不同強化類型的好氧顆粒污泥結構特性

梁梓軒 涂倩倩 蘇曉軒 楊祥宇 陳俊宇 陳一 李宏 劉彩虹 何強

摘要：把聚合氯化鋁（PAC）、微生物絮凝劑（Microbial flocculant，MBF）、顆?；钚蕴浚℅AC）投加到反應器中可以加快好氧顆粒污泥形成和提升其結構穩(wěn)定性。掃描電鏡（SEM）結果顯示，對照組和MBF組好氧顆粒污泥外部呈網(wǎng)狀疏松結構，而PAC組和GAC組顆粒表面結構致密。胞外聚合物（EPS）熒光原位染色表明，EPS主要結構組分中的蛋白和β多糖在對照組和MBF組中均為均勻分布，這兩組顆粒形成機理符合“EPS假說”;PAC強化型顆粒形成了“蛋白外殼-β多糖內(nèi)核雙層構造”，GAC組的顆粒內(nèi)部有高密度蛋白包裹著顆?；钚蕴浚@兩組顆粒污泥的形成機理更符合“晶核假說”。結構完整性實驗表明：PAC、MBF、GAC都可以顯著提升好氧顆粒污泥抗水力剪切能力;抗水解酶強弱順序依次為PAC組>GAC組>MBF組>對照組。

關鍵詞：好氧顆粒污泥;聚合氯化鋁;微生物絮凝劑;顆?；钚蕴?結構完整性

中圖分類號：X730.1 文獻標志碼：A 文章編號：2096-6717（2019）06-0167-07

近20年來，學者們對污水處理中的好氧顆粒污泥技術進行了大量研究。相比傳統(tǒng)絮體活性污泥，好氧顆粒污泥具有更多的優(yōu)質(zhì)特性，但是，其在實際污水處理中的應用較少，且大多為小規(guī)模（<1萬m³/d）。制約好氧顆粒污泥技術推廣應用的主要原因有兩點：一是其啟動周期（顆粒形成過程）耗時太長，通常小試規(guī)模為1個月左右，有的中試或實際廢水的啟動期會耗時100余天;二是在長期運行中顆?？赡軙捎谒羟袥_刷或水解而解體。

目前，加速好氧顆粒污泥形成的研究主要為控制水力條件和有機負荷兩方面，而對提高好氧顆粒污泥結構穩(wěn)定性的研究較少。在早期研究中，很多學者已經(jīng)證實控制反應器高徑比（H/D）在15～30之間可使好氧顆粒污泥的形成加快至1個月以內(nèi)?？刂破貧饬渴贡碛^氣速為1.5～2.0cm/s，可讓微生物獲得足夠的剪切力進行聚集絮凝，同時，又保證形成的顆粒不會承受強烈沖刷而解體。當有機負荷大于6.0kg/m³d時，好氧顆粒污泥能夠更快速地形成，同時擁有更大粒徑，并出現(xiàn)不同溶解氧（DO）功能分區(qū)，并且，增加N/C比能夠提升顆粒中AOB、NOB等長世代周期的自養(yǎng)菌豐度，從而使得形成的顆粒更加密實，沉降性能更好。

但在實際工程應用中，由于建造原因，通常反應器的高徑比不會太大。同時，有機負荷、N/C比等均由進水水質(zhì)決定，難以實時調(diào)控。因此，需要研究出更加方便可行的方法以加速顆粒形成和提高其結構穩(wěn)定性。目前，已經(jīng)有部分研究從投加絮凝劑或惰性載體（凝聚劑）人手，其有效性已經(jīng)得到證實，但大多數(shù)研究還停留在形成過程、污染物去除等方面，對好氧顆粒污泥結構特性的研究還尚為缺乏。本研究以投加聚合氯化鋁（PAC）、微生物絮凝劑（MBF）、顆?；钚蕴浚℅AC）為強化方法，主要從胞外聚合物分布、DO梯度分布、抗剪切沖刷能力、抗水解酶能力等方面詳細研究了不同強化型好氧顆粒污泥的結構特性，對比分析了不同強化方法的優(yōu)缺點，從而為在實際運行中選擇更高效、更便捷的強化方法提供了理論基礎。

1實驗材料與方法

1.1反應器運行

實驗共設置4組內(nèi)徑為7cm、有效水深為105cm的柱狀SBR反應器。每組反應器有效容積為4L。反應器按6h周期運行，其中，進水、沉淀、排水時間均為5min，其余時間曝氣，控制曝氣量使得表觀氣速為1.5cm/s，不設置缺/厭氧期。排水口在底部以上52.5cm處，換水比為50%。反應器處于恒溫室內(nèi)，溫度恒定為25℃。

1.2PAC、MBF、GAC的投加方式

根據(jù)實驗的前期預實驗結果與相關參考文獻，確定了PAC、MBF、GAC 3種凝聚劑的最佳投加方式。

1）市售30%（w/w）的PAC粉劑配置成33.33g/L的PAC溶液，每個周期進水時同步投加50mLPAC溶液，45d后停止投加。

2）MBF提取自前述污水處理廠的濃縮污泥，提取方法：將TSS=10g/L的濃縮污泥在-20℃和37℃條件下反復凍融3次（單次冷凍或融解的作用時間均為12h）。然后，將100mL混合液進行超聲細胞破碎（SCIENTZ-II D），破碎時間2min，脈沖4s，功率密度60%。破碎后的混合液在4℃，10000g條件下高速離心20min，上清液為MBF溶液。每個周期進水時同步投加50mL MBF溶液，45d后停止投加。

3）GAC的制備與投加方法：將市售的椰殼活性炭高速破碎后，用篩網(wǎng)篩選出粒徑為0.15～0.25mm的顆?；钚蕴?。在接種絮體活性污泥時一次性投加，使得反應器內(nèi)GAC濃度為3500mg/L，后續(xù)不再補加。

1.3EPS熒光原位染色

用0.1mol/L磷酸緩沖液（PBS）將顆粒清洗3次后加人100uL 0.1mol/L NaHCO3，然后，用異硫氰酸熒光素（FITC）、刀豆蛋白（Con A）、卡爾科弗盧爾熒光增白劑（calcofluor white）和尼羅紅（NileRed）分別對蛋白質(zhì)、a多糖、β多糖和脂類進行染色。在上述每次染色后，均用PBS清洗樣品兩次，以除去多余的染色劑。將染色后的顆粒在-20℃下冷凍切割成60um切片，最后，用CLSM（LeicaTCS SP2）掃描沿粒徑方向熒光強度。

1.4掃描電鏡

用PBS將顆粒清洗3次后，用2.5%戊二醛固定2h。然后，分別用50%、75%、90%、100%的乙醇初脫水，再分別用50%、75%、90%、100%的叔丁醇深脫水（單種濃度脫水時長均為5min）。干燥噴金后進行SEM（Hitachi S-3400N）觀察。

1.5抗剪切強度

顆粒實際抗剪強度沒有統(tǒng)一標準，有研究在厭氧顆粒污泥中采用相對抗剪切強度完整度系數(shù)ICs表征。本實驗中作部分修改，具體測定方法為：用0.1mol/L PBS清洗顆粒（100mL）3次后定容至100mL。然后將其置于37℃、200rpm的搖床中振蕩30min。振蕩停止沉淀10s后迅速吸取并測定上清液和沉淀部分的SS，分別記為SS1和SS2。完整度系數(shù)（Integrity coefficients，ICs）ICs=SS2/（SS1+SS2）。

1.6抗水解強度

用PBS清洗3次后的顆粒分別單獨加入2350U/uL蛋白酶K、205U/uL a淀粉酶、5.13U/uL β淀粉酶、3.14U/uL脂肪酶，并在37℃、150rpm條件下振蕩60min。振蕩停止后，沉淀10s迅速吸取并測定上清液和沉淀部分的SS，分別記為SS3和SS4?？顾鈴姸认禂?shù)（Anti-hydrolase coefficients，AHCs）AHCs=SS4/（SS3+SS4）。

1.7其它儀器與試劑

TSS、MLSS等常規(guī)指標的測定參考《水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）》。顆粒粒徑測定和顯微觀察均使用光學顯微鏡Motic BA310。顆粒內(nèi)部溶解氧DO分布用微電極（Unisense）測定，梯度選取為40um，測定時預曝氣控制液相DO=6.0mg/L。PBS緩沖液組分（mmol/L）：NaCl=137，KCl=2.7，Na2HP04=10，KH2P04=2。

2結果與討論

2.1好氧顆粒污泥的形態(tài)學特性

研究通過不同強化方法均成功培養(yǎng)出了好氧顆粒污泥（如圖1所示）。對照組、PAC組、MBF組、GAC組好氧顆粒污泥的初形成（粒徑>0.2mm）時間分別為第42天、第30天、第8天、第28天。顆粒成熟（粒徑及各項指標基本穩(wěn)定）時間分別為第52天、第39天、第22天、第38天。成熟后的4種好氧顆粒污泥平均粒徑均在1.2～1.8mm之間，組間無顯著差異。實驗結果表明：PAC、MBF、GAC對好氧顆粒污泥的形成有促進作用，且PAC的促進作用最為顯著。

從圖1可以看出，4種好氧顆粒污泥的形態(tài)特征在光學顯微鏡下沒有明顯區(qū)別，均為類球形結構，且表面沒有絲狀菌纏繞。已有研究表明，以乙酸鈉為底物培養(yǎng)的好氧顆粒污泥通常不會觀察到有絲狀菌生長。但4種好氧顆粒污泥的SEM結果卻顯著不同，其中，對照組和MBF組的顆粒外層為網(wǎng)狀結構，表面粗糙多孔，較為蓬松。PAC強化型好氧顆粒污泥表面呈層狀花椰菜結構，沒有蓬松網(wǎng)狀結構，且層狀之間排布緊密。GAC強化型好氧顆粒污泥表面整齊排布著球菌、桿菌，沒有網(wǎng)狀、層狀結構，表層光滑致密。

MBF組和對照組表現(xiàn)出相同的表面結構，表明微生物絮凝劑中提取的有效成分（胞內(nèi)外蛋白和多糖）口引，主要作用是增加了好氧顆粒污泥形成過程中必要的胞外聚合物的含量，但沒有改變顆粒化的機理（胞外聚合物假說）。而PAC組和GAC組的表面特性和對照組相比已有顯著改變，且這兩類好氧顆粒污泥之間的表面特性也完全不同。具體的顆?；瘷C理在后文結合EPS熒光原位染色和結構穩(wěn)定性一并詳細討論。

2.2EPS主要組分分布

EPS熒光原位染色結果如圖2所示，CLSM掃描結果表征了蛋白質(zhì)、a多糖、13多糖、脂肪在4種好氧顆粒污泥內(nèi)部沿半徑方向的分布。其中，a多糖和脂肪兩種EPS組分在4種顆粒內(nèi)部的分布規(guī)律一致，都分布在顆粒外層。

蛋白質(zhì)在對照組和MBF組的顆粒內(nèi)部均勻分布;PAC強化型顆粒外層（0～200gm）的蛋白質(zhì)染色劑熒光強度為對照組的2.5倍，內(nèi)部（300～600gm）熒光強度與對照組一致;GAC強化型顆粒外層（0～150um）的蛋白質(zhì)染色劑強度與對照組一致，中部（200～400um）的熒光強度約為對照組的2倍，由于內(nèi)部（500～600um）為顆?；钚蕴?，熒光強度基本為零。

β多糖在對照組和MBF組的顆粒內(nèi)部均勻分布;PAC強化型顆粒外層（0～200um）的β多糖染色劑熒光強度為對照組的1/3，內(nèi)部（300～600um）熒光強度與對照組一致;GAC強化型顆粒外部（0～400um）β多糖染色劑熒光強度與對照組一致，由于內(nèi)部（500～600um）為顆?；钚蕴?，熒光強度基本為零。

EPS熒光原位染色的結果與SEM結果相印證：MBF不改變顆粒化機理，成熟的好氧顆粒污泥結構與對照組類似;而PAC組中加入了高分子絮凝劑，起到了吸附架橋和電中和作用，改變了好氧顆粒污泥內(nèi)部結構，形成了“蛋白外殼-β多糖內(nèi)核”的雙層結構。外層蛋白質(zhì)含有大量疏水基團，能夠抵抗氣一水剪切力和增加細胞疏水性，而內(nèi)層的β多糖有助于微生物間粘附，維持顆粒結構穩(wěn)定;GAC組的顆粒污泥內(nèi)部僅蛋白質(zhì)的分布發(fā)生了顯著改變，高濃度的蛋白質(zhì)將顆?；钚蕴堪茰y是微生物為了附著在顆?；钚蕴可隙置诹烁嗟牡鞍踪|(zhì)，降低微生物聚集體的表面電荷、增加疏水性，最終聚集吸附在GAC上生長。a多糖和脂肪主要由活細胞分泌，二者的分布規(guī)律表明，4種顆粒污泥主要活性微生物均分布在顆粒外層（0～300um）。

2.3溶解氧分布

溶解氧在4種不同好氧顆粒污泥中的分布如圖3所示，蛋白質(zhì)、a多糖、β多糖、脂肪熒光染色強度沿半徑方向分布，篩選用于分析檢測的顆粒直徑均為1.2mm。從圖中可知，4種顆粒徑向溶解氧開始消耗（<5.5mg/L）的順序為：對照組（-300gm）、MBF組（-250gm）、PAC組（-100gm）、GAC組（-50um），徑向溶解氧消耗殆盡（<0.1mg/L）的順序為：PAC組（150um）、GAC組（250um）、MBF組（300um）、對照組（350um）。

DO外部變化：對照組和MBF溶解氧的開始消耗大幅度提前于0um，表明這兩組好氧顆粒污泥表面的結構松散，與液相有一段過渡區(qū)，過渡區(qū)內(nèi)可進行物質(zhì)傳輸、交換，但松散的結構不利于抵抗外界沖擊負荷，且可能發(fā)生微生物游離。PAC組和GAC組的過渡區(qū)僅50～100um，表明這兩類顆粒結構致密，微生物緊密附著生長，能夠良好抵抗外界沖擊。過渡區(qū)形態(tài)也能從前述的SEM結果看出，對照組和MBF組的表面存在網(wǎng)狀結構，沒有清晰的固液界面，而PAC組和GAC組界面輪廓清晰分明。

DO內(nèi)部變化：從徑向溶解氧消耗殆盡的順序可知，4種好氧顆粒污泥內(nèi)部結構從緊密到疏松的順序為PAC組>GAC組>MBF組>對照組。值得特別注意的是，PAC組外層結構比GAC組疏松，但內(nèi)部結構PAC組更加致密。結合EPS熒光染色結果分析，這與蛋白質(zhì)的分布有關。PAC強化型好氧顆粒污泥的蛋白質(zhì)在外部0～200um段有高密度分布，GAC強化型顆粒的蛋白質(zhì)在中部200～400um段高密度分布。故推測高密度的蛋白質(zhì)會使得好氧顆粒污泥結構更加致密，阻擋了DO進一步向內(nèi)傳輸，而對照組和MBF組的顆粒污泥蛋白質(zhì)在整個切片斷面上都是中密度分布，因此，DO能更加深入地向內(nèi)傳輸。

2.4結構強度

主要從抗剪強度和抗水解強度兩方面研究了4種好氧顆粒污泥的結構強度。由于絕對強度難以測定，且沒有統(tǒng)一標準方法，故用相對值表征，結果分別為完整度系數(shù)ICs（表1）和抗水解酶系數(shù)AHCs（圖4）。

表1表明，4種好氧顆粒污泥承受水力剪切力的能力從強到弱依次為PAC組≈GAC組>MBF組>對照組。ICs的結果表明，無論是投加絮凝劑還是載體物質(zhì)，都能顯著提升好氧顆粒污泥的抗剪強度。其中，由于PAC和GAC能顯著改變好氧顆粒污泥的外表面結構，使得表層微生物附著、排布更加致密，從而相比于MBF更能提升顆粒抵抗水力沖刷的能力。實際運行中，可能由于操作調(diào)控不及時，導致曝氣量與水量不匹配，進一步使得反應器內(nèi)曝氣不均勻，氣水紊流程度加劇，最終造成顆粒污泥解體、出水惡化。但是，使用強化型好氧顆粒污泥可有效改善此類問題的不利后果。

從圖4可以看出，當?shù)鞍踪|(zhì)被水解后，PAC組和GAC組的AHCs值在85%～90%范圍內(nèi)，表明這兩組的顆粒均發(fā)生輕微解體，而對照組和MBF組的顆粒未發(fā)生解體現(xiàn)象。當β多糖被水解后，4種顆粒污泥都發(fā)生不同程度的解體，抗β多糖水解酶能力的順序依次為：PAC組>GAC組>MBF組>對照組。

2.54種好氧顆粒污泥形成機理討論

已有研究證實，EPS中的β多糖具有膠狀黏性特征，是維系好氧顆粒污泥結構完整性的主要物質(zhì)，而非傳統(tǒng)生物學觀點認為的蛋白質(zhì)。許多研究用β淀粉酶對普通好氧顆粒污泥作用后均觀察和檢測到了顆粒的破碎和解體，在本實驗中也有同樣結論。但是，從AHCs結果中可以看出，4種好氧顆粒污泥水解程度顯著不同，對其原因推測如下。

由于PAC的加入，顆?；瘷C理發(fā)生改變，起決定性作用的是PAC的吸附架橋和電中和的雙重功效，故水解β多糖后顆粒僅輕微破碎。同時，由于PAC強化型顆粒形成了致密的蛋白外殼，也在一定程度上對顆粒結構有保護作用，因此，在水解蛋白質(zhì)后PAC組的AHCs有輕微下降。同時，該組顆粒污泥形成了β多糖內(nèi)核，其可能原因是由于PAC的加入，使得生物殘體、無機質(zhì)等一系列物質(zhì)，在膠狀β多糖和絮凝劑PAC雙重作用下形成了類似于惰性晶核載體物質(zhì)，其具體作用機理需要進一步深入研究;投加MBF只是增加了微生物可利用的EPS中各種物質(zhì)的種類和數(shù)量，沒有從根本上改變顆?；瘷C理，因此，水解β多糖顆粒破碎程度比較顯著，AHCs值下降明顯;而投加GAC，促使內(nèi)層微生物分泌蛋白質(zhì)附著在顆?；钚蕴勘砻嫔L，從而改變了內(nèi)部微生物聚集機理，內(nèi)層結構穩(wěn)定性不再由β多糖決定。而EPS熒光染色結果表明其顆粒外部組分與對照組無異，導致β多糖水解后，外層顆粒破碎解體，內(nèi)層依舊維持一定的形態(tài)，所以，AHCs值下降程度顯著小于對照組。

對結果的分析討論表明，對照組和MBF組的顆粒污泥形成機理符合“EPS假說”，PAC組和GAC組的顆粒污泥的形成機理符合“晶核假說”。但具體的微觀形成過程，以及微生物與微生物之間、微生物與載體之間的信號傳遞、相互作用等都還需要更進一步的深入研究。

3結論

1）凝聚劑PAC、MBF、GAC均能加速好氧顆粒污泥的形成，其中，投加PAC效果最為顯著。

2）SEM結果顯示，對照組和MBF組好氧顆粒污泥表面呈網(wǎng)狀疏松結構，而PAC組和GAC組顆粒表面結構致密;EPS熒光原位染色表明，EPS主要組分蛋白和β多糖的分布在對照組和MBF組中一致，PAC強化型顆粒形成了“蛋白外殼-β多糖內(nèi)核雙層構造”，GAC組顆粒內(nèi)部有高密度蛋白包裹著顆?；钚蕴俊?/p>

3）溶解氧分布結果表明，PAC、GAC強化型顆粒污泥內(nèi)部結構比對照組和MBF強化型更加致密。結構完整性實驗表明，PAC、MBF、GAC都可以顯著提升好氧顆粒污泥抗水力剪切能力，抗水解酶強弱順序依次為PAC組>GAC組>MBF組>對照組。