蜂王漿主蛋白對圍絕經(jīng)期小鼠生殖功能的保護(hù)作用

劉欣，陳勇，沈立榮

（浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院，馥莉食品科學(xué)研究院，浙江省農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州310058）

圍絕經(jīng)期俗稱“更年期”，是女性由生育期過渡到老年期的重要的生理變化階段。圍絕經(jīng)期綜合征（perimenopause syndrome,PMS）是女性在絕經(jīng)前后因卵巢功能衰退、體內(nèi)雌激素水平劇烈下降而引發(fā)的一系列以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主的癥候群[1]。圍絕經(jīng)期綜合征往往伴隨潮熱出汗、心慌氣短、疲憊乏力、健忘、失眠焦躁等體征[2]，還可能會有明顯的心理障礙，同時(shí)，患骨質(zhì)疏松、心血管疾病和老年癡呆等慢性疾病的可能性也會增加，嚴(yán)重影響女性的身心健康和生活質(zhì)量。隨著我國人口老齡化程度不斷加深，進(jìn)入圍絕經(jīng)期的女性人數(shù)呈現(xiàn)上升的趨勢，80%以上的婦女在此期間會表現(xiàn)出明顯的不適癥狀，而其中10%～30%的婦女會出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀[3]。因此，防治圍絕經(jīng)期綜合征對改善女性的身心健康具有重要意義。

在臨床醫(yī)學(xué)中，通常采用激素替代療法（hormone replacement therapy, HRT）來提高女性體內(nèi)雌激素的水平，從而緩解圍絕經(jīng)期綜合征。HRT主要通過補(bǔ)充外源激素來彌補(bǔ)原機(jī)體激素分泌的不足，以改善圍絕經(jīng)期婦女內(nèi)分泌狀況，延緩衰老[4]。雖然HRT 認(rèn)可度較高，但其不良反應(yīng)不容忽視[5]。有研究報(bào)道稱，HRT 可能會增加乳腺癌和卵巢癌[6-7]等婦科腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，因而在臨床應(yīng)用中受到一定的限制。因此，研究和開發(fā)更加安全有效的、具有雌激素效應(yīng)的天然替代品很有必要。

蜂王漿是蜜蜂（Apis mellifera）中哺育工蜂咽下腺、上顎腺和腦后腺等分泌的供蜂王和3 日齡內(nèi)的工蜂幼蟲食用的乳白色或淡黃色漿狀物質(zhì)[8]，作為純天然的保健品，它具有豐富的營養(yǎng)成分和生物活性。國內(nèi)外很多研究已表明，蜂王漿具有抗疲勞[9]、抗菌[10]、抗炎[11]、改善糖尿病癥狀[12]、抗衰老[13]、抗氧化[14]、免疫調(diào)節(jié)[15]等諸多功效。蜂王漿干物質(zhì)中王漿蛋白約占50%，王漿蛋白分為水溶性蛋白和非水溶性蛋白，其中82%～90%的水溶性蛋白屬于主蛋白（major royal jelly proteins, MRJPs）[16]。日本學(xué)者KAMAKURA研究證實(shí)，占MRJPs近50%的MRJP1是決定雌性蜜蜂幼蟲發(fā)育成為蜂王的關(guān)鍵因素[17]。但因王漿蛋白和王漿凍干粉在常溫下容易降解，需要在-18 ℃條件下保存，為克服這一缺陷，近年來本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)了采用超濾和凍干工藝分離制備MRJPs凍干粉的方法[18]。MRJPs凍干粉具有性質(zhì)穩(wěn)定、不需要超低溫冷凍保存的優(yōu)點(diǎn)[19]。我們經(jīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了MRJPs的主要生物活性，如對果蠅具有抗衰老作用[20]，可增強(qiáng)衰老大鼠的記憶力[21]，并可部分替代胎牛血清培養(yǎng)人體和昆蟲細(xì)胞[22]等。有關(guān)蜂王漿的類雌激素活性研究[23]日益受到關(guān)注，但關(guān)于蜂王漿中具體活性成分對女性生殖內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)作用還未見報(bào)道。為此，我們從激素分泌水平和形態(tài)學(xué)角度來評估蜂王漿中的活性蛋白MRJPs對自然衰老的圍絕經(jīng)期雌性小鼠生殖功能的影響，探索其對圍絕經(jīng)期綜合征的作用機(jī)制，以期為MRJPs 作為功能食品應(yīng)用于女性圍絕經(jīng)期綜合征的預(yù)防和改善提供相關(guān)的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物

11～13 月齡健康雌性ICR 小鼠50 只，清潔級，體質(zhì)量（42±4）g；5月齡青年小鼠10只，體質(zhì)量（33±1）g，由浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。按照每籠5只飼養(yǎng)于浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，基礎(chǔ)飼料為不含MRJPs的普通標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由采食和飲水。動物實(shí)驗(yàn)均征得浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會同意（ZJU20190004）。

1.1.2 主要試劑

蜂王漿主蛋白凍干粉由本實(shí)驗(yàn)室與杭州碧于天保健食品有限公司合作提供。MRJPs 的制備方法：將新鮮的蜂王漿用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline,PBS）溶解，并用超濾裝置過濾（該裝置由2種截留分子質(zhì)量的濾膜組成，其中：分子質(zhì)量為1×105的濾膜用于去除大分子雜質(zhì)，而分子質(zhì)量為4.9×104的濾膜用于留住MRJPs）。超濾得到的蛋白質(zhì)濃縮液經(jīng)過真空冷凍干燥后得到凍干粉，于-80 ℃低溫冰箱中保存[19]。

酪蛋白（美國Sigma 公司）；雌二醇（estradiol,E2）、孕酮（progesterone, P）、促卵泡生成素（folliclestimulating hormone, FSH）和促黃體生成素（luteinizing hormone,LH）放射免疫試劑盒（北京北方生物科技研究所）；Trizol 試劑、反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑盒（日本TaKaRa 公司）；其他均為國產(chǎn)分析純試劑。

1.1.3 儀器

ABI System ViiATM7 型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀（美國賽默飛世爾科技公司）；SW-CJ-1FD 型超凈工作臺（江蘇省蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；NanoDrop 1000分光光度計(jì)、BS124S型電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]；5415R 型冷凍離心機(jī)（艾本德中國公司）；超低溫冰箱（日本松下公司）；HM355型輪轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)（德國Micro公司）；E100型攝像顯微鏡（日本尼康公司）。

1.2 方法

1.2.1 圍絕經(jīng)期小鼠模型的構(gòu)建

本實(shí)驗(yàn)采用自然衰老的雌性小鼠作為圍絕經(jīng)期模型。選取11～13月齡的雌性ICR小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，然后進(jìn)行陰道上皮細(xì)胞角化試驗(yàn)。具體操作為：左手背位固定小鼠，右手持吸管，吸管內(nèi)預(yù)先吸入0.1～0.2 mL 的生理鹽水。將吸管緩慢輕輕地插入小鼠的陰道內(nèi)，反復(fù)抽吸2～3 次，然后將抽取的吸液滴于提前備好的載玻片上。滴加95%的乙醇溶液，干后用1%的亞甲藍(lán)染液染色10 min，用水沖洗掉多余的染液，風(fēng)干后將載玻片置于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查，連續(xù)觀察15 d。由于小鼠的正常動情周期一般為4～5 d，分為動情前期、動情期、動情后期和動情間期[24]，因此，將陰道細(xì)胞涂片呈現(xiàn)動情周期紊亂、動情間期延長的小鼠作為圍絕經(jīng)期模型。

1.2.2 分組與給藥

將造模成功的圍絕經(jīng)期模型雌性小鼠隨機(jī)分為5 組（每組10 只）：老年模型組、MRJPs 低劑量組（125 mg/kg MRJPs，M125）、MRJPs 中劑量組（250 mg/kg MRJPs，M250）、MRJPs 高劑量組（500 mg/kg MRJPs，M500）和陽性對照組（125 mg/kg 酪蛋白）；另選10只5月齡左右的、陰道細(xì)胞學(xué)檢查表現(xiàn)出規(guī)律的4～5 d動情周期，且周期的各個(gè)階段都符合正常規(guī)律的雌性小鼠作為青年對照組。老年模型組和青年對照組均給予生理鹽水。每日灌胃1 次，連續(xù)灌胃7周。在此期間，每日觀察并記錄小鼠活動、外觀、糞便等情況。

1.2.3 體質(zhì)量測定

從實(shí)驗(yàn)開始，每7 d 用電子天平稱量各組小鼠的體質(zhì)量并記錄，每次稱量均選擇早晨同時(shí)間段進(jìn)行，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.2.4 子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)測定

末次灌胃24 h 后，稱量小鼠體質(zhì)量，并統(tǒng)一于動情間期進(jìn)行靜脈注射麻醉，脫頸處死，然后在低溫下迅速解剖，分離子宮和卵巢，剔除組織黏附的脂肪和筋膜，經(jīng)生理鹽水沖洗、濾紙吸干后用電子天平稱量子宮和卵巢質(zhì)量。最后將左側(cè)部分于液氮中速凍，再轉(zhuǎn)入-80 ℃冰箱中低溫保存，右側(cè)部分固定于10%的多聚甲醛中。子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)計(jì)算公式如下。

子宮指數(shù)/（mg/g）=子宮濕質(zhì)量/mg÷體質(zhì)量/g；

卵巢指數(shù)/（mg/g）=卵巢濕質(zhì)量/mg÷體質(zhì)量/g。

1.2.5 血清激素測定

將小鼠麻醉后，采用摘除眼球的方式采集血樣，并于4 ℃條件下孵育2 h，然后以3 000 r/min 離心10 min，從全血中分離得到血清，置于-20 ℃低溫冰箱中保存。血清激素含量的測定嚴(yán)格按照放射免疫試劑盒說明書實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行。所測血清激素包括雌二醇（E2）、孕酮（P）、促卵泡生成素（FSH）和促黃體生成素（LH）。

對末次灌胃24 h 后取出的子宮分成左右2 段，靠近右側(cè)卵巢部分經(jīng)10%多聚甲醛固定后，制成石蠟切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色，然后在光學(xué)顯微鏡下用測微尺測量子宮內(nèi)膜的平均厚度。

1.2.7 卵巢激素受體基因mRNA 的表達(dá)檢測

采用Trizol 法提取卵巢和子宮組織的總RNA，然后參照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書（日本TaKaRa公司）將總RNA 樣品反轉(zhuǎn)錄成cDNA 模板。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增條件：95 ℃變性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min。引物由武漢賽維爾生物科技有限公司合成，引物序列信息見表1。

表1 引物序列信息Table 1 Information of primer sequences

1.2.8 組織形態(tài)學(xué)觀察

將固定在10%多聚甲醛中的小鼠卵巢和子宮用石蠟包埋，切片，取最大縱切面，進(jìn)行HE染色，然后在光學(xué)顯微鏡下觀察卵巢和子宮的組織形態(tài)。

1.2.9 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

在長期不對稱負(fù)荷和突然不對稱短路工況下，響水澗發(fā)電電動機(jī)的阻尼繞組溫升計(jì)算值在運(yùn)行實(shí)踐和經(jīng)驗(yàn)范圍內(nèi)，并具有一定的裕度，滿足安全可靠運(yùn)行要求。

用Excel 2016 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理并繪圖，用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間差異顯著性比較采用單因素方差分析（one-way analysis of variance,ANOVA）。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRJPs 對小鼠體質(zhì)量的影響

由圖1可見，經(jīng)MRJPs干預(yù)7周后，青年對照組小鼠體質(zhì)量略有所增加，其余各組小鼠的體質(zhì)量均未出現(xiàn)明顯的變化，且各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

圖1 MRJPs對小鼠體質(zhì)量的影響Fig.1 Effects of supplemental MRJPs on body mass of mice

2.2 MRJPs 對小鼠卵巢指數(shù)和子宮指數(shù)的影響

由表2可見：與青年對照組相比，老年模型組小鼠的子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)均顯著下降（P＜0.05）。與老年模型組相比，MRJPs中劑量和高劑量組小鼠的子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)均顯著上升（P＜0.05），給予酪蛋白的陽性對照組則無顯著變化。

表2 MRJPs對小鼠卵巢指數(shù)和子宮指數(shù)的影響Table 2 Effects of supplemental MRJPs on the ovarian index and uterine index of mice mg/g

2.3 MRJPs 對小鼠血清激素水平的影響

由表3可見：與青年對照組相比，老年模型組小鼠血清中E2和P的含量均顯著下降（P＜0.05），F(xiàn)SH和LH 的含量顯著上升，符合圍絕經(jīng)期雌性小鼠體內(nèi)激素變化規(guī)律。而相對于老年模型組，MRJPs可提高小鼠血清中E2和P的水平（P＜0.05），降低血清中FSH 和LH 的水平（P＜0.05），并且表現(xiàn)出一定的劑量依賴性。由此可見，MRJPs對圍絕經(jīng)期雌鼠的激素水平具有雙向調(diào)節(jié)作用。

表3 MRJPs對小鼠血清激素水平的影響Table 3 Effects of supplemental MRJPs on the serum hormone levels of mice

2.4 MRJPs 對小鼠子宮內(nèi)膜厚度的影響

由圖2可見：與青年對照組相比，老年模型組小鼠子宮內(nèi)膜厚度顯著減?。≒＜0.05）。相對于老年模型組，MRJPs各劑量組小鼠子宮內(nèi)膜厚度均有明顯增加（P＜0.05）。

圖2 MRJPs對小鼠子宮內(nèi)膜厚度的影響Fig.2 Effects of supplemental MRJPs on the endometrial thickness of mice

2.5 卵巢中主要性激素受體基因的相對表達(dá)量

由圖3可見：小鼠灌胃7周后，與老年模型組相比，MRJPs各劑量組小鼠卵巢組織中雌激素受體基因ERα和孕激素受體基因PR的表達(dá)量均顯著升高（P＜0.05）；而與老年模型組相比，MRJPs低、中劑量組的雌激素受體基因ERβ的表達(dá)量稍有升高，高劑量組的ERβ表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。

2.6 組織形態(tài)學(xué)觀察

在光學(xué)顯微鏡下對各組小鼠卵巢進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，結(jié)果見圖4。1）青年對照組：可見較多的各級生長卵泡（包括成熟卵泡）以及黃體，卵泡形態(tài)大小各異，不少卵泡內(nèi)清晰可見卵泡、卵泡液、卵丘；卵泡內(nèi)初級卵母細(xì)胞大而圓，輪廓清晰，胞質(zhì)著色清淡均勻，透明帶著色稍深，與其周圍的卵泡細(xì)胞界線分明；卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞呈多層，核位于中央，呈空泡狀，核液清亮，核仁清晰可見（圖4A）。2）老年模型組：卵巢體明顯萎縮，發(fā)育受阻且較差，卵泡生長少，未見成熟卵泡，部分被纖維組織所代替；黃體數(shù)量少，閉鎖卵泡數(shù)量多（圖4B）。3）MRJPs 各劑量組：與老年模型組相比，MRJPs 各劑量組的卵巢發(fā)育較好，卵泡生長活躍，卵泡液豐富，原始卵泡和生長卵泡數(shù)量均有所增多；偶見成熟卵泡，皮質(zhì)、髓質(zhì)層次分明，顆粒細(xì)胞層次較多且排列整齊；黃體可見且生長良好，閉鎖卵泡數(shù)量有所減少（圖4C～E）。

3 討論

女性生殖內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)是通過下丘腦-垂體-卵巢軸（hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA）所構(gòu)成的復(fù)雜的反饋系統(tǒng)來進(jìn)行的。下丘腦通過分泌促性腺激素釋放激素（GnRH）來促進(jìn)垂體活動和分泌FSH 和LH?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，卵巢功能衰退[25]導(dǎo)致的激素分泌水平顯著降低是引發(fā)圍絕經(jīng)期綜合征的主要原因。由于卵巢分泌的雌激素和孕激素減少，進(jìn)而解除了雌激素對于下丘腦-垂體的負(fù)反饋抑制作用，使下丘腦-垂體-卵巢軸間的平衡失調(diào)，從而FSH和LH分泌量有代償性增加，抑制卵泡的發(fā)育和卵子的生長，加速卵泡凋亡和閉鎖，影響下丘腦-垂體調(diào)節(jié)機(jī)制及其他內(nèi)分泌腺（如甲狀腺、腎上腺）與垂體間的平衡關(guān)系，并干擾大腦皮層與自主神經(jīng)系統(tǒng)的功能，從而產(chǎn)生各種臨床表現(xiàn)及代謝紊亂。

圖3 MRJPs 對小鼠卵巢中ERα、ERβ 和PR 基因相對表達(dá)量的影響Fig.3 Effects of supplemental MRJPs on the relative expression of ERα,ERβ and PR in ovaries of mice

圖4 小鼠卵巢組織形態(tài)的HE染色觀察Fig.4 Histomorphological observation of ovaries in mice byHE staining

以往研究報(bào)道表明，蜂王漿具有類雌激素效應(yīng)。SALEM[26]研究發(fā)現(xiàn)：蜂王漿可作用于多個(gè)靶點(diǎn)，通過促進(jìn)5-羥色胺和多巴胺分泌調(diào)節(jié)下丘腦神經(jīng)元功能；通過觀察模擬女性表現(xiàn)癥狀的去卵巢大鼠發(fā)現(xiàn)，蜂王漿可改善絕經(jīng)后大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的功能。HIDAKA等[27]通過卵巢切除大鼠模型和骨組織培養(yǎng)模型研究，證明了蜂王漿對因大鼠卵巢切除術(shù)引起的骨質(zhì)流失的預(yù)防功效與17β-雌二醇幾乎相同。但近年來相關(guān)研究證明，蜂王漿的激素含量明顯低于一般動物性食品性激素含量100 ng/g的檢測下限標(biāo)準(zhǔn)，處于痕量水平[28]。因此，推測認(rèn)為蜂王漿的類激素活性并非由蜂王漿本身所含的激素所致，而是由其活性蛋白成分產(chǎn)生的。

本實(shí)驗(yàn)選用了11～13月齡的雌性小鼠，并通過連續(xù)陰道細(xì)胞學(xué)觀察，選取動情周期出現(xiàn)延長及紊亂表現(xiàn)的小鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，符合圍絕經(jīng)期動物模型的陰道細(xì)胞學(xué)篩選要求。由衰老小鼠的血清激素水平檢測結(jié)果可見，老年模型組小鼠血清中E2和P 水平顯著降低，F(xiàn)SH 和LH 水平明顯升高（P＜0.05），與以往對人體自然衰老研究報(bào)道的激素水平變化[29]一致，證明本文構(gòu)建的圍絕經(jīng)期衰老模型是成功的。

子宮指數(shù)是評價(jià)受試對象雌激素效應(yīng)的常用指標(biāo)，與體內(nèi)雌激素水平呈正相關(guān)關(guān)系。子宮增重試驗(yàn)是用來測試雌激素活性的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法。子宮組織內(nèi)含有大量的雌激素受體，具有雌激素活性的物質(zhì)在小鼠體內(nèi)經(jīng)過代謝產(chǎn)生活性物質(zhì)并與受體結(jié)合，從而激活雌激素應(yīng)答元件，誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)相關(guān)的反應(yīng)，增加靶蛋白的表達(dá)，使子宮重量增加。本研究結(jié)果顯示，與老年模型相比較，補(bǔ)充MRJPs可以提高圍絕經(jīng)期小鼠的子宮指數(shù)，這與雌激素含量上升和內(nèi)膜增生密切相關(guān)。與此同時(shí)，與老年模型組相比，MRJPs各劑量組小鼠的卵巢指數(shù)也呈現(xiàn)出顯著上升的趨勢，這可能與MRJPs促進(jìn)卵巢中卵泡的發(fā)育和生長有關(guān)。已經(jīng)有相關(guān)報(bào)道證明，MRJPs不但可以顯著促進(jìn)大鼠肝細(xì)胞DNA的合成，增加白蛋白的合成量，還可以促進(jìn)人體單核細(xì)胞的增殖，以及促進(jìn)鼠科動物3T3-F442A前脂肪細(xì)胞的增殖以實(shí)現(xiàn)成熟脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)化[30-31]。

FSH 和LH 主要作用于卵巢，促進(jìn)卵泡的發(fā)育成熟，受下丘腦促性腺激素釋放激素及卵巢雌激素的共同協(xié)同作用的調(diào)控。女性進(jìn)入圍絕經(jīng)期后，由于卵巢功能衰退，內(nèi)分泌功能下降，雌激素分泌減少，進(jìn)而解除了雌激素對于垂體的負(fù)反饋?zhàn)饔?，?dǎo)致FSH 和LH 的含量升高，對卵泡的發(fā)育和卵子的生長產(chǎn)生抑制作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，用MRJPs連續(xù)灌胃7 周后，血清中E2和P 的含量較老年模型組明顯升高，F(xiàn)SH 和LH 的含量顯著降低。表明MRJPs 對圍絕經(jīng)期小鼠激素水平具有雙向調(diào)節(jié)作用，可明顯調(diào)節(jié)衰老小鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的失衡狀態(tài)，為今后MRJPs和蜂王漿應(yīng)用于預(yù)防和改善圍絕經(jīng)期綜合征提供了科學(xué)依據(jù)。

激素活性是通過受體介導(dǎo)的，但是激素受體功能的發(fā)揮受多種因素調(diào)節(jié)，包括協(xié)同調(diào)節(jié)因子、蛋白翻譯后修飾、受體基因轉(zhuǎn)錄水平等。雌激素的生理作用主要由ERα和ERβ受體亞型介導(dǎo)。本研究結(jié)果顯示，MRJPs 中、高劑量組小鼠卵巢中ERα和ERβ的mRNA 表達(dá)量均顯著增加，一方面可能是E2水平增加促進(jìn)了雌激素受體的活化，另一方面也可能是MRJPs 直接作用于不依賴于雌激素受體活化的磷酸化過程，因有研究表明，存在一些信號通路可以不通過激素來激活雌激素受體[32]。MISHIMA等[33]通過體外實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)，蜂王漿能夠以濃度依賴的方式抑制E2與雌激素受體（ERs）的結(jié)合，而與受體ERα和ERβ競爭性結(jié)合來調(diào)節(jié)雌激素敏感基因的表達(dá)，從而產(chǎn)生雌激素樣作用。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷，MRJPs 活化了雌激素受體基因的表達(dá)，從而促進(jìn)了血清中雌激素含量的增加。但對引起雌激素受體表達(dá)量顯著增加的分子機(jī)制目前尚不清楚，仍需進(jìn)一步研究。

通過觀察衰老小鼠卵巢和子宮的組織切片，發(fā)現(xiàn)閉鎖卵泡數(shù)目多，黃體和成熟卵泡較少，而在MRJPs各劑量組中可見黃體數(shù)目呈現(xiàn)增多趨勢，且發(fā)育良好，閉鎖卵泡較少，各級卵泡清晰可見，說明MRJPs對促進(jìn)卵泡發(fā)育、減緩卵巢功能衰退有一定的保護(hù)作用。

4 結(jié)語

本研究驗(yàn)證了MRJPs 作為蜂王漿發(fā)揮類雌激素效應(yīng)的主要活性成分的有效性，為蜂王漿和MRJPs應(yīng)用于延緩生殖系統(tǒng)老化、預(yù)防和改善圍絕經(jīng)期綜合征提供了科學(xué)依據(jù)。長期應(yīng)用外源性激素有致子宮內(nèi)膜癌和卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)，而MRJPs凍干粉既保持了蜂王漿的功能特性，又克服了鮮王漿必須在－18 ℃冷凍才能保存活性成分的缺陷，作為既不含性激素，又具有雌激素樣作用的一種新的功能蛋白，預(yù)期在圍絕經(jīng)期綜合征的預(yù)防和改善方面具有廣闊的應(yīng)用前景。目前，運(yùn)用MRJPs預(yù)防和改善圍絕經(jīng)期綜合征的研究還處于探索性階段，未來將重點(diǎn)針對MRJPs的作用機(jī)制進(jìn)行深入研究。