高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用分析

河南省洛陽市食品藥品檢驗(yàn)所（471000）許俊哲

高效液相色譜作為現(xiàn)代分離分析技術(shù)，隨著自身技術(shù)實(shí)踐能力的逐步強(qiáng)化，使之在優(yōu)化改進(jìn)的前提下，在多領(lǐng)域檢驗(yàn)中取得顯著成績(jī)。再者，高效液相色譜技術(shù)存在高分離效率、分離速度快、靈敏度高、自動(dòng)化的特點(diǎn)，逐步成為藥品檢驗(yàn)的核心技術(shù)，且在該領(lǐng)域占據(jù)決定性地位。由此可見，做好高效液相色譜技術(shù)的思考，是保證藥品檢驗(yàn)工作有序施行的前提。

1 高效液相色譜技術(shù)

1.1 概念 高效液相色譜技術(shù)（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是以液體為主要流動(dòng)相，通過高壓輸液系統(tǒng)，將隔離緩沖液和混合溶劑泵入色譜柱，使其能夠完成樣品檢測(cè)的方式。目前，該種檢測(cè)技術(shù)已在多領(lǐng)域得到使用，如化學(xué)、工業(yè)和生化、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)與商檢、法檢等，檢測(cè)化學(xué)、環(huán)境化學(xué)和生物化學(xué)必不可少的技術(shù)手段。

1.2 特點(diǎn) 對(duì)于高效液相色譜技術(shù)而言，呈現(xiàn)“三高、一廣、一快”的特點(diǎn)。即“三高”：高壓，流動(dòng)相以液體為主，若要保證快速流經(jīng)色譜柱，則應(yīng)施以加高壓處理；高效，分離效能相對(duì)較高，通過對(duì)流動(dòng)相、固定相的選擇，起到分離效果；高靈敏度，可達(dá)到0.01ng，樣品量滿足μL數(shù)量級(jí)。“一廣”：范圍廣，70%以上有機(jī)化合物均可施以高效液相色譜檢驗(yàn)?！耙豢臁保悍治隹旌洼d液快，常規(guī)情況下樣品分析時(shí)間約在15～30min，個(gè)別樣品則可在5min內(nèi)完成，但最長(zhǎng)不超過60min[1]。

1.3 構(gòu)成 高效液相色譜儀由高壓輸液泵、色譜柱、進(jìn)樣器、檢測(cè)器和餾分收集器構(gòu)成。即高壓輸液泵主要用于樣品、流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)，使其能夠通過色譜柱，包含往復(fù)泵及隔膜泵兩種；色譜柱是對(duì)樣品各物質(zhì)的分析，長(zhǎng)度約為10～30cm，內(nèi)徑約為2～5mm；進(jìn)樣器是將樣品泵入色譜系統(tǒng)的裝置，包含注射器、停留進(jìn)樣和閥進(jìn)樣、自動(dòng)進(jìn)樣器等；檢測(cè)器是將流出液濃度轉(zhuǎn)變?yōu)殡妼W(xué)信號(hào)、化學(xué)信號(hào)，涉及種類相對(duì)較多，如電化學(xué)和熒光檢測(cè)器；餾分收集器是對(duì)檢測(cè)器內(nèi)信號(hào)予以直觀顯示的裝置。

2 高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

2.1 藥品含量 由于高效液相色譜技術(shù)具有高分辨率、分析速度快的特點(diǎn)，可對(duì)樣品予以重復(fù)測(cè)定，且樣品檢測(cè)量相對(duì)極少，在藥品含量檢驗(yàn)中尤為常見。目前，國(guó)內(nèi)施行的《中國(guó)藥典》（2010年版）中關(guān)于高效液相色譜技術(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，和2005年版增加359個(gè)，即為694個(gè)。但《美國(guó)藥典》內(nèi)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)則高達(dá)2000余個(gè)。此外，在維生素E、維生素D3、維生素K1等藥物含量檢驗(yàn)中，若施以高效液相色譜一次測(cè)定，則可通過和2種及其以上檢測(cè)器間的串聯(lián)，將其含量予以精準(zhǔn)測(cè)定。而四環(huán)素作為廣譜抗菌藥，以較強(qiáng)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在藥品、食品添加劑等領(lǐng)域較為常見，有效的高效液相色譜技術(shù)可精準(zhǔn)實(shí)現(xiàn)對(duì)其含量的測(cè)定[2]。

2.2 有關(guān)物質(zhì) 現(xiàn)階段，藥品檢驗(yàn)中有關(guān)物質(zhì)的檢查標(biāo)準(zhǔn)愈發(fā)嚴(yán)格，即在藥物合成直至使用，需要經(jīng)過漫長(zhǎng)的時(shí)間，而若在此環(huán)節(jié)滋生有關(guān)物質(zhì)，則必將會(huì)在降低藥物效果的同時(shí)，引起機(jī)體安全問題。藥品生產(chǎn)期間，有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)許控制在標(biāo)準(zhǔn)劑量?jī)?nèi)，但仍以低毒性或無害為主導(dǎo)，以免對(duì)機(jī)體造成不良后果。原料核中間體作為有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)的對(duì)象，如氫溴酸東茛菪堿、丁溴東莨菪堿等莨菪堿，輔之外標(biāo)法檢驗(yàn)，保證2倍對(duì)照液峰面積＜各雜質(zhì)峰面積總和。此外，在卡馬西平等物質(zhì)檢驗(yàn)中，高效液相色譜技術(shù)的使用，可借助對(duì)高含量雜質(zhì)的改變，預(yù)防相似藥物的紫外線對(duì)光譜予以吸收，以便提高檢驗(yàn)的精確度。

2.3 中藥成分 常規(guī)情況下，成方制劑中藥成分相對(duì)較多，而有效的化學(xué)成本分解手段，可便于其結(jié)構(gòu)的確定。同時(shí)，中藥作為相對(duì)復(fù)雜的體系，呈現(xiàn)平整性、整體性和多效性的特點(diǎn)，特別是在疑難雜癥救治中，中藥以自身獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，配伍諸多中藥成分，使藥效達(dá)至最佳狀態(tài)。然而，也正是由于配伍中藥較多，致使其化學(xué)成分相對(duì)復(fù)雜，若仍使用傳統(tǒng)成分分析技術(shù)，則難以對(duì)中藥成分予以分類測(cè)定。而高效液相色譜技術(shù)的選擇，能夠在彌補(bǔ)傳統(tǒng)成分分析技術(shù)缺陷的同時(shí)，提高中藥成分檢驗(yàn)質(zhì)量。

綜上所述，高效液相色譜技術(shù)以高靈敏性、高專屬性的優(yōu)勢(shì)，使其在藥物分離、成分定性和定量分析中得以廣泛使用。特別是在科技水平逐步發(fā)展的背景下，高效液相色譜技術(shù)也在快速完善，不僅可滿足藥品自動(dòng)化檢驗(yàn)的目的，還可在藥品鑒別、成分測(cè)定和有關(guān)物質(zhì)檢查等領(lǐng)域取得優(yōu)異成績(jī)，為藥品檢驗(yàn)工作的施行創(chuàng)造條件。