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    豬偽狂犬病的分析診斷和防治方案

    2019-02-14 21:44:22馬向紅張新建
    飼料博覽 2019年1期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞培養(yǎng)狂犬病病豬

    馬向紅,張新建

    (河南省上蔡縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南 上蔡 463800)

    偽狂犬病又稱阿氏病,是由病毒引起的家畜和野生動物的一種惡性傳染病。豬是本病的自然宿主和貯存者,感染本病的豬,由于年齡不同,其臨床癥狀也有所差異。哺乳仔豬出現(xiàn)發(fā)熱、神經(jīng)癥狀,病死率甚高,??筛哌_(dá)100%;成年豬呈隱性感染;妊娠母豬發(fā)生流產(chǎn)。文章部分分析和闡釋了豬偽狂犬病的病原、癥狀、診斷和防治措施。

    1 病原特性

    偽狂犬病病毒呈圓形,直徑為100~150 nm,具有脂蛋白囊膜與纖突,常存在于腦脊髓組織中。感染豬在發(fā)熱期,其鼻液、唾液、奶、陰道分泌物、血液、實質(zhì)器官中都含有病毒。偽狂犬病病毒只有一個血清型,但各毒株之間存在差異。

    2 典型癥狀

    病豬的主要表現(xiàn)為體溫升高,可達(dá)41℃,精神沉郁,呼吸困難,食欲不振,嘔吐,流涎,下痢等常見癥狀。與其他動物不同,豬感染本病大多無明顯的局部瘙癢現(xiàn)象,但有的仔豬則出現(xiàn)。<2周齡的乳豬發(fā)病后多以神經(jīng)癥狀為主癥,病豬肌肉震顫,步態(tài)不穩(wěn),四肢運(yùn)動不協(xié)調(diào),眼球震顫,間歇性痙攣,后軀麻痹,有前進(jìn)或后退或轉(zhuǎn)圈等運(yùn)動,常伴有癲癇樣發(fā)作,呈現(xiàn)游泳狀姿勢及昏睡等現(xiàn)象,神經(jīng)癥狀出現(xiàn)后1~2 d內(nèi)死亡,病死率可達(dá)100%。3~4周齡乳豬感染后神經(jīng)癥狀較輕,死亡率降低。病豬的眼結(jié)膜潮紅,角膜混濁,眼瞼水腫,甚至兩眼呈閉合狀;鼻盤、口腔和顎部常見大小不一的水皰、潰瘍和結(jié)痂。剖開口腔常見扁桃體腫大并有不同程度的壞死。妊娠母豬感染時常發(fā)生流產(chǎn),產(chǎn)出死胎和木乃伊胎等。流產(chǎn)、死產(chǎn)的胎兒大小相差不顯著,無畸形胎,有時娩出的胎兒全部木乃伊化。臨床上具有明顯神經(jīng)癥狀的仔豬,剖檢大腦常見軟腦膜血管充血,水腫,出現(xiàn)非化膿性腦炎變化的特點。

    3 診斷要點

    一般根據(jù)病豬的流行特點、臨床癥狀、病理變化,特別是廣泛性非化膿性腦炎及嗜酸性包含體的檢出而初步診斷,必要時可進(jìn)行實驗室檢查予以確診。

    4 實驗室診斷

    偽狂犬病的實驗診斷,常用的方法有核內(nèi)包涵體檢查、動物接種、雞胚接種、組織細(xì)胞培養(yǎng)中和試驗、免疫熒光染色、免疫酶染色、瓊脂擴(kuò)散試驗、Dot-ELISA及酶聯(lián)免疫吸附試驗等。

    病料采集。核內(nèi)包涵體檢查:可采集脾、淋巴結(jié)、咽喉部黏膜作觸印片或石蠟切片,以H.E染色后,進(jìn)行顯微檢查。在淋巴細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)有核包涵體,即作為診斷依據(jù)??乖瓩z查:可采集病死豬或病豬發(fā)熱期腦組織(中腦、腦橋和延腦)、扁桃體、頸段脊髓。血清學(xué)檢查:可采集發(fā)病后期的血液,使其自然凝固,收取血清供檢查之用。

    試驗方法:易感動物接種試驗:從病死仔豬或發(fā)熱期病豬,以無菌手術(shù)取腦(或脊髓、心、肝、脾、腎、肺、扁桃體等)剪碎,稱重后以組織勻漿機(jī)充分研磨,以生理鹽水或pH 7.2的PBS做成10%懸浮液,同時每mL懸液中加青、鏈霉素1 000 U,置4℃冰箱中,12~14 h。以3 000 r·min-1,離心30 min,上清液即為待檢病毒液。然后以上清液接種家兔2只,每只皮下注射2.0 mL。如豬死于偽狂犬病,則在接種后48~72 h,注射部位的皮膚發(fā)癢,家兔啃咬該部皮膚,直至毛被啃光,皮被咬破,并很快死亡。中和試驗:豬感染偽狂犬病毒后,7 d開始出現(xiàn)中和抗體,14 d時中和抗體效價可達(dá)1∶128,3周后血清中和抗體達(dá)最高水平,并持續(xù)約18個月之久。試驗常在豬腎細(xì)胞培養(yǎng)物上進(jìn)行。選一株標(biāo)準(zhǔn)偽狂犬病細(xì)胞適應(yīng)毒,以每0.1 mL病毒液中含有100 TCLD50的稀釋病毒與連續(xù)作2倍稀釋的被檢血清0.1 mL混合,37℃處理(感作)1.5 h,再接種于細(xì)胞培養(yǎng)物上。每個血清稀釋度至少要接種4個細(xì)胞培養(yǎng)物,每個培養(yǎng)物接種0.2 mL??祻?fù)豬的血清常有1∶8~1∶64的中和能力。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA):用PRV抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板,以間接ELISA法檢測血清中的PRV抗體。該法簡單、快速、可靠、重復(fù)性好,比病毒中和試驗敏感。該方法,市場已有診斷試劑盒供應(yīng),按診斷試劑盒的說明使用即可。雞胚接種:病料經(jīng)絨毛尿囊膜接種9~10日齡雞,3~4 d出現(xiàn)中等大小的白色痘皰,強(qiáng)毒株可嚴(yán)重侵襲雞胎神經(jīng)系統(tǒng),致死雞胚。死胚呈彌散性出血和水腫,頭蓋骨突出。感染細(xì)胞中可檢出核內(nèi)包涵體。經(jīng)尿囊腔和卵黃囊接種,該病毒也能增殖和傳代。免疫熒光染色:取病死豬的腦或扁桃體做印片或冰凍切片,用直接免疫熒光染色檢查,??捎谏窠?jīng)元的胞體(細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核)內(nèi)看到熒光,幾小時內(nèi)即可獲得確切診斷。

    5 防治措施

    目前尚無有效的治療藥物,在緊急情況下,在病豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀之前,注射高免血清或病愈豬血液,有一定療效。但是得過病的豬,可長期攜帶病毒,應(yīng)注意隔離飼養(yǎng)。現(xiàn)在,豬被公認(rèn)為是偽狂犬病病毒的重要貯存宿主之一,因此,經(jīng)常性防控本病是非常必要的。常規(guī)預(yù)防主要包括嚴(yán)格檢疫、凈化豬群,建立無病毒豬群、消除隱性感染和定期消毒等。緊急預(yù)防時,應(yīng)及時撲殺病豬和預(yù)防接種,并采取有效措施進(jìn)行豬群凈化等工作。目前,用于預(yù)防本病的疫苗有弱毒苗、滅活苗和基因缺失苗3種??紤]到用戶的經(jīng)濟(jì)承受能力等因素,育肥用的仔豬可以使用弱毒疫苗,但在種豬群中要盡量只用滅活苗?;蛉笔绲拿庖咝Ч埠芎?,但因其價格較高,所以使用較少。

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