• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于多重修飾酶電極技術(shù)檢測大豆油中磷脂含量

    2019-01-28 08:06:52王立琦劉雨琪陳穎淑王睿智劉亞楠隋玉林于殿宇
    食品科學(xué) 2019年2期
    關(guān)鍵詞:伏安磷脂小波

    王立琦,劉雨琪,陳穎淑,王 雯,王睿智,劉亞楠,張 欣,隋玉林,,于殿宇,

    (1.哈爾濱商業(yè)大學(xué)計算機與信息工程學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150028;2.黑龍江省電子商務(wù)與信息處理重點實驗室,黑龍江 哈爾濱 150028;3.哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150076;4.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150030)

    脫膠是大豆油精煉過程中的重要環(huán)節(jié),目的是將大豆毛油中的磷脂等膠質(zhì)脫掉,是后續(xù)脫色和脫臭的基礎(chǔ),因此在油脂加工過程中需要不斷檢測大豆油中磷脂含量。傳統(tǒng)的檢測方法是進(jìn)行化學(xué)分析,檢測速度慢、成本高、受人為因素和實驗環(huán)境影響大、易污染環(huán)境,更不利于在線檢測和調(diào)控[1-3]。大豆毛油中磷脂的含量高,其中卵磷脂占主要組成部分。

    磷脂的傳統(tǒng)檢測方法包括紅外吸收光譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法[4]、薄層色譜法、核磁共振氫譜法[5]、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6]等。但這些檢測方法存在成本高、操作復(fù)雜、分析速度慢、難以快速實時檢測等特點。因此檢測大豆毛油中的磷脂先從單一的卵磷脂入手,并逐步應(yīng)用到含有多組分的大豆毛油中。

    而電化學(xué)分析技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確、易于實現(xiàn)在線檢測等優(yōu)點[7-8],近年來在食品安全領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。絲網(wǎng)印刷電極是一種一次性電極,具有制作簡單、成本低廉、靈敏度高、響應(yīng)速度快、便于攜帶等特點[9]。方便對市場上各種分析物進(jìn)行可重復(fù)的和一次性的現(xiàn)場檢測[10]。絲網(wǎng)印刷電極生物傳感器能夠彌補傳統(tǒng)氣相色譜-質(zhì)譜方法檢測費用高、速度慢等不足,常用于農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留檢測[11-13],在食品的快速檢測中也具有諸多優(yōu)點,因而廣泛用于食品衛(wèi)生安全性的檢測[14]。Li Shuguo等[15]制備了聚吡咯修飾電極的電化學(xué)傳感器,利用線性電位伏安法檢測植物油中酸價的含量,與傳統(tǒng)滴定法相比,該檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度高,需要少量的植物油樣品,無需預(yù)處理。Hsu等[16]制備了固定酶修飾印刷絲網(wǎng)電極的電化學(xué)傳感器,實現(xiàn)對甘油二脂的測定,檢測靈敏度高;Robledo等[17]采用電化學(xué)方法結(jié)合人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)測定食用植物油中生育酚同系物的含量,結(jié)果顯示,食用油中生育酚含量實測值和生產(chǎn)商標(biāo)注VE含量基本一致;王麗然等[18]采用殼聚糖為固定化材料,制備了有機相辣根過氧化物酶傳感器,經(jīng)循環(huán)伏安法實現(xiàn)了對植物油中過氧化值含量的測定,檢測結(jié)果優(yōu)于國標(biāo)碘量法,并且檢測時間短、準(zhǔn)確度較高;郭敬軒等[19]利用多孔碳修飾玻碳電極并通過循環(huán)伏安法檢測油脂中抗氧化劑丁基羥基茴香醚的含量;劉曉偉等[20]基于電化學(xué)方法,建立了電流型酶傳感器,實現(xiàn)了對花生油中黃曲霉素B1的快速檢測。

    目前,國內(nèi)外鮮有關(guān)于磷脂電化學(xué)方法檢測的報道,本研究參考磷脂的性質(zhì)和油脂中其他物質(zhì)的檢測方法,采用絲網(wǎng)印刷電極,以四氧化三鐵-殼聚糖納米復(fù)合物,然后用交聯(lián)劑將辣根過氧化物酶和膽堿氧化酶依次交聯(lián)到修飾絲網(wǎng)印刷電極表面,制備多重修飾酶電極。構(gòu)建一種酶電極,通過電化學(xué)方法間接或直接檢測分析磷脂的含量,具有廣泛的應(yīng)用前景。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    一級大豆油 九三糧油工業(yè)集團(tuán)有限公司;磷脂酶D(168 U/mg)、膽堿氧化酶(18 U/mg)、辣根過氧化物酶(265 U/mg)、磷脂酰膽堿(99%) 美國Sigma公司;納米四氧化三鐵 汕頭市西隴化工廠有限公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    CHI660D電化學(xué)工作站 上海辰華儀器公司;EI3002絲網(wǎng)印刷電極 南京中科電極有限公司;MATLAB R2015a(Math Works)、Unscrambler X10.3挪威CAMO公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品處理

    以一級大豆油為基料,通過添加一定量的大豆粉末磷脂、磷脂酶D(10 U/mL)及1%的Triton-X100作為乳化劑,制備出40 個磷脂含量不同的混合大豆油樣品,并采用國標(biāo)法(鉬藍(lán)比色法)測量樣品中磷脂含量標(biāo)準(zhǔn)值。

    1.3.2 多重修飾酶電極的制備

    由于磷脂酶D酶解磷脂生成磷脂酸和膽堿過程中不產(chǎn)生電子轉(zhuǎn)移,針對此問題本實驗研制多重修飾酶電極傳感器,制備四氧化三鐵-殼聚糖納米復(fù)合物,利用乙酸添加四氧化三鐵納米粉,超聲處理分散60 min,最后獲得一種均一穩(wěn)定的黑色懸浮液。所獲得的高度分散黑色懸浮液為四氧化三鐵-殼聚糖納米復(fù)合物,將其均勻涂于經(jīng)預(yù)處理的絲網(wǎng)印刷電極表面,獲得四氧化三鐵-殼聚糖修飾電極,然后將2.5 μL酶活力為0.8 U/μL的辣根過氧化物酶溶液和2.5 μL 1.2 U/μL的膽堿氧化酶溶液分別通過戊二醛交聯(lián)固定在修飾電極上,制得多重修飾酶電極傳感器,組裝過程見圖1。

    圖1 多重修飾酶電極的組裝過程Fig.1 Assembling of multiple modified enzyme electrodes

    1.3.3 電化學(xué)數(shù)據(jù)采集

    多重修飾酶電極使磷脂酶解副產(chǎn)物膽堿繼續(xù)氧化產(chǎn)生過氧化氫,再對酶解副產(chǎn)物過氧化氫進(jìn)一步酶解,使本不產(chǎn)生電子轉(zhuǎn)移的酶解過程,通過對其酶解副產(chǎn)物逐步酶解,間接產(chǎn)生電子轉(zhuǎn)移并轉(zhuǎn)化成電信號,然后將多重修飾酶電極與電化學(xué)工作站連接,采用循環(huán)伏安法掃描,電位掃描范圍為-0.6~0.8 V,掃描速率為0.01 V/s[21]。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    首先,對采集的原始電化學(xué)數(shù)據(jù)分別利用Savitzky-Golay平滑濾波和dbN系列小波進(jìn)行去噪處理,然后再分別利用還原峰電流與磷脂含量直線擬合、主成分回歸、偏最小二乘回歸和支持向量機回歸4 種方法建立校正回歸模型。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 磷脂循環(huán)伏安曲線

    圖2 磷脂的循環(huán)伏安曲線Fig.2 Cyclic voltammograms of phospholipids at different concentrations

    如圖2所示,磷脂質(zhì)量濃度為5.87~304.89 mg/L,隨著磷脂質(zhì)量濃度的增加,大豆油樣品的循環(huán)伏安曲線的還原峰電流越小,在磷脂質(zhì)量濃度為5.87~304.89 mg/L范圍內(nèi),還原峰電流大小與磷脂的質(zhì)量濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

    2.2 電化學(xué)數(shù)據(jù)預(yù)處理

    由于人工操作失誤、儀器異常、環(huán)境(如溫度、濕度等因素的變化)或者樣品本身等原因[22],測定樣品時經(jīng)常會出現(xiàn)個別異常樣本,這些異常樣本不能用于模型的建立,需將其剔除。本實驗基于原始電化學(xué)數(shù)據(jù)建立了偏最小二乘校正模型,根據(jù)預(yù)測值與實際值的偏差剔除異常樣本2 個,為提高模型預(yù)測精度,再分別利用Savitzky-Golay平滑濾波和dbN系列小波對原始電化學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行去噪處理。

    2.2.1 平滑去噪

    Savitzky-Golay法最突出的優(yōu)點是它能夠有效地保留數(shù)據(jù)的原始特征,其本質(zhì)就是利用窗口內(nèi)部各個點之間的加權(quán)來計算平滑后的新值,關(guān)鍵在于如何選擇多項式次數(shù)和窗口點數(shù),選擇不同的組合,結(jié)果也會不同[23]。本實驗選取窗函數(shù)大小為5~15 點之間的奇數(shù),多項式次數(shù)為2、3、4、5進(jìn)行驗證,并通過平滑降噪后的均方誤差、信噪比、數(shù)據(jù)能量占原始能量的比例和平滑度來評價去噪的效果。窗函數(shù)較大可以提高信噪比,但難免會導(dǎo)致信號失真,經(jīng)分析對比平滑去噪效果可知,窗函數(shù)大小為13 點、多項式次數(shù)為2時,平滑處理去噪效果最好,其均方誤差為0.041 685,信噪比為28.26,數(shù)據(jù)能量占原始能量的比例為0.989 4,平滑度為0.409 61。為獲得電化學(xué)數(shù)據(jù)降噪處理的最佳效果,本實驗再采用小波去噪法對電化學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行降噪處理。

    2.2.2 小波去噪

    采用Daubechies小波對電化學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行多尺度小波分解以達(dá)到消除噪聲的目的。Daubechies小波一般簡寫成dbN,N是小波的階數(shù),Daubechies小波基是一個小波族[24],db1~db10有10 個小波基,如何選擇最適合的小波基,目前的研究報道中鮮見有較好的方法,只能通過反復(fù)實驗進(jìn)行篩選。本實驗中樣本長度為282,db9、db10最大分解尺度3,為方便分析比較,將其他小波基的分解尺度也設(shè)定為3,閾值方式選擇基于Stein無偏似然估計的軟閾值估計,以不同小波基對電化學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行去噪,并獲得了不同小波基函數(shù)去噪后的均方誤差、信噪比、去噪信號在原信號中的能量比例和平滑度,經(jīng)分析比較可知,db6小波基函數(shù)時,平滑度最小為0.086 19,去噪效果最好,并且其均方誤差較小為0.011 37,信噪比較大為30.21,去噪信號在原信號中的能量比例為0.999 8。

    信號的小波分解需根據(jù)信號長度確定最大分解層數(shù),本實驗中校正集樣本長度為282,最大分解尺度為4,表明本實驗的電化學(xué)數(shù)據(jù)在去噪中的分解尺度可為2、3或4。對于多少尺度分解能達(dá)到最佳效果,還要通過實驗的方法確定,將db6小波基在不同分解尺度和4 種閾值方式下分別對電化學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行降噪處理,經(jīng)綜合比較分析去噪結(jié)果發(fā)現(xiàn)db6經(jīng)3尺度分解去噪效果較好,且4 種閾值方式中基于Stein無偏似然估計的軟閾值估計方式去噪的均方誤差為0.010 77,信噪比為30.21,去噪信號在原信號中的能量比例為0.999 8,平滑度為0.086 19,去噪效果最佳。

    綜合以上研究結(jié)果,將基于Stein無偏似然估計的軟閾值估計方式的db6小波基對大豆油脂的電化學(xué)伏安曲線數(shù)據(jù)進(jìn)行三層小波分解去噪處理與Savitzky-Golay平滑處理最佳效果進(jìn)行分析對比,經(jīng)小波去噪和平滑處理后的伏安曲線降噪效果對比見表1。經(jīng)表1對比分析,整體來看小波去噪效果明顯優(yōu)于Savitzky-Golay平滑處理,因此本實驗采用小波去噪方法對原始電化學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

    表1 經(jīng)小波去噪和平滑處理后的伏安曲線降噪效果對比Table1 Comparison of noise reduction of voltammograms by Savitzky-Golay smoothing filter and db6 wavelet three-layer decomposition

    2.3 校正模型的建立

    為構(gòu)建可靠、穩(wěn)定的分析校正模型,分別采用4 種方法建立去噪后的電化學(xué)數(shù)據(jù)與磷脂質(zhì)量濃度之間的回歸模型,首先利用還原峰電流與磷脂含量之間進(jìn)行直線擬合,再采用主成分回歸[25]、偏最小二乘回歸[26]和支持向量機回歸[27]建立校正回歸模型,并采用決定系數(shù)R2、預(yù)測均方根誤差和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差3 種評價指標(biāo)來衡量模型預(yù)測效果,通過分析對比4 種方法的建模效果,以期尋找出最佳磷脂含量檢測模型。

    2.3.1 峰電流與磷脂質(zhì)量濃度的線性擬合

    多重修飾酶電極在不同質(zhì)量濃度的磷脂溶液中經(jīng)掃描得到其電流-電位循環(huán)伏安曲線,為明確循環(huán)伏安曲線的峰電流與磷脂質(zhì)量濃度的關(guān)系,首先提取曲線的峰值,借助還原峰電流與磷脂質(zhì)量濃度化學(xué)值之間進(jìn)行簡單的單變量線性擬合。

    圖3 還原峰電流與磷脂質(zhì)量濃度關(guān)系圖Fig.3 Relationship between reduction peak current and phospholipid concentration

    將提取還原峰電流與磷脂質(zhì)量濃度化學(xué)值進(jìn)行簡單的線性擬合,如圖3所示。隨著磷脂質(zhì)量濃度的增加,還原峰電流不斷減小,其線性回歸方程為ipc=-1.02lgC+4.341,磷脂質(zhì)量濃度在5.87~304.89 mg/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為1.68 mg/L(RSN=3)。其決定系數(shù)R2為0.987 6,預(yù)測均方根誤差為0.557 1,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.93%。

    2.3.2 回歸校正模型

    由于循環(huán)伏安曲線的峰電流易受儀器或其他環(huán)境因素的影響而產(chǎn)生波動,實際和提取的峰電流可能存在一定的偏差[28],所以簡單的單變量線性擬合模型對磷脂質(zhì)量濃度的預(yù)測并不一定能夠滿足實際檢測要求。為建立更高精度的預(yù)測模型,再利用主成分回歸、偏最小二乘回歸及支持向量機回歸在電化學(xué)數(shù)據(jù)與磷脂質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)值之間建立回歸校正模型,以期尋找最佳的磷脂檢測模型。

    首先對數(shù)據(jù)進(jìn)行樣本分集,將38 個樣品按磷脂含量的多少進(jìn)行排序,按照一定梯度變化從中選取28 組作為訓(xùn)練集樣本,用于建立模型,剩下的10 組數(shù)據(jù)作為預(yù)測集樣本,用于驗證模型的適用性,訓(xùn)練集樣品和預(yù)測樣品集的磷脂含量平均值應(yīng)盡量接近,并且訓(xùn)練集包含樣品中的最大值和最小值,樣本校正集和預(yù)測集統(tǒng)計結(jié)果見表2。

    表2 樣本校正集和預(yù)測集統(tǒng)計結(jié)果Table2 Statistical analysis of calibration and prediction sets

    利用美國MathWorks公司的Matlab R2015a數(shù)據(jù)分析軟件中的主成分回歸算法[29]、偏最小二乘回歸算法及Unscrambler軟件中的支持向量機回歸算法[30]并采用4 種核函數(shù)即線性核函數(shù)、多項式核函數(shù)、徑向基核函數(shù)和神經(jīng)元的非線性作用函數(shù)核函數(shù)對大豆油中磷脂含量的化學(xué)值和電化學(xué)數(shù)據(jù)建立回歸校正模型,然后將預(yù)測結(jié)果與實際值進(jìn)行對比,分析計算其誤差。經(jīng)研究,基于神經(jīng)元的非線性作用函數(shù)核函數(shù)的支持向量機回歸建模效果很差,所以之后將不再進(jìn)行討論,建模效果評價指標(biāo)對比見表3。

    表3 建模效果評價指標(biāo)對比Table3 Comparison of prediction performances of regression models

    由表3可以看出,主成分回歸模型建立效果比直線擬合差,偏最小二乘回歸及支持向量機回歸模型建立效果均優(yōu)于直線擬合模型。經(jīng)分析比較可知,基于徑向基核函數(shù)支持向量機回歸方法建立回歸校正模型對未知樣品的預(yù)測效果最佳,支持向量機回歸(徑向基核函數(shù))的回歸預(yù)測模型如圖4所示。

    圖4 支持向量機回歸(徑向基核函數(shù))回歸預(yù)測模型Fig.4 SVMR prediction model (based on radial basis function)

    基于徑向基核函數(shù)的支持向量機回歸對電化學(xué)數(shù)據(jù)與磷脂含量標(biāo)準(zhǔn)值建立的回歸校正模型對未知樣品預(yù)測效果最佳,樣本均分布在擬合線附近,其模型的決定系數(shù)R2為0.998 7,預(yù)測均方根誤差為0.288 9,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.55%,可以滿足實際檢測要求。

    3 結(jié) 論

    利用多重修飾的酶電極采集不同磷脂含量的大豆油樣本的電化學(xué)循環(huán)伏安曲線,通過去噪處理使循環(huán)伏安曲線的還原峰電流與大豆油中的磷脂含量進(jìn)行直線擬合。再分別利用主成分回歸、偏最小二乘回歸和支持向量機回歸4 種方法根據(jù)其對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)值建立回歸預(yù)測模型,研究發(fā)現(xiàn)基于徑向基核函數(shù)的支持向量機回歸模型預(yù)測效果最佳,統(tǒng)計指標(biāo)均達(dá)到預(yù)期效果,滿足實際檢測要求。本研究可為實現(xiàn)油脂中磷脂實時有效的在線檢測提供理論依據(jù)。

    猜你喜歡
    伏安磷脂小波
    用伏安法測電阻
    構(gòu)造Daubechies小波的一些注記
    基于MATLAB的小波降噪研究
    電子制作(2019年13期)2020-01-14 03:15:32
    大黃酸磷脂復(fù)合物及其固體分散體的制備和體內(nèi)藥動學(xué)研究
    中成藥(2019年12期)2020-01-04 02:02:24
    柚皮素磷脂復(fù)合物的制備和表征
    中成藥(2018年7期)2018-08-04 06:04:18
    辣椒堿磷脂復(fù)合凝膠的制備及其藥動學(xué)行為
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:31
    基于改進(jìn)的G-SVS LMS 與冗余提升小波的滾動軸承故障診斷
    白楊素磷脂復(fù)合物的制備及其藥動學(xué)行為
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    基于LABVIEW的光電池伏安特性研究
    電子制作(2016年23期)2016-05-17 03:53:41
    通過伏安特性理解半導(dǎo)體器件的開關(guān)特性
    久久九九热精品免费| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产高清激情床上av| 90打野战视频偷拍视频| 成人无遮挡网站| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品免费久久久久久久清纯| 国产日本99.免费观看| 国内精品久久久久精免费| 日本成人三级电影网站| 国产精品,欧美在线| 夜夜爽天天搞| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 欧美乱色亚洲激情| av天堂在线播放| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲人与动物交配视频| netflix在线观看网站| 午夜福利高清视频| 露出奶头的视频| av女优亚洲男人天堂| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产亚洲精品av在线| 国产乱人视频| 日韩欧美免费精品| 亚洲av不卡在线观看| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 此物有八面人人有两片| 极品教师在线免费播放| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品1区2区在线观看.| 最新中文字幕久久久久| 丝袜美腿在线中文| 99久久成人亚洲精品观看| 国产乱人伦免费视频| 精华霜和精华液先用哪个| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 99久久精品国产亚洲精品| 在线国产一区二区在线| 美女大奶头视频| 观看美女的网站| 欧美3d第一页| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品,欧美在线| 一本久久中文字幕| 中文字幕久久专区| 午夜免费成人在线视频| 成人午夜高清在线视频| 级片在线观看| 国产高潮美女av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久色成人| 日韩欧美在线乱码| 欧美在线黄色| 男人的好看免费观看在线视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 两个人的视频大全免费| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产成人欧美在线观看| 国产精品国产高清国产av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 99久久精品一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| 听说在线观看完整版免费高清| 国内精品久久久久久久电影| 少妇熟女aⅴ在线视频| 91av网一区二区| а√天堂www在线а√下载| 国产精品伦人一区二区| 九九在线视频观看精品| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲成a人片在线一区二区| 一本综合久久免费| 久久久成人免费电影| 亚洲精华国产精华精| 久久久久精品国产欧美久久久| 熟女电影av网| 欧美性猛交黑人性爽| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久久久久久久成人| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久色成人| 国产午夜精品论理片| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 久久人妻av系列| 精品一区二区三区人妻视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 成年免费大片在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品免费一区二区三区在线| 熟女人妻精品中文字幕| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 波多野结衣高清无吗| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 色视频www国产| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产不卡一卡二| 中国美女看黄片| x7x7x7水蜜桃| 国产在线精品亚洲第一网站| 看免费av毛片| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美区成人在线视频| 一个人看视频在线观看www免费| 久久香蕉精品热| 波多野结衣高清无吗| 色吧在线观看| 露出奶头的视频| 亚洲精华国产精华精| 国产日本99.免费观看| 国产精品一区二区免费欧美| 特级一级黄色大片| 精品国产亚洲在线| 亚洲美女黄片视频| 欧美精品国产亚洲| 中亚洲国语对白在线视频| 国产大屁股一区二区在线视频| 色哟哟哟哟哟哟| 淫秽高清视频在线观看| 免费黄网站久久成人精品 | 亚洲人与动物交配视频| 亚洲经典国产精华液单 | 韩国av一区二区三区四区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品久久久久久人妻精品电影| www.熟女人妻精品国产| 亚洲电影在线观看av| 亚洲av.av天堂| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品不卡视频一区二区 | 中文在线观看免费www的网站| 国产午夜福利久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 色综合欧美亚洲国产小说| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲精品色激情综合| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产免费男女视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产人妻一区二区三区在| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 91久久精品国产一区二区成人| 高清在线国产一区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 中文字幕熟女人妻在线| 高清在线国产一区| 久久精品人妻少妇| 97热精品久久久久久| 国内精品久久久久精免费| 日本五十路高清| 99久久无色码亚洲精品果冻| 丁香六月欧美| 亚洲美女视频黄频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 99国产精品一区二区三区| 亚洲激情在线av| 亚洲人成电影免费在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 五月玫瑰六月丁香| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲精品在线美女| 欧美成人性av电影在线观看| 成人精品一区二区免费| 色吧在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 看片在线看免费视频| 精品福利观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 能在线免费观看的黄片| 免费av不卡在线播放| 少妇的逼好多水| 久久草成人影院| 在线天堂最新版资源| 成人特级av手机在线观看| 99久国产av精品| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| a级毛片a级免费在线| 色av中文字幕| 久久欧美精品欧美久久欧美| 禁无遮挡网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 在线播放国产精品三级| 无遮挡黄片免费观看| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 午夜免费男女啪啪视频观看 | 深夜a级毛片| 性色avwww在线观看| 人人妻人人看人人澡| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品98久久久久久宅男小说| 18禁在线播放成人免费| 亚洲av成人精品一区久久| 精品久久久久久,| 十八禁人妻一区二区| 亚洲成av人片在线播放无| 日本 av在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 免费观看人在逋| av在线老鸭窝| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日韩亚洲欧美综合| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲国产欧美人成| 色av中文字幕| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久久国产成人免费| 特级一级黄色大片| 国产精品一及| 在线看三级毛片| 全区人妻精品视频| 观看美女的网站| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲精品日韩av片在线观看| 99热6这里只有精品| 熟女电影av网| 老鸭窝网址在线观看| 少妇的逼水好多| 亚洲激情在线av| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人国产一区最新在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 黄色配什么色好看| 欧美一区二区亚洲| 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜影院日韩av| 91麻豆精品激情在线观看国产| 最近视频中文字幕2019在线8| 青草久久国产| 性欧美人与动物交配| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 久久久久免费精品人妻一区二区| АⅤ资源中文在线天堂| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 午夜a级毛片| 在线免费观看不下载黄p国产 | 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美丝袜亚洲另类 | 精品午夜福利在线看| 色综合欧美亚洲国产小说| 好男人电影高清在线观看| 日韩高清综合在线| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲无线在线观看| 脱女人内裤的视频| 美女黄网站色视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜激情欧美在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 免费观看的影片在线观看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 有码 亚洲区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产免费av片在线观看野外av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美+日韩+精品| 少妇的逼好多水| av黄色大香蕉| 日本 av在线| 首页视频小说图片口味搜索| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲av免费高清在线观看| 伦理电影大哥的女人| 淫秽高清视频在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 在线观看一区二区三区| 1000部很黄的大片| 一个人免费在线观看电影| 可以在线观看毛片的网站| 国产91精品成人一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| 亚洲自拍偷在线| 能在线免费观看的黄片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 97热精品久久久久久| 亚洲国产精品合色在线| 日本a在线网址| 9191精品国产免费久久| 午夜福利免费观看在线| 亚洲在线自拍视频| 婷婷六月久久综合丁香| 国产久久久一区二区三区| 成人三级黄色视频| 性欧美人与动物交配| 97碰自拍视频| 午夜激情福利司机影院| 97碰自拍视频| 男插女下体视频免费在线播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 熟女电影av网| 国产成年人精品一区二区| 青草久久国产| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲成人免费电影在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 亚洲精品粉嫩美女一区| 可以在线观看毛片的网站| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 可以在线观看毛片的网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜精品一区二区三区免费看| 久久精品国产清高在天天线| 级片在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| av欧美777| 如何舔出高潮| 村上凉子中文字幕在线| 老司机午夜十八禁免费视频| 人人妻人人澡欧美一区二区| 成年免费大片在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看 | 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 午夜福利免费观看在线| 韩国av一区二区三区四区| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产探花在线观看一区二区| 国产一区二区在线av高清观看| 国产成人a区在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产综合懂色| 日本精品一区二区三区蜜桃| 精品久久久久久久久久免费视频| 免费高清视频大片| 丁香六月欧美| 亚洲av电影在线进入| 丁香六月欧美| 亚洲av电影在线进入| 国产在线男女| 舔av片在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 人人妻人人看人人澡| 成人特级av手机在线观看| 丁香六月欧美| 中文字幕熟女人妻在线| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 嫩草影院精品99| 国产在线男女| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产亚洲精品av在线| 我要看日韩黄色一级片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久精品吃奶| 国产精品1区2区在线观看.| 日本 欧美在线| 国语自产精品视频在线第100页| 69av精品久久久久久| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国语自产精品视频在线第100页| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美最新免费一区二区三区 | 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲七黄色美女视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 69人妻影院| 黄色配什么色好看| 国模一区二区三区四区视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产欧美日韩精品一区二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产熟女xx| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 淫秽高清视频在线观看| 久久久久久久久久成人| 99久久无色码亚洲精品果冻| 熟女电影av网| 简卡轻食公司| av在线观看视频网站免费| 成人鲁丝片一二三区免费| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲激情在线av| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品三级大全| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 性色av乱码一区二区三区2| 日本熟妇午夜| 午夜福利在线观看吧| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| av女优亚洲男人天堂| 久久精品人妻少妇| 成年女人毛片免费观看观看9| 在线观看一区二区三区| 最近最新中文字幕大全电影3| 五月玫瑰六月丁香| 看黄色毛片网站| 欧美一区二区亚洲| 看十八女毛片水多多多| 国产亚洲av嫩草精品影院| 悠悠久久av| 美女 人体艺术 gogo| av天堂在线播放| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲精品影视一区二区三区av| 精品不卡国产一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲成人久久爱视频| av在线观看视频网站免费| 久久草成人影院| 国产精品av视频在线免费观看| 国产综合懂色| 久久精品综合一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 宅男免费午夜| 国产精品伦人一区二区| 欧美三级亚洲精品| 久久久国产成人免费| 97碰自拍视频| 特大巨黑吊av在线直播| 高清日韩中文字幕在线| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲,欧美精品.| 国产日本99.免费观看| 悠悠久久av| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 男女之事视频高清在线观看| 欧美日韩综合久久久久久 | 美女高潮的动态| 一a级毛片在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 深夜精品福利| 中文字幕高清在线视频| 成人午夜高清在线视频| 欧美三级亚洲精品| 久久久久性生活片| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 色哟哟哟哟哟哟| 午夜激情福利司机影院| 在线观看一区二区三区| 亚洲在线观看片| 亚洲无线在线观看| 成人国产综合亚洲| 欧美乱妇无乱码| 成人国产一区最新在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 久久人妻av系列| 亚洲无线在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 美女cb高潮喷水在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 黄片小视频在线播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产三级中文精品| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 韩国av一区二区三区四区| 毛片一级片免费看久久久久 | 91av网一区二区| 日韩欧美国产在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 看十八女毛片水多多多| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| av在线观看视频网站免费| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产黄a三级三级三级人| 91狼人影院| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产午夜福利久久久久久| 在线看三级毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产精品一区二区免费欧美| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 日本黄大片高清| 久久性视频一级片| 日本黄大片高清| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美bdsm另类| 又爽又黄a免费视频| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜久久久久精精品| 色综合站精品国产| 国产黄片美女视频| 一进一出抽搐动态| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 免费在线观看日本一区| 日日干狠狠操夜夜爽| 永久网站在线| 老司机午夜福利在线观看视频| 97超视频在线观看视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 午夜免费激情av| 又粗又爽又猛毛片免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产欧美日韩精品亚洲av| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 在线天堂最新版资源| 在线看三级毛片| 亚洲综合色惰| 91九色精品人成在线观看| 国产成人影院久久av| av中文乱码字幕在线| 日韩欧美国产在线观看| 国产成年人精品一区二区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久久久久久午夜电影| 免费一级毛片在线播放高清视频| 最近中文字幕高清免费大全6 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | av黄色大香蕉| av在线天堂中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久久久久久久大av| 18+在线观看网站| 在线观看午夜福利视频| 最好的美女福利视频网| 男女那种视频在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 日韩欧美 国产精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 色综合站精品国产| 日本成人三级电影网站| 麻豆av噜噜一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 真实男女啪啪啪动态图| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 在线国产一区二区在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 中文字幕av成人在线电影| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 免费电影在线观看免费观看| 一本综合久久免费| 亚洲欧美日韩高清专用| av欧美777| 人人妻人人看人人澡| 午夜免费激情av| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产探花在线观看一区二区| 欧美黑人巨大hd| 波多野结衣高清无吗| 乱码一卡2卡4卡精品| 观看美女的网站| 日韩欧美 国产精品| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品精品国产色婷婷| 永久网站在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 日本黄色视频三级网站网址| 免费看日本二区| 国产黄a三级三级三级人| 欧美最新免费一区二区三区 | 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日本成人三级电影网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 少妇的逼好多水| 又紧又爽又黄一区二区| 性欧美人与动物交配| 精品久久国产蜜桃| 麻豆成人av在线观看| 国产成人欧美在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲专区国产一区二区| 欧美中文日本在线观看视频| 国产成人福利小说| 欧美区成人在线视频| 极品教师在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 在线天堂最新版资源| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲最大成人av| 精品一区二区三区人妻视频| 国产成人啪精品午夜网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产高清视频在线播放一区| 日韩欧美国产在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩精品青青久久久久久| 国产 一区 欧美 日韩|