紅掌的組織培養(yǎng)技術(shù)

張曉英，謝炳乾，郭 偉

(陜西省苗木繁育中心，陜西 眉縣 722305)

紅掌(Anthuriumandraeanum)又稱安祖花、花燭、燈臺(tái)花、火鶴、紅鶴芋等,屬天南星科花燭屬多年生高檔室內(nèi)觀賞草本植物, 原產(chǎn)于歐洲荷蘭等地，一直受到世界各地的廣泛喜愛，曾有“花卉皇后”之稱[1]。引入我國栽培后，種苗一度依賴進(jìn)口，生產(chǎn)成本極高，為解決這個(gè)難題，陜西省苗木繁育中心自2003年就開始進(jìn)行了紅掌組培技術(shù)攻關(guān)，掌握了以葉片為外植體的組織培養(yǎng)快速繁殖關(guān)鍵技術(shù)，該技術(shù)材料來源廣，不傷害植株，短期內(nèi)可生產(chǎn)出大量?jī)?yōu)質(zhì)商品苗。生產(chǎn)的紅掌種苗已遠(yuǎn)銷全國各地，現(xiàn)就有關(guān)技術(shù)總結(jié)如下。

1 組培材料的選擇與處理

1.1 外植體的選擇

外植體來自陜西省苗木繁育中心溫室，選取株型好、花朵大、花色鮮艷、健壯無病害植株上剛展開3～5 d的新葉。取葉片時(shí)小心、不損害葉片。

1.2 外植體消毒

將取來的葉片用洗潔精洗干凈，在流水下沖洗1～2 h后，在無菌環(huán)境下，用75%的酒精浸泡30 s，然后用HgCl2溶液浸泡葉片8 min，消毒過程中不停震蕩，之后用無菌水沖洗5次，沖洗時(shí)輕輕搖動(dòng)。

1.3 愈傷組織培養(yǎng)基配置

紅掌愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，初選的激素組合及濃度配比為：①BA 1.0 mg·L-1+2,4D 0.1 mg·L-1，②BA 1.5 mg·L-1+2,4D 0.15 mg·L-1，③BA 2.0 mg·L-1+2,4D 0.2 mg·L-1；培養(yǎng)基配置時(shí)1 L激素組合中加入糖30 g、瓊脂5 g。

經(jīng)觀察，③組合有愈傷組織長(zhǎng)出，其余不明顯，所以選③組合。

1.4 接種

消毒好的葉片放到接種盤中，用消毒過的濾紙將葉片上的水吸干，然后切成0.5 cm×0.5 cm小塊并放到已做好的愈傷培養(yǎng)基中。為避免相互感染每瓶放1個(gè)外植體。

2 愈傷組織的誘導(dǎo)

接種后接種盤放到黑暗處培養(yǎng)，溫度27～30 ℃，15～20 d后葉片開始膨大，葉邊緣出現(xiàn)黃色粒狀愈傷組織，之后再繼續(xù)進(jìn)行光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度1 100～1 500 Lx，光照8～12 h·d-1，30～40 d后葉片邊緣愈傷組織增大。繼續(xù)培養(yǎng)中，將部分干死或污染的葉片淘汰；等到葉片邊緣愈傷增大到原來的2/3時(shí)，將愈傷取出放到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。

3 不定芽的誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)

3.1 不定芽的誘導(dǎo)

將培養(yǎng)2個(gè)月的葉片愈傷組織，分別轉(zhuǎn)至4種不同濃度的培養(yǎng)基中:①1/2 MS+BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1,②1/2 MS+BA 0.6 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1,③1/2 MS+BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1,④1/2 MS+ BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.25 mg·L-1；除激素及其濃度外，培養(yǎng)基配置方法與愈傷組織培養(yǎng)基相同。40～50 d后觀察愈傷已長(zhǎng)出小芽，其中③組合中小芽最多，誘導(dǎo)芽效果最好，所以選擇③組合。

3.2 芽的增殖培養(yǎng)

當(dāng)小芽長(zhǎng)到1cm時(shí)切下，放到3種芽增殖培養(yǎng)基中，① MS+ BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1，②MS+ BA 2.0 mg·L-1+IBA0.2 mg·L-1，③MS+ BA 3.0m mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1，一個(gè)月后觀察③組合效果最好，增殖系數(shù)達(dá)到300%。

增殖培養(yǎng)時(shí)，選用叢芽(3～5個(gè))帶愈傷組織的自然切塊接種方式，芽增殖效果明顯優(yōu)于單芽帶愈傷的接種方式。繼代培養(yǎng)中，隨繼代次數(shù)增加，芽增殖系數(shù)提高，當(dāng)增殖繼代6次時(shí)芽分化系數(shù)最高，6代后分化系數(shù)增加不明顯，叢芽生長(zhǎng)狀態(tài)變差。

4 誘導(dǎo)生根

接種生根時(shí)選壯苗即有三片葉子、高度1.5 cm的幼苗，接種于1/2MS+NAA0.5 mg·L-1生根培養(yǎng)基,生根率可達(dá)99%，生根質(zhì)量好；將弱苗放到復(fù)壯培養(yǎng)基中培養(yǎng)，復(fù)壯培養(yǎng)基用MS培養(yǎng)基即可，不需加激素，30 d后苗莖桿變粗，葉片變大，這時(shí)再繼續(xù)接種生根。一般接入生根培養(yǎng)基中10～15 d左右就有根長(zhǎng)出，15～20 d就達(dá)到3條根以上，根長(zhǎng)0.5～1 cm，這時(shí)就可開始煉苗，煉苗前要做好準(zhǔn)備工作(基質(zhì)的配比、消毒)。

5 移栽與煉苗

出瓶移栽前，將培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室移至溫室放置一周。這時(shí)對(duì)培養(yǎng)瓶苗適當(dāng)遮光，溫度27℃(最好是恒溫)，晚間溫度22～24 ℃，濕度70%～80%。一周后打開瓶蓋，再等待約2～3 d后從瓶中取出小苗，置于600～800倍百菌清溶液中，洗凈根部的瓊脂，將苗栽到配置好的基質(zhì)中(基質(zhì)預(yù)先用1/1000的高錳酸鉀液消毒2 h，瀝干備用)，前期小苗要遮陰，定期噴施殺菌劑(多菌靈或百菌清)護(hù)苗防病。勿施肥，大約20 d左右新根即可發(fā)育，1個(gè)月后，植株可長(zhǎng)出新葉片。這時(shí)逐步提高光照到5 000 lx，開始向正常生產(chǎn)管理過渡。煉苗成活率可達(dá)到97%以上。

實(shí)踐表明，紅掌組織培養(yǎng)周期長(zhǎng)及愈傷誘導(dǎo)，一但愈傷誘導(dǎo)出新芽后它的繁殖速度非?？欤鲋诚禂?shù)高，很快就可以達(dá)到規(guī)?；a(chǎn)，每年可生產(chǎn)生根苗300株萬上。