肝癌患者組織中非編碼微核糖核酸-375的表達情況分析

章萍

[摘要]目的 研究肝癌患者組織中非編碼微核糖核酸-375（miR-375）的表達情況。方法 選取2014年7月～2018年12月在我院進行手術切除治療的77例肝癌患者作為研究對象，提取患者癌組織標本中的非編碼微核糖核酸（miRNAs）進行考察，以癌旁正常組織作為對照。觀察肝癌組織、癌旁組織中的miR-375表達水平并進行比較。結果 77例肝癌患者的癌組織中miR-375相對表達水平低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;不同性別、年齡、肝功能Child-pugh分級、體力狀況（ECOG）評分、病灶數(shù)量、巴塞羅那（BCLC）分期肝癌組織中的miR-375相對表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。腫瘤直徑≥5 cm肝癌組織中的miR-375相對表達水平低于腫瘤直徑<5 cm，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。miR-375相對表達水平與患者的腫瘤直徑成負相關（r=-4.521，P<0.05）。結論 肝癌患者組織中miR-375的表達水平同腫瘤直徑存在密切關系。

[關鍵詞]肝癌;組織;miR-375;表達水平

[中圖分類號] R735.7 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2019）12（c）-0029-04

Expression analysis of non-coding microRNA-375 in tissues of patients with liver cancer

ZHANG Ping

Department of Pathology， the Ninth Hospital of Nanchang City， Jiangxi Province， Nanchang ? 330002， China

[Abstract] Objective To study the expression of non-coding microRNA-375 （miR-375） in tissues of patients with liver cancer. Methods Seventy-seven patients with liver cancer who underwent surgical resection in our hospital from July 2014 to December 2018 were selected as subjects in this study. The non-coding microRNAs （miRNAs） from these cancer patients were extracted. The normal tissues near to cancer ones were selected as control. The expression levels of miR-375 in liver cancer tissues and normal tissues were observed and compared. Results The relative expression level of miR-375 in the cancer tissues of 77 patients with liver cancer was lower than that in the normal tissues， the difference was statistically significant （P<0.05）. The relative expression levels of miR-375 in liver cancer tissues of different genders， age， Child-pugh liver function grading， physical status （ECOG） scores， number of lesions， and Barcelona （BCLC） stage were compared， and the differences were not statistically significant （P>0.05）. The relative expression level of miR-375 in liver cancer tissues with tumor diameter ≥5 cm was lower than that of tumor diameter <5 cm， and the difference was statistically significant （P<0.05）. The relative expression level of miR-375 was negatively correlated with tumor diameter （r=-4.521， P<0.05）. Conclusion The expression level of miR-375 in liver cancer patients is closely related to tumor diameter.

[Key words] Liver cancer; Tissue; miR-375; Expression level

肝癌是惡性腫瘤中發(fā)病率較高的一種[1]，且具有較高的惡性程度，病情發(fā)展快且治療難度大，會對患者的生命安全構成極大的威脅。非編碼微核糖核酸（microRNAs，miRNAs）是一類內源性非編碼單鏈小分子RNA[2]，其在多種生理、病理過程中，如細胞發(fā)育、增殖、分化等，均發(fā)揮著顯著作用。miRNA具有癌基因、抑癌基因的作用（可扮演癌基因和抑癌基因的角色），其參與了腫瘤的發(fā)生及發(fā)展[3]。在肝癌患者的肝細胞、外周血清中，有多種miRNA表達的改變存在，異常表達miRNA的發(fā)現(xiàn)為臨床豐富對肝癌發(fā)病機制的認識、探索新的基因靶向治療方案提供了指導[3]。另外miRNA表達同肝癌的病理類型、惡性程度、分期、分級等病理過程存在密切關系，但不同的miRNA類型在肝癌中所發(fā)揮的作用存在差異，本研究選取在我院進行手術切除治療的77例肝癌患者作為研究對象，旨在分析肝癌組織中非編碼微核糖核酸-375（miR-375）的表達情況，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2014年7月～2018年12月在我院進行手術切除治療的77例肝癌患者作為研究對象，提取患者癌組織標本中的miRNAs進行考察，以癌旁正常組織作為對照。77例肝癌患者中，男73例，女4例;年齡26～70歲，平均（43.34±2.86）歲;肝功能Child-Pugh分級：A級62例，B級15例;體力狀況（ECOG）評分：0分47例，1分22例，2分5例，3分3例;腫瘤直徑：≥5 cm 61例，<5 cm 16例;病灶數(shù)量：單發(fā)45例，多發(fā)32例;巴塞羅那（BCLC）分期：A期41例，B期17例，C期19例。

納入標準：①所有患者均經臨床評估、影像學檢查、病理檢查明確診斷為原發(fā)性肝細胞癌，存在肝炎后肝硬化病史;②所有患者均進行肝癌切除手術，術前未接受任何抗腫瘤治療;③所有患者術后自愿接受隨訪，且隨訪資料完整。排除標準：①患有繼發(fā)轉移性肝癌、惡性腫瘤的患者;②存在嚴重感染、血液系統(tǒng)疾病的患者;③處于妊娠期、哺乳期的患者。本次研究已通過醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會的批準。所有患者均自愿簽署了知情同意書。

1.2方法

1.2.1儀器、試劑盒 ?試劑盒包括miRNA提取分離試劑盒及擴增試劑盒，儀器主要包括熒光定量聚合酶鏈式反應（PCR）儀。

1.2.2肝癌組織標本中miRNA提取方法 ?采用miRNA提取分離試劑盒，按照標簽的加入量，加入無水乙醇去鹽的漂洗液（RW）、去蛋白液的漂洗液（MRD）中。注意采集的癌組織與正常肝組織應距離3 cm以上。

1.2.3檢測方法 ?應用逆轉錄和實時熒光定量PCR法進行檢測，逆轉錄miR-375、U6;逆轉錄體積為155 μl，在42℃的條件下孵育30 min，在85℃的條件下孵育5 min。之后進行實時熒光定量PCR，得到循環(huán)閾值（Ct），內參為U6，以2-ΔΔCt法計算miR-375的相對表達量。

1.3觀察指標及評價標準

觀察肝癌患者的miR-375表達情況以及臨床病理參數(shù)情況，通過相關性分析探討miR-375表達情況與臨床病理參數(shù)之間的關系。

肝功能Child-Pugh分級是一種對肝硬化患者肝臟儲備功能進行評估的分級標準，等級越高，提示患者的肝臟儲備功能越差，預后越差。ECOG評分，是從患者的體力來了解其一般健康狀況和對治療耐受能力的指標。ECOG體力狀況評分分值越低，提示患者的體力狀況越好。BCLC分期是一種肝癌臨床分期系統(tǒng)，A期是指早期，B期是指中期，C期是指晚期。

1.4統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料用均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析;采用Pearson系數(shù)進行相關性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 miR-375表達情況

77例肝癌患者的癌組織中miR-375相對表達水平為（4.50±1.38），癌旁正常組織中的miR-375表達水平為（13.67±3.52）?；颊叩陌┙M織中miR-375相對表達水平低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義（t=21.283，P=0.001）。

2.2肝癌組織miR-375表達水平與患者臨床病理參數(shù)的關系

不同性別、年齡、肝功能Child-Pugh分級、ECOG評分、病灶數(shù)量、BCLC分期肝癌組織中的miR-375相對表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。但腫瘤直徑≥5 cm肝癌組織中的miR-375相對表達水平低于腫瘤直徑<5 cm，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（表1）。

2.3 miR-375相對表達水平與肝癌腫瘤直徑的相關性分析

Pearson相關性分析結果顯示，miR-375相對表達水平與肝癌腫瘤直徑成負相關（r=-4.521，P<0.05），即miR-375相對表達水平越低，腫瘤直徑越大。

3討論

miRNAs是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內源性的、具有調控功能的非編碼RNA，其參與了各種各樣的調節(jié)途徑，包括發(fā)育、病毒防御、造血過程、器官形成、細胞增殖和凋亡、脂肪代謝等[4-6]，其通過結合靶基因3端非翻譯序列來對靶基因降解、抑制目標mRNA翻譯過程進行抑制，進而對靶基因表達進行抑制[7];其還能對絲氨酸/蘇氨酸激酶（AKT）-細胞外調節(jié)蛋白激酶（ERK）通路、促癌基因（IGF）-Ⅱ和腫瘤細胞胰島素樣生長因子受體（ICF-IR）表達等調節(jié)腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡進行調控[8-9]，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展存在密切關系。

miR-375是一種抑癌基因，其與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預后存在密切的關系[10-11]。miR-375在惡性腫瘤中呈低水平表達會促進惡性腫瘤細胞的增殖、分化、侵襲以及轉移，臨床將miR-375作為癌癥治療靶點以及判斷預后的重要標志之一[12]，在癌癥治療中具有重要意義。以往認為miR-375能夠調節(jié)胰島細胞發(fā)育和胰島素分泌，之后發(fā)現(xiàn)miR-375在消化系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、婦科、口腔等腫瘤組織中呈低表達，且均比癌旁組織中的miR-375表達水平低，少數(shù)腫瘤組織的miR-375表達水平高于癌旁組織[13]。通過分析發(fā)現(xiàn)，miR-375具有諸多的作用：①其可以抑制肝癌新生血管的生成[14]：miR-375過表達會導致新生血管管腔形成密度減少;同時減少微血管出芽數(shù)目，進而能夠對細胞的增殖、克隆形成、遷徙或侵襲能力進行抑制。②miR-375可對肝癌細胞中血小板源性生長因子（PDGFC）的表達進行抑制，miR-375過表達、下調表達可對PDGFC基因表達進行有效抑制、促進[15]。③miR-375在血小板源性生長因子非編碼端（PDGFC3′-UTR）上特異性靶位點沉默PDGFC基因上直接作用，進而對PDGFC基因表達進行抑制，且能夠抑制腫瘤細胞在低氧狀態(tài)下清除損傷的線粒體。miR-375同PDGFC基因在肝癌組織中的表達為負相關[16-17]，能夠對肝癌細胞的生長進行抑制miR-375通過靶向關鍵性的自噬相關分子抑制了低氧誘導的肝癌細胞的自噬[18-19]，并削弱其在低氧狀態(tài)下的活性，說明通過調控miR-375干預低氧狀態(tài)下肝癌細胞的自噬有望成為一種潛在的抗肝癌新策略。

本研究結果顯示，77例肝癌患者的癌組織中miR-375相對表達水平低于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示癌旁正常組織中的miR-375充分發(fā)揮了抑癌作用，可阻止腫瘤細胞血管的生成。另外本研究結果還顯示，不同性別、年齡、肝功能Child-Pugh分級、體力狀況（ECOG）評分、病灶數(shù)量、巴塞羅那（BCLC）分期的肝癌組織中的miR-375相對表達水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。腫瘤直徑≥5 cm的肝癌組織中的miR-375相對表達水平低于腫瘤直徑<5 cm，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。Pearson相關性分析結果顯示，miR-375相對表達水平與肝癌腫瘤直徑成負相關（r=-4.521，P<0.05）。這是因為miR-375水平的降低會導致腫瘤細胞的增殖、分化，無法較好地抑制腫瘤細胞向周圍正常組織侵襲、轉移，因此會增加腫瘤體積和直徑。徐曉宏等[20]在其文章中提到，miR-200a、miR-148b、miR-375在原發(fā)性肝癌組中的表達水平顯著下調，且miR-375會對p53、p21、PTEN等重要生物學途徑產生影響。本研究還發(fā)現(xiàn)，隨著乙肝表面抗原（HBsAg）表達水平的升高，miR-375表達水平會隨之下降，另外在肝癌的診斷中，血清miR-375的診斷敏感性、特異性比癌抗原19-9（CA19-9）高。結合本研究結果，可知調高miR-375表達水平有助于手術治療效果的提高，能夠有效抑制腫瘤細胞的生長，從而降低復發(fā)率;當肝癌患者體內抑癌基因miR-375表達水平降低時，可通過分子靶向治療來恢復患者體內組織的miR-375正常表達量，有助于患者生存期的延長，可將其作為腫瘤的治療靶點之一。

綜上所述，miR-375在肝癌中呈低表達水平，參與了肝癌的發(fā)生與發(fā)展，通過檢測miR-375水平，可為臨床治療、診斷、預后判斷提供有效的幫助。但本次研究中由于隨訪時間短，未對miR-375表達水平與肝癌患者生存率的關系進一步研究，有待于今后進行考察。

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（收稿日期：2019-04-19 ?本文編輯：孟慶卿）