• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    復(fù)合益生菌液態(tài)發(fā)酵黃芪的制備方法

    2019-01-29 05:12:38,,,,,,
    河南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年1期
    關(guān)鍵詞:枯草酵母菌芽孢

    ,,,,,,

    (1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院,河南 鄭州 450046; 2.鄭州市益生菌發(fā)酵中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南 鄭州 450046;3.河南省益生菌生物轉(zhuǎn)化工程技術(shù)研究中心,河南 鄭州 450046; 4.河南省微生物生物轉(zhuǎn)化中藥工程實(shí)驗(yàn)室,河南 鄭州 450046; 5.鄭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心,河南 鄭州 450007)

    中草藥是目前公認(rèn)的綠色飼料添加劑,其在增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力、抗菌、抗病毒等方面具有良好的作用效果[1-2]。但是中草藥在臨床應(yīng)用中也存在一定缺點(diǎn),如添加量較大、適口性較差、成本較高等,對(duì)其在動(dòng)物生產(chǎn)上的推廣與應(yīng)用產(chǎn)生了不利的影響。常作為飼料添加劑的益生菌如枯草芽孢桿菌、乳酸菌等,具有增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力、調(diào)整腸道菌群平衡、維持腸黏膜完整性及提高腸道消化吸收功能的作用[3-4]。結(jié)合現(xiàn)代微生物發(fā)酵工程技術(shù),利用益生菌對(duì)中草藥進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化是對(duì)中草藥炮制方法的創(chuàng)新,該技術(shù)能提高中草藥的臨床應(yīng)用效果,主要表現(xiàn)在減少用藥劑量、提高有效成分作用速率以及具有多功能性等,并且能降低某些藥物的毒副作用[5]。一方面,中草藥黃芪在提高動(dòng)物機(jī)體免疫力、抗應(yīng)激和抗氧化能力方面具有良好的作用效果,并且對(duì)枯草芽孢桿菌和乳酸菌等益生菌的體外增殖具有良好的促進(jìn)作用;另一方面,黃芪經(jīng)益生菌發(fā)酵后臨床效果得到加強(qiáng),用量減小的同時(shí),提高了臨床應(yīng)用價(jià)值[6-7]。目前,關(guān)于發(fā)酵黃芪制劑的開(kāi)發(fā)研究,主要集中于利用1種或1類(lèi)益生菌對(duì)黃芪進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化,多菌種混合發(fā)酵研究較少。本研究利用枯草芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌對(duì)黃芪進(jìn)行分段復(fù)合發(fā)酵,旨在增強(qiáng)益生菌對(duì)黃芪生物轉(zhuǎn)化的效果,發(fā)揮多菌種協(xié)同作用,加強(qiáng)復(fù)合益生菌黃芪發(fā)酵制劑的多功能特性,提高其臨床應(yīng)用效果。

    1 材料和方法

    1.1 試驗(yàn)材料及主要儀器

    試驗(yàn)用黃芪飲片購(gòu)于亳州藥材市場(chǎng);枯草芽孢桿菌、酵母菌和乳酸菌菌種由河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院發(fā)酵中藥實(shí)驗(yàn)室保存;營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、莫匹羅星鋰鹽MRS培養(yǎng)基均購(gòu)于北京澳博星生物技術(shù)有限公司;馬鈴薯液體、瓊脂培養(yǎng)基(含氯霉素)均購(gòu)于青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司;恒溫培養(yǎng)箱購(gòu)于寧波萊??萍加邢薰荆缓銣?fù)u床購(gòu)于天津路業(yè)實(shí)驗(yàn)儀器公司;電子天平購(gòu)于鄭州通渠商貿(mào)有限公司;200 L全自動(dòng)發(fā)酵罐購(gòu)于鎮(zhèn)江東方生物工程設(shè)備技術(shù)公司。

    1.2 菌種活化

    將枯草芽孢桿菌、酵母菌及乳酸菌菌種的甘油凍存管置于室溫,融化后用無(wú)菌接種環(huán)挑取少量菌種分別劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯瓊脂(含氯霉素)培養(yǎng)基和莫匹羅星鋰鹽MRS瓊脂培養(yǎng)基,分別在37、28、37 ℃倒置培養(yǎng)24 h,然后將其轉(zhuǎn)接至相應(yīng)液體培養(yǎng)基,適宜條件下培養(yǎng)24 h后備用。

    1.3 黃芪提取液的制備

    準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的黃芪飲片,分別加5、4、4倍量的水,煮沸3次,每次約40 min,分別留取每次濾液,最后合并3次濾液并濃縮至黃芪質(zhì)量濃度為0.5 g/mL,保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4 黃芪添加量、發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件

    黃芪提取液的添加量為:每毫升培養(yǎng)基中含黃芪0.5 g。發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:每100 mL培養(yǎng)基中含黃芪50.0 g、豆粕2.0 g、玉米2.0 g、麩皮2.5 g;培養(yǎng)基初始pH值均為8.00,裝液量均為100 mL(500 mL三角瓶)[8]??莶菅挎邨U菌、酵母菌和乳酸菌發(fā)酵溫度分別為37、28、37 ℃,乳酸菌靜置培養(yǎng),枯草芽孢桿菌和酵母菌置恒溫?fù)u床轉(zhuǎn)速160 r/min培養(yǎng)。

    1.5 復(fù)合菌種分段發(fā)酵黃芪條件測(cè)定

    1.5.1 菌種接種順序?qū)w生長(zhǎng)的影響 取制備好的培養(yǎng)基18瓶,隨機(jī)分為1—6組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)3瓶。按表1所示順序組合將菌種分別在一定的時(shí)間點(diǎn)按1.0%的接種量接種至培養(yǎng)基中,接種后培養(yǎng)時(shí)間均為24 h,培養(yǎng)結(jié)束后鏡檢各菌種的生長(zhǎng)情況及pH值,接種的相應(yīng)菌種生長(zhǎng)用“√”表示,接種的相應(yīng)菌種未生長(zhǎng)用“-”表示。

    表1 菌種接種順序 Tab.1 The inoculation order of strains

    1.5.2 枯草芽孢桿菌發(fā)酵時(shí)間對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的影響 采用單因子試驗(yàn)法,取制備好的培養(yǎng)基15瓶,隨機(jī)分為1—5組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)3瓶。1—5組均按3.0%接種量接入枯草芽孢桿菌[9],分別在接種后的24、36、48、60、72 h,取樣測(cè)定枯草芽孢桿菌數(shù)量,同時(shí)各組均按1.0%接種量接入酵母菌,培養(yǎng)24 h后測(cè)定酵母菌數(shù)量。

    1.5.3 酵母菌最適接種量的測(cè)定 采用單因子試驗(yàn)法,取制備好的培養(yǎng)基15瓶,隨機(jī)分為1—5組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)3瓶。1—5組均按3.0%接種量接入枯草芽孢桿菌,按1.5.2中所得最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)后,各組分別按0.1%、0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的接種量接入酵母菌,培養(yǎng)24 h后測(cè)定酵母菌的數(shù)量。

    1.5.4 酵母菌發(fā)酵時(shí)間對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響 采用單因子試驗(yàn)法,取制備好的培養(yǎng)基15瓶,隨機(jī)分為1—5組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)3瓶。1—5組均按3.0%的接種量接入枯草芽孢桿菌,按照1.5.2中所得最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng),然后均按1.5.3中所得最佳接種量接入酵母菌,分別在接種后的24、36、48、60、72 h,取樣并測(cè)定酵母菌數(shù)量,同時(shí)各組均按1.0%的接種量接入乳酸菌,培養(yǎng)24 h后測(cè)定乳酸菌數(shù)量。

    1.5.5 乳酸菌最適接種量的測(cè)定 采用單因子試驗(yàn)法,取制備好的培養(yǎng)基15瓶,隨機(jī)分為1—5組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)3瓶。1—5組均按3.0%的接種量接入枯草芽孢桿菌,按照1.5.2中所得最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng),然后均按1.5.3中所得最佳接種量接入酵母菌,再按照1.5.4中所得最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)后,各組分別按0.1%、0.5%、1.0%、2.0%、4.0%的接種量接入乳酸菌,培養(yǎng)24 h后測(cè)定乳酸菌的數(shù)量。

    1.5.6 發(fā)酵時(shí)間對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響 采用單因子試驗(yàn)法,取制備好的培養(yǎng)基15瓶,隨機(jī)分為1—5組,每組3個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)3瓶。1—5組均按3.0%的接種量接入枯草芽孢桿菌,按照1.5.2中所得最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng),然后均按1.5.3中所得最佳接種量接入酵母菌,再按照1.5.4中所得最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng),最后各組均按1.5.5中所得最佳接種量接入乳酸菌,分別在培養(yǎng)24、36、48、60、72 h時(shí),取樣并測(cè)定乳酸菌數(shù)量。

    1.6 中試擴(kuò)大試驗(yàn)

    為進(jìn)一步確定上述搖瓶試驗(yàn)結(jié)果的實(shí)用性,利用200 L全自動(dòng)不銹鋼發(fā)酵罐及篩選后的培養(yǎng)基進(jìn)行中試擴(kuò)大試驗(yàn),并檢測(cè)發(fā)酵液各菌種的數(shù)量和發(fā)酵終點(diǎn)pH值。培養(yǎng)基初始pH值為8.00,裝液量為70%;枯草芽孢桿菌發(fā)酵溫度為37 ℃,接種量為3.0%,電機(jī)轉(zhuǎn)速為250 r/min,通氣量為0.05 m3/min;酵母菌發(fā)酵溫度為28 ℃,電機(jī)轉(zhuǎn)速為250 r/min,通氣量為0.05 m3/min;其他發(fā)酵條件按照1.5中所得的最優(yōu)結(jié)果執(zhí)行。

    1.7 活菌數(shù)量的測(cè)定

    采用平板菌落計(jì)數(shù)法測(cè)定活菌數(shù)量[10]。取1 mL發(fā)酵好的菌液稀釋至10-6、10-7、10-8倍,取1 mL稀釋液于無(wú)菌平板,然后加入適量瓊脂培養(yǎng)基搖勻,待培養(yǎng)基凝固后,在適宜溫度下倒置培養(yǎng)24 h,查出平板菌落數(shù),測(cè)數(shù)樣品設(shè)3個(gè)重復(fù)。根據(jù)公式:每毫升活菌數(shù)=平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù),來(lái)計(jì)算發(fā)酵液中活菌總量。

    枯草芽孢桿菌活菌數(shù)量的測(cè)定為:將發(fā)酵液置于80 ℃水浴鍋中20 min,此后操作同平板菌落計(jì)數(shù)法,測(cè)數(shù)培養(yǎng)基采用營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件為37 ℃有氧培養(yǎng);酵母菌測(cè)定采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(含氯霉素),培養(yǎng)條件為28 ℃有氧培養(yǎng);乳酸菌測(cè)數(shù)培養(yǎng)基采用莫匹羅星鋰鹽MRS瓊脂培養(yǎng)基,培養(yǎng)條件為37 ℃厭氧培養(yǎng)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌種接種順序?qū)w生長(zhǎng)的影響

    由表2所示,按1、2組的菌種接種順序,3種益生菌均能正常生長(zhǎng),按其他4組接種順序,枯草芽孢桿菌不能生長(zhǎng)。試驗(yàn)開(kāi)始,按照表1的接種順序,各組分別接種枯草芽孢桿菌(1、2組)、酵母菌(3、4組)和乳酸菌(5、6組),培養(yǎng)24 h后,各組中菌體均能生長(zhǎng)。pH值以枯草芽孢桿菌組最高,分別為5.85和5.84;酵母菌組次之,pH值均為5.63;乳酸菌組最低,pH值分別為4.08和4.09。各組在24 h時(shí)分別接入相應(yīng)菌種(表1),培養(yǎng)24 h后,1、5組(酵母菌)和2、4組(乳酸菌)接入的菌種均能正常生長(zhǎng),以上各組pH值分別為4.75、3.96、4.14、4.75;3、6組(枯草芽孢桿菌)接入的菌種未生長(zhǎng),pH值分別為5.32和4.02。各組在48 h時(shí)接入相應(yīng)菌種(表1),培養(yǎng)24 h后,4、5組(枯草芽孢桿菌)未生長(zhǎng),其他各組接種的菌種正常生長(zhǎng),終末菌液均呈酸性,pH值分別為4.73、4.03、4.82、4.83、3.92、3.99,乳酸菌接種順序在酵母菌之前組別(2、5、6組)的pH值低于酵母菌接種順序在乳酸菌之前的組別(1、3、4組)。由于枯草芽孢桿菌和酵母菌均為需氧菌,除溫度之外其他發(fā)酵條件一致,第1組的接種順序在制劑制備時(shí)操作方便,因此確定第1組為最佳接種順序組合。

    表2 菌種接種順序?qū)w生長(zhǎng)的影響Tab.2 Effect of inoculation sequence on growth of strains

    注:“√”表示接種的菌種生長(zhǎng),“-”表示接種的菌種未生長(zhǎng)。

    Note:“√” indicates the growth of the inoculated strain,and “-” indicates that the inoculated strain did not grow.

    2.2 復(fù)合菌種分段發(fā)酵黃芪條件對(duì)各菌種生長(zhǎng)的影響

    2.2.1 枯草芽孢桿菌發(fā)酵時(shí)間對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的影響 由表3所示,檢測(cè)得枯草芽孢桿菌在后續(xù)試驗(yàn)過(guò)程中活菌數(shù)量變化較??;當(dāng)枯草芽孢桿菌培養(yǎng)時(shí)間為24 h時(shí),接種的酵母菌在培養(yǎng)后獲得的數(shù)量最高,為0.98×108cfu/mL,另外4組酵母菌數(shù)量在0.75×108~0.91×108cfu/mL,隨著枯草芽孢桿菌培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)酵母菌數(shù)量呈下降趨勢(shì),說(shuō)明延長(zhǎng)枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)時(shí)間能抑制酵母菌的生長(zhǎng)。結(jié)果表明,在枯草芽孢桿菌培養(yǎng)24 h時(shí)接種酵母菌,既能保證枯草芽孢桿菌得到充分的生長(zhǎng),又能使酵母菌的菌體數(shù)量較高,因此,確定枯草芽孢桿菌培養(yǎng)24 h時(shí)為酵母菌的最優(yōu)接種時(shí)間。

    表3 枯草芽孢桿菌培養(yǎng)時(shí)間對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的影響Tab.3 Effect of Bacillus subtilis culture time on the growth of yeast

    2.2.2 接種量對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的影響 由表4所示,隨著酵母菌接種量的提高,培養(yǎng)后所得酵母菌數(shù)量先升高后降低,以接種量為2.0%的試驗(yàn)組酵母菌數(shù)量最高,為1.34×108cfu/mL,因此,確定酵母菌最佳接種量為2.0%。

    表4 接種量對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的影響Tab.4 Effect of inoculating volume on the growth of yeast

    2.2.3 酵母菌培養(yǎng)時(shí)間對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響 由表5所示,酵母菌數(shù)量隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),活菌數(shù)量先升高后降低,以培養(yǎng)時(shí)間為60 h時(shí)的活菌數(shù)量最高,為1.98×108cfu/mL;隨著酵母菌培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),后續(xù)接種并培養(yǎng)的乳酸菌數(shù)量先升高后降低,當(dāng)酵母菌培養(yǎng)時(shí)間為48 h時(shí),接種的乳酸菌培養(yǎng)后獲得的數(shù)量最高,為12.22×108cfu/mL。酵母菌培養(yǎng)48 h時(shí)乳酸菌數(shù)量為1.87×108cfu/mL,雖然低于酵母菌培養(yǎng)60 h時(shí)的乳酸菌數(shù)量,但考慮到此時(shí)接種所得乳酸菌的活菌數(shù)最高,且延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間增加能耗,因此,確定酵母菌培養(yǎng)48 h時(shí)為乳酸菌的最優(yōu)接種時(shí)間。

    表5 酵母菌培養(yǎng)時(shí)間對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響Tab.5 Effect of yeast culture time on Lactobacillus growth

    2.2.4 接種量對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響 由表6所示,隨著乳酸菌接種量的提高,培養(yǎng)后所得乳酸菌數(shù)量先升高后降低,以接種量為0.5%的試驗(yàn)組乳酸菌數(shù)量最高,為11.48×108cfu/mL,因此,確定乳酸菌的最佳接種量為0.5%。

    表6 接種量對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響Tab.6 Effect of inoculating volume on the growth of Lactobacillus

    2.2.5 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響 由表7所示,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),乳酸菌數(shù)量呈降低趨勢(shì),以培養(yǎng)時(shí)間為24 h的乳酸菌數(shù)量最高,為11.64×108cfu/mL,因此,確定乳酸菌最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間為24 h。

    表7 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)乳酸菌生長(zhǎng)的影響Tab.7 Effect of culture time on the growth of Lactobacillus

    2.3 中試擴(kuò)大試驗(yàn)結(jié)果

    由表8所示,按上述試驗(yàn)所得最優(yōu)發(fā)酵條件,調(diào)整培養(yǎng)基初始pH值為8.00,發(fā)酵罐裝液量為70%,枯草芽孢桿菌接種量為3.0%,發(fā)酵溫度為37 ℃,電機(jī)轉(zhuǎn)速為250 r/min,通氣量為0.05 m3/min;枯草芽孢桿菌培養(yǎng)24 h后,以2.0%的接種量接種酵母菌,電機(jī)轉(zhuǎn)速為250 r/min,通氣量為0.05 m3/min,于28 ℃培養(yǎng)48 h;然后,以0.5%的接種量接種乳酸菌,于37 ℃靜置培養(yǎng)24 h。檢測(cè)發(fā)酵液中各菌種的數(shù)量如下:枯草芽孢桿菌為28.52×108cfu/mL,酵母菌為5.71×108cfu/mL,乳酸菌為9.34×108cfu/mL,終末pH值為4.55。與前期搖瓶試驗(yàn)階段相比,乳酸菌數(shù)有所降低,但枯草芽孢桿菌和酵母菌數(shù)量大幅提高,說(shuō)明本研究利用復(fù)合益生菌液態(tài)發(fā)酵黃芪的方法具有良好的可行性。

    表8 中試擴(kuò)大試驗(yàn)結(jié)果Tab.8 Result of pilot test

    3 結(jié)論與討論

    本研究表明,利用多菌種能對(duì)黃芪提取液進(jìn)行混合發(fā)酵,接種順序?yàn)榭莶菅挎邨U菌、酵母菌、乳酸菌;最優(yōu)發(fā)酵條件為:枯草芽孢桿菌以3.0%的接種量于37 ℃培養(yǎng)24 h后,以2.0%的接種量接種酵母菌,于28 ℃培養(yǎng)48 h后,再以0.5%的接種量接種乳酸菌,于37 ℃靜置培養(yǎng)24 h;按優(yōu)化后的發(fā)酵條件,利用發(fā)酵罐進(jìn)行中試試驗(yàn),發(fā)酵結(jié)束時(shí),枯草芽孢桿菌、酵母菌、乳酸菌的活菌數(shù)分別為28.52×108、5.71×108、9.34×108cfu/mL,終末pH值為4.55。黃芪經(jīng)益生菌混合發(fā)酵后,其作用效果與發(fā)酵之前或單一菌種發(fā)酵相比是否會(huì)有所提高,還需進(jìn)一步研究。

    3.1 分段復(fù)合發(fā)酵中菌種接種順序?qū)Ω骶N生長(zhǎng)的影響

    目前,關(guān)于多菌種復(fù)合發(fā)酵制備飼料添加劑或發(fā)酵型飼料原料的研究主要集中在利用同類(lèi)菌種的混合發(fā)酵,由于同類(lèi)菌種生長(zhǎng)繁殖條件相似,混合發(fā)酵培養(yǎng)可行性強(qiáng),通過(guò)同類(lèi)多菌種混合發(fā)酵能有效提高發(fā)酵液中活菌數(shù)量或發(fā)酵底物的品質(zhì)。例如,王玉燕等[11]利用3株乳酸菌混合發(fā)酵制備具有高活菌含量的發(fā)酵液,通過(guò)發(fā)酵條件和培養(yǎng)基的優(yōu)化,活菌數(shù)量可達(dá)到1.8×1013cfu/mL。利用不同種類(lèi)的有益菌混合發(fā)酵亦有報(bào)道,李祖旭[12]用枯草芽孢桿菌、米曲霉、鼠李糖乳桿菌和長(zhǎng)雙歧桿菌發(fā)酵健胃消食片藥渣得到的制劑,對(duì)脾虛小鼠腸道菌群具有一定的調(diào)節(jié)作用;王國(guó)強(qiáng)等[13]利用異常漢遜酵母菌、枯草芽孢桿菌、干酪乳桿菌,以2∶2∶1的比例,5%的接種量,發(fā)酵豆粕48 h,明顯提高了豆粕的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。由于不同種類(lèi)的菌種發(fā)酵條件和營(yíng)養(yǎng)需求不一致,如果在相同的發(fā)酵條件下,將不同種類(lèi)的菌種同時(shí)接種至同一培養(yǎng)基中,再加上菌種在生長(zhǎng)過(guò)程中可能產(chǎn)生相互抑制,將會(huì)導(dǎo)致某些菌種生長(zhǎng)不充分甚至無(wú)法生長(zhǎng)。肖萌[13]利用納豆芽孢桿菌和乳酸菌分段接種的方法混合發(fā)酵菜籽粕,首先接種納豆芽孢桿菌,2 d后再接種短乳桿菌,再發(fā)酵2 d,通過(guò)成分檢測(cè)發(fā)現(xiàn),菜籽粕經(jīng)發(fā)酵后粗蛋白、粗脂肪及總氨基酸等含量顯著升高,植酸和單寧含量顯著降低,整體營(yíng)養(yǎng)價(jià)值得到提升。

    本研究選用營(yíng)養(yǎng)成分復(fù)雜的玉米、麩皮和豆粕混合物作為發(fā)酵黃芪提取液的培養(yǎng)基原料,能減少因營(yíng)養(yǎng)需求不同對(duì)菌種生長(zhǎng)造成的不利影響。接種方式采用分段接種,能夠避免因發(fā)酵條件不同導(dǎo)致的菌體生長(zhǎng)受阻,例如枯草芽孢桿菌和酵母菌在有氧條件下能大量繁殖,而乳酸菌則要求微需氧或厭氧條件。因此,接種順序直接決定了黃芪發(fā)酵液中益生菌的種類(lèi)和數(shù)量。試驗(yàn)中1、2組首先接種枯草芽孢桿菌,培養(yǎng)結(jié)束時(shí)pH值接近6.00,后續(xù)按不同順序接種酵母菌和乳酸菌均能生長(zhǎng);3—6組首先接種酵母菌或乳酸菌,培養(yǎng)結(jié)束時(shí)pH值大約在4.00~5.50,后續(xù)培養(yǎng)枯草芽孢桿菌均不能正常繁殖,與史洪濤[14]研究結(jié)果相一致,推測(cè)培養(yǎng)基呈酸性可能是枯草芽孢桿菌不能正常繁殖的主要原因之一。此外,各菌種的代謝產(chǎn)物是否對(duì)其他菌種的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制或促進(jìn)作用,還有待深入研究。

    3.2 復(fù)合菌種分段發(fā)酵條件對(duì)各菌種生長(zhǎng)的影響

    發(fā)酵條件是影響發(fā)酵產(chǎn)品品質(zhì)的重要因素,相關(guān)研究表明,適宜的發(fā)酵條件包括發(fā)酵溫度、接種量、接種順序、pH值、含水量(固態(tài)發(fā)酵)等,能提高發(fā)酵產(chǎn)物中菌體數(shù)量,有利于目標(biāo)代謝產(chǎn)物的積累,并且能降低發(fā)酵底物中有害物質(zhì)的含量,進(jìn)而提高發(fā)酵制劑品質(zhì)和臨床應(yīng)用效果[15-19]。本研究將發(fā)酵菌種按一定的順序接種至含有黃芪提取液的培養(yǎng)基中,由于微生物之間的相互作用關(guān)系比較復(fù)雜,混合培養(yǎng)能造成菌種之間的空間和營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng),一方面能提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率,另一方面也可能造成不同菌種之間在生長(zhǎng)繁殖方面的協(xié)同或拮抗作用。在搖瓶試驗(yàn)階段,枯草芽孢桿菌和酵母菌受到供氧條件的限制,但在中試擴(kuò)大試驗(yàn)時(shí),獲得充足氧氣的枯草芽孢桿菌和酵母菌,在培養(yǎng)后活菌數(shù)量大幅提升。由此推斷,由枯草芽孢桿菌和酵母菌活菌數(shù)量的增加所產(chǎn)生的營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)或菌體之間的抑制作用,可能是降低乳酸菌數(shù)量的原因。不同菌種之間產(chǎn)酶具有互補(bǔ)性,某些中藥大分子或前體成分經(jīng)微生物酶系轉(zhuǎn)化后生成次級(jí)代謝產(chǎn)物具有更強(qiáng)的生物活性[20],因此,在保證各菌種能夠生長(zhǎng)的情況下,通過(guò)調(diào)整不同菌種的發(fā)酵時(shí)間和接種量,降低菌種之間因生長(zhǎng)拮抗產(chǎn)生的不利影響,提高每個(gè)種類(lèi)菌體的數(shù)量,能使復(fù)合菌種發(fā)酵的酶系更有利于黃芪成分的生物轉(zhuǎn)化。

    猜你喜歡
    枯草酵母菌芽孢
    枯草芽孢桿菌在養(yǎng)雞生產(chǎn)中的應(yīng)用
    湖南飼料(2021年4期)2021-10-13 07:32:46
    為什么酵母菌既能做面包也能釀酒?
    解淀粉芽孢桿菌Lx-11
    解淀粉芽孢桿菌的作用及其產(chǎn)品開(kāi)發(fā)
    側(cè)孢短芽孢桿菌A60
    歲末
    30L發(fā)酵罐培養(yǎng)枯草芽孢桿菌產(chǎn)高密度芽孢的研究
    讓面包變“胖”的酵母菌
    蜂蜜中耐高滲透壓酵母菌的分離與鑒定
    復(fù)合誘變高產(chǎn)金屬硫蛋白酵母菌株的篩選
    国产精品日韩av在线免费观看| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 欧美三级亚洲精品| 色在线成人网| 有码 亚洲区| 观看美女的网站| 午夜精品在线福利| 国产91av在线免费观看| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲经典国产精华液单| 最好的美女福利视频网| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 性插视频无遮挡在线免费观看| 午夜福利在线观看吧| 可以在线观看的亚洲视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| a级一级毛片免费在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 日产精品乱码卡一卡2卡三| www.色视频.com| 天天躁日日操中文字幕| 久久韩国三级中文字幕| 高清毛片免费看| 看免费成人av毛片| 日本色播在线视频| 嫩草影院新地址| 国产精品一二三区在线看| 国产在线男女| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| av免费在线看不卡| 俺也久久电影网| 亚洲第一电影网av| 亚洲成人av在线免费| 精品久久久久久久久亚洲| 日韩欧美免费精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久久久国产网址| 男女下面进入的视频免费午夜| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久久久久久午夜电影| 国产日本99.免费观看| 麻豆一二三区av精品| 91久久精品电影网| 波多野结衣高清作品| 春色校园在线视频观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产三级在线视频| 久久久精品欧美日韩精品| 51国产日韩欧美| 成人欧美大片| 婷婷精品国产亚洲av在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 91在线观看av| av国产免费在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 欧美3d第一页| 白带黄色成豆腐渣| 热99在线观看视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| av黄色大香蕉| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲综合色惰| 国产精品嫩草影院av在线观看| av在线老鸭窝| 日韩av不卡免费在线播放| 男女边吃奶边做爰视频| 日本黄色片子视频| h日本视频在线播放| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国产成人91sexporn| 一级毛片我不卡| 午夜久久久久精精品| 国产老妇女一区| 亚洲av.av天堂| 高清毛片免费观看视频网站| 久久久精品大字幕| 久久久久久九九精品二区国产| 色哟哟·www| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 色在线成人网| 美女内射精品一级片tv| 精品久久久噜噜| 99久久久亚洲精品蜜臀av| АⅤ资源中文在线天堂| 午夜激情福利司机影院| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲真实伦在线观看| 中国国产av一级| 一级av片app| 国产毛片a区久久久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 一级毛片我不卡| 国产成人a区在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲熟妇熟女久久| 国产69精品久久久久777片| 国产成人freesex在线 | 久久久久久久久中文| 99国产极品粉嫩在线观看| 日韩欧美免费精品| 欧美高清性xxxxhd video| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲久久久久久中文字幕| 三级经典国产精品| 波多野结衣高清作品| 久99久视频精品免费| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国内精品美女久久久久久| 国产一区二区在线av高清观看| 51国产日韩欧美| 色5月婷婷丁香| av国产免费在线观看| 久久午夜福利片| 国产 一区 欧美 日韩| av在线蜜桃| 成年女人永久免费观看视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久久久久久久成人| 99久久精品热视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美高清成人免费视频www| 最好的美女福利视频网| 在线观看午夜福利视频| 少妇的逼水好多| 亚洲乱码一区二区免费版| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲不卡免费看| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产私拍福利视频在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产私拍福利视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久午夜福利片| 中文字幕久久专区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日本免费一区二区三区高清不卡| av视频在线观看入口| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲性夜色夜夜综合| 老司机福利观看| 九九在线视频观看精品| 乱人视频在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲乱码一区二区免费版| 嫩草影院入口| 中文字幕av在线有码专区| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品在线观看二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产视频内射| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一个人免费在线观看电影| 美女 人体艺术 gogo| av专区在线播放| 悠悠久久av| av免费在线看不卡| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲一区高清亚洲精品| 看黄色毛片网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 香蕉av资源在线| 嫩草影院新地址| 在线看三级毛片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 成人一区二区视频在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 少妇丰满av| or卡值多少钱| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国内精品一区二区在线观看| 嫩草影视91久久| 国产精品免费一区二区三区在线| 中文字幕熟女人妻在线| 嫩草影院入口| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美性感艳星| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久精品夜色国产| 亚洲成人久久爱视频| 国产精品久久久久久久久免| 看黄色毛片网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产男靠女视频免费网站| 少妇丰满av| 少妇的逼好多水| 亚洲精品国产成人久久av| 中国国产av一级| 一区二区三区四区激情视频 | 寂寞人妻少妇视频99o| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| av女优亚洲男人天堂| 毛片女人毛片| av女优亚洲男人天堂| 精品国内亚洲2022精品成人| 在线观看av片永久免费下载| 久久久精品欧美日韩精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 俺也久久电影网| 91狼人影院| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲国产高清在线一区二区三| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产高清三级在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 99热6这里只有精品| 黄色日韩在线| 日本a在线网址| 国内精品久久久久精免费| www日本黄色视频网| av女优亚洲男人天堂| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久久久午夜电影| 午夜精品一区二区三区免费看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 最近在线观看免费完整版| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 乱系列少妇在线播放| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久精品国产亚洲av天美| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一区二区三区免费毛片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 哪里可以看免费的av片| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产精品福利在线免费观看| 国产精品一区www在线观看| 精品福利观看| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲人成网站高清观看| 草草在线视频免费看| 亚洲成a人片在线一区二区| 免费观看在线日韩| 午夜老司机福利剧场| 久久久久久久久久成人| 中国国产av一级| 国内精品久久久久精免费| 久久亚洲精品不卡| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av中文乱码字幕在线| 久久九九热精品免费| 成年版毛片免费区| 久久6这里有精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产成人福利小说| 日本一本二区三区精品| 日韩制服骚丝袜av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 99国产极品粉嫩在线观看| 一本一本综合久久| 插逼视频在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲内射少妇av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产精品一区www在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品一区二区性色av| 我要搜黄色片| 国产亚洲精品av在线| 国产亚洲91精品色在线| 中文在线观看免费www的网站| 国产一区二区三区av在线 | 18+在线观看网站| 波多野结衣高清作品| 99久久成人亚洲精品观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产黄片美女视频| 国产精品久久久久久av不卡| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产精品亚洲美女久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲av成人av| 精品一区二区三区av网在线观看| 在线免费观看的www视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 可以在线观看的亚洲视频| 在线天堂最新版资源| 久久6这里有精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产色婷婷99| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久久国产成人免费| 欧美区成人在线视频| 丝袜美腿在线中文| 久久久久国产网址| 久久6这里有精品| 久久久久久久久久成人| 校园人妻丝袜中文字幕| 日本熟妇午夜| а√天堂www在线а√下载| 欧美日本视频| 国产精品精品国产色婷婷| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 久久久久久久亚洲中文字幕| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久a久久爽久久v久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美成人精品欧美一级黄| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 97碰自拍视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产成人影院久久av| 亚洲av二区三区四区| 淫秽高清视频在线观看| 中文资源天堂在线| 一个人免费在线观看电影| 国产午夜精品论理片| 日韩强制内射视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品色激情综合| 级片在线观看| 99热只有精品国产| 亚洲在线自拍视频| 九色成人免费人妻av| 日本一本二区三区精品| 天堂√8在线中文| 精品一区二区三区av网在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲av成人精品一区久久| 久久久久久久久大av| 99久久成人亚洲精品观看| 日韩制服骚丝袜av| 真实男女啪啪啪动态图| 国产成年人精品一区二区| av黄色大香蕉| 精品午夜福利在线看| 亚洲在线自拍视频| 国产一区二区在线av高清观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久精品影院6| 国产探花在线观看一区二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 日韩欧美在线乱码| 欧美日韩乱码在线| 少妇高潮的动态图| 97热精品久久久久久| 欧美区成人在线视频| 俺也久久电影网| 高清午夜精品一区二区三区 | 最近最新中文字幕大全电影3| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精品久久久久久久久免| 热99在线观看视频| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲av免费在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费高清视频大片| 免费一级毛片在线播放高清视频| 中国国产av一级| 国产精品亚洲美女久久久| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲最大成人中文| 久久午夜福利片| 国产精品亚洲一级av第二区| 在现免费观看毛片| 午夜福利高清视频| 韩国av在线不卡| 色在线成人网| 内地一区二区视频在线| 在线免费观看的www视频| 精品久久久噜噜| 国产av不卡久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久大精品| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美日韩综合久久久久久| 国产精华一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| a级毛色黄片| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 成年女人毛片免费观看观看9| 精品久久久久久久久亚洲| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲自偷自拍三级| 在线国产一区二区在线| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲av中文av极速乱| 干丝袜人妻中文字幕| 欧美bdsm另类| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲18禁久久av| 99久久精品一区二区三区| 九九热线精品视视频播放| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美在线一区亚洲| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲成人精品中文字幕电影| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久99热这里只有精品18| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 精品免费久久久久久久清纯| 免费av不卡在线播放| 99久国产av精品国产电影| 午夜福利高清视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美bdsm另类| 国产精品一区二区免费欧美| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 亚洲18禁久久av| 国产av麻豆久久久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 看十八女毛片水多多多| 亚洲四区av| 在线观看av片永久免费下载| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 日本 av在线| 亚洲av成人精品一区久久| 色综合站精品国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美zozozo另类| 日本成人三级电影网站| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美又色又爽又黄视频| 色av中文字幕| 亚州av有码| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产黄色小视频在线观看| 免费av不卡在线播放| 日韩亚洲欧美综合| 午夜福利18| 亚洲人成网站在线播| av免费在线看不卡| 欧美高清成人免费视频www| 成人午夜高清在线视频| 高清午夜精品一区二区三区 | 午夜日韩欧美国产| 日本a在线网址| 一级黄色大片毛片| 亚洲人与动物交配视频| 美女免费视频网站| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩人妻高清精品专区| 欧美成人精品欧美一级黄| 香蕉av资源在线| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久国内视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲美女搞黄在线观看 | 伊人久久精品亚洲午夜| av在线播放精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 一区二区三区四区激情视频 | 国产高清不卡午夜福利| 欧美激情在线99| 国产成人freesex在线 | 99久久精品一区二区三区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 日本熟妇午夜| 天堂√8在线中文| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产精品无大码| 好男人在线观看高清免费视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一级毛片电影观看 | 久久久久国产网址| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲美女黄片视频| 在线免费十八禁| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国模一区二区三区四区视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 大香蕉久久网| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费无遮挡裸体视频| 丝袜美腿在线中文| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 综合色丁香网| 91在线观看av| 超碰av人人做人人爽久久| 中文字幕av在线有码专区| 久久久精品94久久精品| 国内精品久久久久精免费| 高清日韩中文字幕在线| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 毛片一级片免费看久久久久| 伦精品一区二区三区| 久久久久久大精品| 国产av麻豆久久久久久久| 成年女人永久免费观看视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 一区福利在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产精品久久久久久久久免| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲无线观看免费| 亚洲av成人av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产一区二区三区av在线 | 午夜福利在线观看吧| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 嫩草影院精品99| 青春草视频在线免费观看| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| www日本黄色视频网| 国产久久久一区二区三区| 一a级毛片在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 在线观看免费视频日本深夜| 一级毛片久久久久久久久女| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲中文日韩欧美视频| 波多野结衣高清作品| 欧美潮喷喷水| or卡值多少钱| 伊人久久精品亚洲午夜| 毛片一级片免费看久久久久| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲欧美日韩高清专用| 日韩av不卡免费在线播放| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 国产91av在线免费观看| 国产精品一及| 免费观看精品视频网站| 中国国产av一级| 国产精品国产高清国产av| 久久久久国内视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 秋霞在线观看毛片| 国产 一区精品| 亚洲国产精品国产精品| 十八禁网站免费在线| 看黄色毛片网站| 一个人免费在线观看电影| 婷婷精品国产亚洲av| 国内精品宾馆在线| 国产三级中文精品| 免费看日本二区| 一进一出好大好爽视频| 青春草视频在线免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 黄色一级大片看看| 国产精品一区www在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 伦精品一区二区三区| 成人性生交大片免费视频hd| 精品一区二区免费观看| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品一区www在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 国产精品一及| 日韩精品中文字幕看吧| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费高清视频大片| 在线观看66精品国产| 免费看日本二区| 亚洲无线在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲美女搞黄在线观看 | 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 久久午夜亚洲精品久久| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美性猛交黑人性爽|