綱絲孢目鏈格孢屬真菌（Alternaria kikuchiana）引起的梨樹(shù)主要病害之一，采收期發(fā)病最為嚴(yán)重，貯運(yùn)期還可能繼續(xù)發(fā)病。采前爛果率可達(dá)30%～50%，在貯藏后期該病的發(fā)病率可達(dá)37%[1]。

大蒜提取液中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎過(guò)程中產(chǎn)生的，主要為大蒜酶酶解蒜氨酸產(chǎn)生的大蒜素和大蒜素進(jìn)一步分解產(chǎn)生的其他含硫化合物，其成分多達(dá)18種以上，且易揮發(fā)成分抑菌活性最好[2]。目前，采用大蔥、大蒜提取物對(duì)梨黑斑病的抑制尚未見(jiàn)報(bào)道。

本試驗(yàn)選用不同濃度的大蒜、大蔥粗提取液，分別通過(guò)體內(nèi)提取物對(duì)梨黑斑病抑制的最佳濃度，以期為大蒜、大蔥提取物防治梨黑斑病提供依據(jù)，為新型生物防腐劑的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

梨黑斑病菌為梨儲(chǔ)藏期黑斑病，采自衡水舊城村梨園帶病梨果，經(jīng)儲(chǔ)藏15d后取病組織分離得到梨黑斑病菌，40℃保存。新鮮的大蒜、大蔥從市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)獲得。

將從室外購(gòu)回的大蒜、大蔥（去外表皮）分別在無(wú)菌的環(huán)境中，用75%的酒精棉球擦拭其表面，晾干。用滅菌的解剖刀和鑷子去除表皮（注意不要污染內(nèi)部組織），挑取內(nèi)部組織0.1g，放入滅菌的研缽中加1mL無(wú)菌水充分研磨，靜置。

1.2 方法

1.2.1 孢子懸浮液制備。取出預(yù)先培養(yǎng)好的備用病原菌參照方中達(dá)方法[3]，在無(wú)菌條件下，往培養(yǎng)好的菌種培養(yǎng)基上加入含有0.01%Tween80的無(wú)菌水10mL，用已消毒的毛筆將互隔交鏈孢孢子從培養(yǎng)皿上輕輕刮下，制成濃度為1×106CFU/mL的孢子懸浮液，懸浮液孢子計(jì)數(shù)采用在10×10倍顯微鏡下每視野30～35個(gè)分生孢子。

1.2.2 體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)。在無(wú)菌條件下，分別量取4、8、12、16、20mL蔥、蒜粗提取液，分別加入100mL的PDA培養(yǎng)基中（PDA培養(yǎng)基制備參照方中達(dá)方法[3]進(jìn)行），震蕩搖勻后趁熱倒入直徑90mm的培養(yǎng)皿內(nèi)。用滅過(guò)菌的直徑為6mm的打孔器在菌落邊緣鉆取菌餅，用接種環(huán)挑取菌餅接種于含有殺菌劑的PDA培養(yǎng)基的中央，菌絲面向下，每個(gè)處理3次。把接好的培養(yǎng)皿倒置放在25℃光照培養(yǎng)箱中，共連續(xù)培養(yǎng)觀察6d，記錄并分析試驗(yàn)結(jié)果。

1.3 處理已經(jīng)記錄的試驗(yàn)數(shù)據(jù)

采用Microsoft Excel2010軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 離體條件下兩種植物粗提取物對(duì)梨黑斑病菌生長(zhǎng)的影響

2.1.1 兩種植物提取物對(duì)梨黑斑病菌絲的抑制作用。由表1可知，大蒜粗提取液對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率的影響大，在40mL/L濃度下菌落直徑生長(zhǎng)約20mm，在最大200mg/L濃度下僅生長(zhǎng)約7mm。大蔥粗提取液對(duì)菌絲生長(zhǎng)速率的影響小，在最大200mg/L濃度下生長(zhǎng)約45mm。

在濃度200mL/L蒜粗提取液的抑制率高達(dá)90.65%，同時(shí)在 40、80、120、160mg/L 的質(zhì)量濃度下，抑制率均大于70%。而蔥粗提取液在處理濃度下抑制率均小于40%，抑制效果不顯著，不同濃度之間抑制率差異不顯著。

表1 2種植物粗提取液對(duì)梨黑斑病菌絲生長(zhǎng)的影響

2.1.2 2種植物粗提取液對(duì)病原菌絲的的毒力測(cè)定。由表2可知，大蒜粗提取液對(duì)病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為6.304mg/L，大蔥粗提取液對(duì)病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為669.031mg/L，抑制作用最明顯的是大蒜粗提取液。

表2 2種植物粗提取液對(duì)蘋(píng)果斑點(diǎn)落葉病菌絲的室內(nèi)毒力測(cè)定

綜上所述，大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病菌絲生長(zhǎng)的抑制率明顯高于大蔥粗提取液的抑制率。

2.2 大蒜粗提取液對(duì)貯藏期梨黑斑病的抑制

2.2.1 體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)的抑菌率。由表3可知，大蒜粗提取液在各個(gè)濃度下抑制率均大于50%。濃度為200 mL/L時(shí)抑制率最高為70.97%。

表3 大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病病斑生長(zhǎng)的影響

通過(guò)表1和表3可知，大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病菌有直接抑制作用，大蒜粗提取液體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)抑制率相比離體培養(yǎng)試驗(yàn)的抑制率降低。

2.2.2 體內(nèi)損傷接種的毒力測(cè)定。大蒜粗提取液的EC50為47.319 mg/L。

表4 大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力值

3 結(jié)論與討論

大蔥粗提取液和大蒜粗提取液對(duì)梨黑斑病的菌落生長(zhǎng)、菌絲伸長(zhǎng)和梨果實(shí)病斑擴(kuò)展均具有不同程度的抑制作用，隨著濃度的增加抑制作用越強(qiáng)。其中，對(duì)菌落生長(zhǎng)抑菌效果最好的為200mL/L大蒜粗提取液的抑制率高達(dá)90.65%，對(duì)病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為6.304mg/L。大蒜粗提取液體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)中200 mL/L的大蒜粗提取液抑菌作用最好，抑菌率為70.97%，毒力最強(qiáng)EC50為47.319mg/L。而大蔥粗提取液在試驗(yàn)所選濃度下抑制率均小于40%，抑制效果不顯著。

大蔥粗提取液的抑制效果不如大蒜粗提取液的抑制效果明顯，主要原因可能是大蔥中大蒜素其類(lèi)似物的含量不及大蒜中大蒜素的含量，或者是二者的最適溫度不同（該試驗(yàn)是在相同的溫度下進(jìn)行的）。大蔥和大蒜中能抑制梨黑斑病的有效成分及其作用環(huán)境（溫度，pH值等因素）目前尚不明確，有待深入研究。