組織固定處理與包埋常見問題對策

張換平

【摘要】病理學(xué)組織檢查作為疾病診斷的重要方法，同時也是制定手術(shù)方案的重要依據(jù)。石蠟切片屬于使用較為廣泛的組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)，整個制作過程包括了取材、固定、脫水等多個步驟，每一個步驟的操作均會影響到最終結(jié)果。本文主要探討組織固定處理與包埋常見問題，全文從組織固定、組織包埋、包埋和標(biāo)本定位等方面進行分析。

【關(guān)鍵詞】組織固定處理;包埋;常見問題;對策研究

【中圖分類號】R36 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2019.28..02

石蠟切片作為使用較為頻繁的病理診斷技術(shù)，組織固定是組織脫水、透明、浸蠟等相關(guān)處理的前提，也是較為關(guān)鍵的一個步驟，與此同時，包埋操作的規(guī)范化與否會影響到組織切片質(zhì)量。基于此，本文通過對組織固定處理與包埋常見問題以及對策分析，便于保證石蠟切片質(zhì)量以及病理診斷結(jié)果，保證病理診斷質(zhì)量，從而為臨床診治提供依據(jù)，相關(guān)內(nèi)容分析如下。

1 組織固定問題

組織固定是為了較好的保存組織，實際組織標(biāo)本固定期間，獲取的標(biāo)本需要最大程度保證其原有形態(tài)，比如條索狀標(biāo)本、大塊標(biāo)本等，組織固定期間避免造成原有組織出現(xiàn)扭曲。

標(biāo)本固定過程中使用最多的是10%中性緩沖福爾馬林，這與10%中性緩沖福爾馬林的使用特點有著密切關(guān)系，如10%中性緩沖福爾馬林具有穿透速度快、組織硬化程度小等優(yōu)勢，這些都保證了不同標(biāo)本有良好的固定效果。臨床研究顯示，病理組織通過10%中性緩沖福爾馬林固定，病理組織能夠保存較長時間，比如：病理組織的細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)均保存良好[1]，多數(shù)也可進行免疫組化染色。

組織固定過程中，部分人員在使用自動化儀器設(shè)備過程中，參數(shù)設(shè)置不合理，影響到標(biāo)本在固定液中的停留時間，影響到組織標(biāo)本實際固定效果。部分標(biāo)本選擇戊二醛、Helly等作為固定液，上述標(biāo)本在固定液中停留時間過長會引起固定過度，影響到標(biāo)本固定效果。

2 組織包埋問題

組織處理涉及到脫水、透明以及浸透操作，有效的組織脫水能夠避免脫水不徹底以及透明不夠問題，為不同組織切片提供良好條件。

當(dāng)前組織處理常用方法包括開放式與密閉式，由于開放式處理期間需要將標(biāo)本從一個液體槽轉(zhuǎn)移到另一個液體槽，整個操作存在安全風(fēng)險，密閉式管理則能夠避免上述問題，提高組織處理的安全性，避免人為操作以及環(huán)境對其影響。當(dāng)然密閉式處理方法也存在不足，比如部分儀器設(shè)備無法使用部分液體，此外，活檢小標(biāo)本處理期間很容易造成富含脂肪組織、手術(shù)標(biāo)本、活檢小標(biāo)本出現(xiàn)混合，影響到處理效果。

組織處理期間需要保持環(huán)境的清潔，固定液需要及時更換，確保工作液面的可靠性，有標(biāo)本的包埋盒應(yīng)集中管理，便于控制整體標(biāo)本處理質(zhì)量;浸透石蠟溫度需要超過石蠟熔點2～4℃，做好溫度的測量與記錄，避免溫度過高或過低影響到組織處理效果，不利于后期切片。

病理組織包埋期間，針對脫水不徹底問題，在使用乙醇作為脫水劑期間，如果時間允許，可選擇低濃度乙醇進行多次處理，避免組織脫水過度問題;如果時間不允許，可使用95%乙醇，然后使用無水乙醇脫水，當(dāng)前使用乙醇脫水方面，乙醇初期濃度控制在60%～65%，之后95%乙醇換2次，無水乙醇換2次。組織脫水期間應(yīng)避免使用高濃度乙醇處理，同時應(yīng)嚴(yán)格控制標(biāo)本停留時間，避免組織出現(xiàn)扭曲以及硬度過大問題，不利于切片操作[2]。

針對透明切片著色均勻度較差問題，考慮有水分混入浸透蠟液中，在乳頭狀瘤、胃、皮膚等小標(biāo)本處理期間，需要注意上述問題，此時可合理選擇透明劑，比如將二甲苯更換為甲苯。

3 包埋和標(biāo)本定位問題

包埋的期間需要采取有效的質(zhì)控措施，如堅持包埋蠟塊總數(shù)、包埋盒內(nèi)組織的每天記錄與核對，染色結(jié)束后核對蠟塊數(shù)、切片數(shù)，檢查不同切片、蠟塊以及患者紀(jì)錄是否一致，避免切片與標(biāo)本來源的不一致，重視包埋期間的各項檢查。

組織包埋期間很容易出現(xiàn)切片組織損壞問題，比如組織排列方向不合理、組織擺放不合理等，對此，應(yīng)重視組織定位以及方向包埋管理，如對較大而平的組織，包埋定位期間需要保證最大最平組織面朝下同時進入到包埋模內(nèi);可用模式對特殊組織面進行標(biāo)識，提高包埋定期的準(zhǔn)確性，提高標(biāo)本包埋操作的合理性。

包埋期間需要根據(jù)合適的不銹鋼模型，包埋盒內(nèi)組織在取出時，需要使用干凈的熱鑷子，所有組織均需要放置到模型底部，確保組織和蠟液的充分融合，組織標(biāo)本在有序排列后需要將模型移動到冷臺，觀察并在組織埋平后及時蓋上包埋盒，并注入蠟液，大約等待10～15 s，再次補充少量蠟液，提高整個包埋盒固定質(zhì)量，消除后續(xù)切片中因固定問題引起的震顫。包埋組織使用塑料包埋盒時，需要根據(jù)情況實施二次加蠟，提高整個包埋處理穩(wěn)固性，消除切片期間因為固定不可靠引起的蠟塊脫落問題;二次加蠟需要控制用量，避免過多蠟液影響切片質(zhì)量[3]。

4 小 結(jié)

石蠟組織固定以及切片過程中會受到較多因素影響，實際處理期間需要重視組織固定處理以包埋中存在的問題，并及時采取因?qū)Υ胧?，提高不同組織病理學(xué)檢查與操作的規(guī)范性，提高切片質(zhì)量，便于對不同病理組織作出有效診斷。

參考文獻(xiàn)

[1] 嚴(yán)曉麗，杜夢楠，鄭紀(jì)寧.石蠟包埋組織在分子生物學(xué)實驗中的研究進展[J].中國老年學(xué)雜志，2018，38（22）：5617-5620.

[2] 呂葉輝，李志宏，劉 麗，等.人體腦組織福爾馬林固定石蠟包埋樣本中長鏈非編碼RNA的提取及定量分析方法[J].上海交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2018，38（04）：400-406.

[3] 張 燕，肖皓亮，周映輝，等.不同固定和包埋方法對大鼠骨組織免疫組化結(jié)果的影響[J].中華骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病雜志，2017，10（06）：557-560.

本文編輯：趙小龍