外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及組織ER表達(dá)情況及與子宮肌瘤的相關(guān)性研究

李輝，劉麗偉

(平頂山市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)一科，河南 平頂山 467000)

流行病學(xué)研究顯示，子宮肌瘤的發(fā)病率可達(dá)233~455/1萬人左右[1]。臨床上子宮肌瘤治療后的總體病情緩解率較低，治療后的復(fù)發(fā)率較高。在探討子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞生物學(xué)因子的改變可能在促進(jìn)瘤體的增大、平滑肌細(xì)胞膜受體敏感性的改變等過程中發(fā)揮了重要的作用。其中胰島素樣生長因子 （insulin like growth factor，IGF）的高表達(dá)能夠通過誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞的增殖，抑制平滑肌細(xì)胞的凋亡等，進(jìn)而促進(jìn)瘤體的形成[2，3]；雌激素受體（estrogen receptor，ER）的激活，能夠通過誘導(dǎo)下游雌激素信號通路的上調(diào)，增加瘤體纖維成分的增生，促進(jìn)包膜的形成[4，5]。部分研究在探討子宮肌瘤發(fā)病機(jī)制的過程中已經(jīng)揭示了ER受體與子宮肌瘤的發(fā)病關(guān)系，認(rèn)為高表達(dá)的ER受體是促進(jìn)肌瘤發(fā)生的重要風(fēng)險，但關(guān)于IGF的分析研究不足。為了進(jìn)一步揭示IGF等因子與子宮肌瘤的發(fā)病關(guān)系，從而為臨床上子宮肌瘤的綜合性治療提供理論基礎(chǔ)，本次研究選取2016年2月-2017年8月在我院接受子宮部分切除術(shù)的患者為研究對象，探討了相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)，報告如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2016年2月-2017年8月在我院接受子宮部分切除術(shù)的150例患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴年齡≥18周歲；⑵因子宮肌瘤或器官脫垂等因素行子宮部分切除者；⑶無其他盆腔病變者。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；⑵合并惡性腫瘤疾病者。根據(jù)病理結(jié)果分為對照組和觀察組，其中對照組65例，年齡19～50歲，平均36.23±4.79歲；觀察組85例，年齡 20～48歲，平均36.25±4.38歲。兩組患者年齡分布等一般資料方面無明顯差別，具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法 采集空腹靜脈血約5ml并分作兩份，一份自然抗凝后以3000r/min離心10min，取上清液采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

采用石蠟切片脫蠟至水，采用離子水進(jìn)行反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉抗體，封閉時間為5min，加入ER蛋白抗體（鼠來源，ABCUM公司），37℃孵育2h，采用磷酸鹽緩沖液洗滌3次，滴加熒光染色標(biāo)記的二抗抗體 （購自abcum公司），37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液進(jìn)行洗滌，采用南京凱基生物制劑公司生產(chǎn)的顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1.3 評價指標(biāo) 觀察兩組患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及ER表達(dá)。比較不同特征子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及ER表達(dá)的差異，分析影響子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及ER表達(dá)的因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平的比較采用t檢驗進(jìn)行分析，ER表達(dá)情況的比較采用卡方檢驗進(jìn)行處理，采用回歸分析法分析影響子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及ER表達(dá)的因素。P＜0.05：差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平和ER陽性表達(dá)的比較 表1顯示，觀察組患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平、組織ER陽性表達(dá)率高于對照組。

表1 兩組患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平和ER陽性表達(dá)的比較

2.2 不同特征子宮肌瘤患者IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平和ER陽性表達(dá)的比較 表2顯示，未絕經(jīng)、肌瘤數(shù)目≥2個、肌瘤直徑≥5cm的子宮肌瘤患者的外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平、組織ER陽性表達(dá)率較高，不同年齡、生育史、合并高血壓、糖尿病患者的外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平、組織ER陽性表達(dá)率無差別。

表2 不同特征子宮肌瘤患者IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平和ER陽性表達(dá)的比較

2.3 影響子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平及ER表達(dá)的因素分析 回歸分析結(jié)果顯示，是否絕經(jīng)、肌瘤數(shù)目是影響子宮肌瘤患者的外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平、組織ER陽性表達(dá)率的因素。見表3。

表3 -1影響子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ水平的因素分析

表3 -2影響子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅱ水平的因素分析

表3 -3影響子宮肌瘤患者ER表達(dá)的因素分析

3 討論

多種因素均可以影響平滑肌細(xì)胞增殖、新生血管的形成，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞敏感性的上升和子宮肌瘤的發(fā)病。在年齡大于35歲的育齡期女性人群中，子宮肌瘤的發(fā)病風(fēng)險更高[6]。手術(shù)治療或者保守性的治療措施如高頻消融等技術(shù)的應(yīng)用，已經(jīng)在子宮肌瘤的常規(guī)治療領(lǐng)域取得了較為理想的治療效果，但其治療后的復(fù)發(fā)率較高，反復(fù)子宮肌瘤手術(shù)導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)、心理負(fù)擔(dān)及個體創(chuàng)傷等方面的問題仍然較為嚴(yán)重[7，8]。本研究通過對于子宮肌瘤發(fā)病過程中相關(guān)蛋白水平因子的表達(dá)分析探討，一方面可以為臨床上降低子宮肌瘤的復(fù)發(fā)問題提供理論參考，另外可以為臨床上子宮肌瘤患者的綜合性藥物治療或者疾病的預(yù)防等提供依據(jù)。

IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ是生長因子家族的重要成員，其對于血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞成分的促增殖作用，能夠提高子宮平滑肌細(xì)胞的持續(xù)性增殖及間質(zhì)成分的纖維化，并為肌瘤病灶增大過程中的新生血管的形成、血流灌注的保障等提供前提。相關(guān)基礎(chǔ)方面的研究也顯示，IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ能夠通過對于平滑肌細(xì)胞DNA的誘導(dǎo)擴(kuò)增作用，提高平滑肌細(xì)胞DNA上游轉(zhuǎn)錄啟動子及增強(qiáng)子的活性，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞紡錘體分離、提高細(xì)胞分裂的速度[9，10]；ER主要表達(dá)于卵巢上皮、子宮內(nèi)膜上皮及子宮平滑肌細(xì)胞膜表面，在與配體結(jié)合的過程中，可通過下游ER/AKT信號通路或者M(jìn)APK信號通路的激活，提高平滑肌細(xì)胞持續(xù)性增殖形成瘤體的風(fēng)險[11]。部分研究已經(jīng)揭示了ER的表達(dá)在影響到子宮肌瘤的形成、復(fù)發(fā)等方面中的價值[12]，但對于IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ的探討較少。

本研究通過血清學(xué)指標(biāo)的檢測及免疫組化分析研究方法發(fā)現(xiàn)，在子宮肌瘤患者的血清中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ的表達(dá)濃度明顯上升，同時在肌瘤病灶組織中ER蛋白的表達(dá)水平也明顯上升，高于正常子宮平滑肌組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，表明IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ或者ER的異常表達(dá)可能均影響到了子宮肌瘤的病情進(jìn)展或者發(fā)生過程[13]：⑴IGF-Ⅰ、IGF-II的高表達(dá)對于子宮肌瘤的增殖影響，能夠通過增加平滑肌細(xì)胞膜表面糖蛋白受體的敏感性，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增生修復(fù)過程的激活和平滑肌細(xì)胞間質(zhì)成分中Ⅳ型膠原纖維的增生；ER蛋白的陽性表達(dá)程度的提高，可以影響肌瘤組織變性、體積的改變過程，并能夠協(xié)同刺激新生毛細(xì)管內(nèi)皮細(xì)胞的移行，促進(jìn)新生血管的形成，增加肌瘤病灶組織的血流灌注。王波等[14]研究者在探討了73例樣本量的子宮肌瘤患者，發(fā)現(xiàn)IGF-Ⅰ、IGF-II表達(dá)水平可平均上升25%以上，同時患者的肌瘤病灶范圍越大、病程越長、治療后的肌瘤復(fù)發(fā)率越高，IGF-Ⅰ、IGF-II濃度越高。在探討相關(guān)指標(biāo)與子宮肌瘤患者臨床病理特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)，在未絕經(jīng)、肌瘤數(shù)量較多、體積較大的患者中，外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平、組織ER陽性率均較高，這提示了相關(guān)指標(biāo)與肌瘤患者的病情進(jìn)展密切相關(guān)，而其中的機(jī)制則主要考慮與外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平對于肌瘤周邊平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞周期的調(diào)控影響有關(guān)，同時未絕經(jīng)患者體內(nèi)殘存的性激素活性較高，ER受體的活躍程度或者陽性表達(dá)率也可顯著上升[15]。但本次研究并未發(fā)現(xiàn)合并有基礎(chǔ)性疾病如糖尿病或者高血壓對于子宮肌瘤患者體內(nèi)相關(guān)指標(biāo)的影響，提示基礎(chǔ)性疾病并不能影響到體內(nèi)生物學(xué)因子的活性。最后，本研究發(fā)現(xiàn)是否絕經(jīng)、肌瘤數(shù)目是影響子宮肌瘤患者的外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ等的重要因素，進(jìn)一步提示了IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ等與子宮肌瘤患者的病情關(guān)系。

綜上所述，子宮肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平和組織中ER陽性表達(dá)率較高，且與患者是否絕經(jīng)和子宮肌瘤的大小、數(shù)目具有一定的相關(guān)性。