楊小斌,周愛梅*,王 爽,黃煒超,王 晉
(華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,廣東 廣州 510642)
藍(lán)圓鲹(Decapterus maruadsi)又稱巴浪魚,其生命周期短、生長速度快,在我國的年漁獲量高達(dá)60多萬t,是我國主要的經(jīng)濟(jì)魚類之一[1]。但藍(lán)圓鲹肉質(zhì)松軟、肉色暗,離水后極易發(fā)生腐敗及氧化變質(zhì),是典型的低值魚類。目前,將海洋低值魚加工成魚油并應(yīng)用于食品中是低值魚高值化利用的主要途徑之一[2-3]。藍(lán)圓鲹魚油的主要成分為不飽和脂肪酸,相對含量高達(dá)59.57%,且主要為二十碳五烯酸(7.86%)、二十二碳六烯酸(16.76%),具有延緩衰老、降低血脂血壓、預(yù)防心腦動脈硬化和保護(hù)大腦及心臟等生理功能[4]。但魚油的高度不飽和性使其對氧氣、光和熱極其敏感,在自由基作用下極易發(fā)生氧化酸敗,降低其營養(yǎng)價值[5]。因此,選擇合適的穩(wěn)態(tài)化技術(shù),有效保護(hù)魚油的生理活性并擴(kuò)大其應(yīng)用范圍,是開發(fā)魚油產(chǎn)品亟待解決的問題之一[6]。微膠囊技術(shù)可將富含多不飽和脂肪酸的魚油進(jìn)行微膠囊化,在魚油周圍形成由壁材組成的保護(hù)層[7-8],不僅能有效保護(hù)魚油,減少外界環(huán)境(如O2、pH值、水分、溫度等)的破壞,防止其見光分解、氧化、揮發(fā)[5,9];而且能增加魚油的流動性和分散性;此外,魚油微膠囊的囊壁還能有效地控制魚油的釋放速率,提高其消化吸收率,延長產(chǎn)品貨架期[10-11]。微膠囊在其成囊的過程中,物質(zhì)與物質(zhì)之間會發(fā)生反應(yīng)[12],因此,深入探究微膠囊產(chǎn)品的微觀結(jié)構(gòu)、光學(xué)性質(zhì)、穩(wěn)定性、流變性及其在胃、腸道中的消化率和釋放性能,也是合理應(yīng)用微膠囊的前提[6,13]。石燕等[12]利用傅里葉變換紅外光譜(Fourier transform infrared spectroscopy,F(xiàn)TIR)法和計算機(jī)輔助分析法研究壁材乳清蛋白和阿拉伯膠在油脂微膠囊形成過程中的相互作用。牛廣財?shù)萚14]探討南瓜籽油微膠囊產(chǎn)品的穩(wěn)定性與緩釋性能,進(jìn)行了高溫加速實(shí)驗(yàn)及其在模擬胃液和腸液中的釋放性實(shí)驗(yàn)。程超等[15]對鴨跖草黃酮類物質(zhì)的微膠囊化及其微膠囊的釋放特性和穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。劉斯博[16]利用激光掃描共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscope,LSCM)對亞麻籽油微膠囊進(jìn)行熒光染色觀察,更加直觀地了解微膠囊的釋放行為,從感官評價、熱量成分檢測、芯材的脂肪酸組成、粒徑分布、速溶性等方面考察自制微膠囊的性能。何慧子[17]采取熒光標(biāo)記示蹤法間接測定共軛亞油酸(conjugated linoleic acid,CLA)在動物消化道內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)情況,證明CLA在大鼠胃中釋放極少,但在進(jìn)入小腸后釋放出大部分CLA,表現(xiàn)了較好的緩釋性能。
本研究從微膠囊的微觀結(jié)構(gòu)與釋放性能出發(fā),研究了藍(lán)圓鲹魚油微膠囊產(chǎn)品的形態(tài)結(jié)構(gòu)、其在微膠囊形成過程中與壁材的相互作用及其體外模擬消化特性,對深入探究微膠囊制備條件-膜結(jié)構(gòu)-性能的關(guān)系及其在應(yīng)用環(huán)境中的動態(tài)行為變化規(guī)律具有理論意義。
藍(lán)圓鲹魚油為實(shí)驗(yàn)室自制,含有約60%的不飽和脂肪酸;明膠(食品級) 羅塞洛明膠(廣東)有限公司;阿拉伯樹膠、海藻糖(食品級) 美國唐瑞斯食品物料公司;其余試劑均為國產(chǎn)分析純。
JOYN-8000噴霧干燥機(jī) 上海橋躍電子有限公司;LSM700 LSCM 德國Zeiss公司;90plus粒度儀 美國布魯克海文儀器公司;FJ200-S型數(shù)顯高速分散儀 上海嫩谷機(jī)電設(shè)備有限公司;VERTEX 70 FTIR儀 德國BRUKER公司;ZDJ-5型自動電位滴定儀 上海精科儀器有限公司。
1.3.1 魚油微膠囊的制備
通過前期實(shí)驗(yàn),從乳液乳化穩(wěn)定性、黏度和微膠囊產(chǎn)率3個方面綜合考慮,選取了明膠、阿拉伯膠及海藻糖作為壁材,確定其質(zhì)量比為3∶5∶2。在水中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%壁材,用磁力攪拌器充分?jǐn)嚢杈鶆?,隨之加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)25%藍(lán)圓鲹魚油。通過高速分散、高壓均質(zhì)形成均勻的乳液,最后采用噴霧干燥法制備微膠囊化魚油。
1.3.2 微膠囊包埋率的測定
1.3.2.1 魚油微膠囊表面油質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定
稱取質(zhì)量為m的魚油微膠囊產(chǎn)品,用30 mL石油醚輕微振蕩條件下準(zhǔn)確浸提5 min,過濾。用5 mL石油醚洗滌濾渣,過濾,將濾液全部轉(zhuǎn)移至已恒質(zhì)量(m1)的圓底燒瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸干石油醚,105 ℃烘干至恒質(zhì)量(m2)[18]。表面魚油質(zhì)量分?jǐn)?shù)按公式(1)計算。
1.3.2.2 魚油微膠囊總油質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定
用石油醚作為溶劑,準(zhǔn)確稱取質(zhì)量為m1的魚油微膠囊產(chǎn)品,加20 mL熱水,使樣品充分溶解后,再加入40 mL石油醚-乙醇混合液充分萃取,重復(fù)萃取2 次,合并萃取液并全部轉(zhuǎn)移至恒質(zhì)量(m2)的圓底燒瓶中,萃取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)大部分溶劑后再放入105 ℃烘箱中烘至質(zhì)量恒定(m3)[19]。總油質(zhì)量分?jǐn)?shù)按公式(2)計算。
微膠囊包埋率按式(3)計算。
1.3.3 魚油微膠囊微觀結(jié)構(gòu)表征
1.3.3.1 SEM觀察
利用掃描電子顯微鏡(s c a n n i n g e l e c t r o n microscope,SEM)分析魚油微膠囊產(chǎn)品在形貌上的特點(diǎn),闡釋產(chǎn)品性質(zhì)和微觀結(jié)構(gòu)的關(guān)系[20]。在貼有雙面膠的樣品平臺上撒上一定量的魚油微膠囊產(chǎn)品,用毛細(xì)管稍稍壓實(shí),使部分粉末陷入雙面膠中,用刀片刮去表面粉末后,把多余的微膠囊吹凈,隨之置于離子濺射儀中在10 mA電流下噴金,使材料表面鍍上一層鉑膜,然后用SEM觀察微膠囊的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
1.3.3.2 LSCM觀察
采用LSCM觀察乳液及微膠囊的微觀結(jié)構(gòu)[21]。配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.02%尼羅紅(標(biāo)記油脂)和0.1%尼羅藍(lán)(標(biāo)記蛋白)溶解于1,2-丙二醇和水的混合溶液(體積比50∶1)中,混合均勻后于4 ℃下避光保存。觀測時,將40 μL混合染料加入1 mL樣品中,充分混合均勻后。選擇激發(fā)波長為488 nm的Ar離子和633 nm的He/Ne離子激光預(yù)掃描,采集熒光圖像[22]。
1.3.4 魚油微膠囊囊壁結(jié)構(gòu)形成過程中的相互作用分析
1.3.4.1 FTIR分析
采用KBr壓片法,對樣品通過FTIR儀進(jìn)行分析[23]。稱取約1 mg樣品與100 mg純KBr充分研磨混勻后放入模具中壓片,并以KBr空白壓片作參比,于4 000~400 cm-1進(jìn)行掃描,儀器分辨率為4 cm-1,掃描次數(shù)32 次。分別對魚油、復(fù)合壁材、魚油微膠囊產(chǎn)品進(jìn)行分析。
1.3.4.2 基于蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)含量變化的FTIR分析
對明膠、復(fù)合壁材和魚油微膠囊產(chǎn)品的FTIR吸收曲線進(jìn)行二階求導(dǎo)[23],根據(jù)光譜數(shù)據(jù)采用Peakfit 4.12軟件分析位于1 600~1 700 cm-1波數(shù)范圍屬于酰胺I帶特征峰的譜圖,先校正基線,然后用Gaussian去卷積,再用二階導(dǎo)數(shù)擬合,進(jìn)行多次擬合使殘差最小,擬合系數(shù)大于95%。根據(jù)峰面積計算各二級結(jié)構(gòu)含量,各子峰與二級結(jié)構(gòu)的對應(yīng)關(guān)系為:1 615~1 637 cm-1和1682~1700 cm-1處為β-折疊;1 646~664 cm-1處為α-螺旋;1 637~1 645 cm-1處為無規(guī)卷曲;1 664~1 681 cm-1處為β-轉(zhuǎn)角[24]。
1.3.5 魚油微膠囊體外釋放特性測定
1.3.5.1 體外消化液的配制
模擬口腔唾液:含有黏蛋白和各種鹽分的模擬唾液樣品采用Sarkar等[24]的方法制備。模擬胃液:取鹽酸23.4 mL,加100 mL水,配制成稀鹽酸溶液;然后取16.4 mL稀鹽酸溶液加800 mL水及10 g胃蛋白酶,搖勻后加水定容至1 000 mL,調(diào)節(jié)pH值至2.0。模擬腸液:準(zhǔn)確稱取3.2 g磷酸二氫鉀,加入蒸餾水定容至250 mL,然后用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8;稱取10 g胰酶,加入適量蒸餾水溶解,將pH 6.8的磷酸二氫鉀溶液與胰酶溶液混合均勻,加蒸餾水定容至500 mL,調(diào)節(jié)pH值至6.8。
1.3.5.2 pH-stat法測定FFA釋放率
參考Qiu Chaoying等[25]的方法。取20 mL微膠囊復(fù)原液加入20 mL模擬口腔唾液,使最終混合物含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%魚油,整個體系的pH值為6.80?;旌暇鶆蚝笥?00 r/min的搖床中(37±1)℃保溫10 min。然后取20 mL模擬口腔唾液消化后的產(chǎn)物與模擬胃液按體積比1∶1混合,混合反應(yīng)液用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至2.5后于200 r/min的搖床中(37±1)℃保溫2 h。取30 mL模擬胃液消化產(chǎn)物加入干凈燒杯中,用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0,混合液加入含有3.5 mL 187.5 mg/mL膽汁鹽、1.5 mL CaCl2和NaCl溶液的模擬小腸液?;旌虾笳{(diào)節(jié)pH值至7.0,迅速加入2.5 mL脂肪酶開始反應(yīng),在消化過程中用pH計檢測pH值的變化,并用0.05 mol/L NaOH溶液滴定使其保持在pH 7.0,記錄所消耗的NaOH溶液體積。采用不加魚油的空載乳液作與上述相同的消化過程,測定NaOH溶液消耗量并從相應(yīng)樣品中扣除,根據(jù)消化過程中消耗的NaOH溶液體積,按公式(4)計算樣品的游離脂肪酸(free fatty acids,F(xiàn)FA)釋放率。
式中:V(NaOH)為滴定所用NaOH溶液體積/L;c(NaOH)為NaOH的濃度/(mol/L);M魚油為魚油的平均摩爾質(zhì)量/(g/mol);m魚油為油相的質(zhì)量/g。
實(shí)驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)均為至少兩次測定的平均值,并計算標(biāo)準(zhǔn)偏差,利用Origin 8.5軟件作圖,利用SPSS 7.0軟件Duncan’s multiple range test進(jìn)行多組樣本間差異顯著性分析并進(jìn)行多重比較,P<0.05表示差異顯著。
2.1.1 SEM觀察結(jié)果
圖1 SEM觀察魚油微膠囊形態(tài)結(jié)構(gòu)Fig.1 Morphological structure of fi sh oil microcapsules observed by scanning electron microscope
微膠囊顆粒的結(jié)構(gòu)狀態(tài)與微膠囊的流動性、保護(hù)芯材的能力密切相關(guān)。從圖1可以看出,所制備的藍(lán)圓鲹魚油微膠囊顆粒外形較圓整,基本接近球形,大部分顆粒表面光滑、致密、無裂痕,整個表面是連續(xù)的。
2.1.2 LSCM觀察結(jié)果
圖2 LSCM觀察魚油微膠囊形態(tài)結(jié)構(gòu)Fig.2 Morphological structure of fi sh oil microcapsules observed by LSCM
LSCM是用于分析多組分聚合物共混體系形態(tài)結(jié)構(gòu)最常用的方法。圖中綠色熒光為魚油部分,紅色熒光為蛋白質(zhì)部分。從圖2a中可以看出,采用復(fù)合壁材包埋魚油形成的乳液,蛋白與多糖復(fù)合壁材已經(jīng)將魚油完全包裹,形成了較為緊密、連續(xù)的球形囊殼結(jié)構(gòu),且為單核結(jié)構(gòu),與SEM觀察結(jié)果一致。從圖2b中可以看出,噴霧干燥后魚油微膠囊壁材集中區(qū)域熒光強(qiáng)度較為均勻,說明蛋白類壁材已均勻地分布于微膠囊的囊壁上,而標(biāo)記油脂的綠色熒光很弱,幾乎沒有觀測到,說明壁材已經(jīng)將魚油包埋起來。整體上看,微膠囊未出現(xiàn)大范圍聚集,包埋效果良好。
由圖3中可以看出,明膠FTIR圖譜中3 435 cm-1處為O—H的伸縮振動吸收峰,1 634 cm-1處為C=O或反對稱羧基伸縮振動,1 400 cm-1處為C—H彎曲振動。在復(fù)合壁材紅外光譜中3 387 cm-1處強(qiáng)而寬的吸收峰為復(fù)合壁材分子上O—H及N—H的伸縮振動吸收峰,2 940 cm-1處為—CH2對稱伸縮振動吸收峰,1 648 cm-1處的吸收峰是酰胺I帶中C=O的伸縮振動吸收峰,1 090 cm-1處的吸收峰屬于壁材中多糖的C—O伸縮振動與環(huán)的振動。在藍(lán)圓鲹魚油紅外光譜中,3 012 cm-1處為脂肪酸雙酯雙鍵順式結(jié)構(gòu)中的順式碳碳雙鍵C=C—H的伸縮振動,說明魚油富含不飽和脂肪酸;2 928 cm-1和2 852 cm-1處為—CH2中C—H鍵反對稱伸縮振動和對稱伸縮振動;1 745 cm-1處為脂肪酸酯鍵中C=O的特征吸收峰。當(dāng)壁材與芯材混合并經(jīng)過噴霧干燥后,魚油微膠囊的FTIR圖譜既有壁材的特征吸收峰,又有魚油的特征吸收峰,并且在3 398 cm-1處出現(xiàn)強(qiáng)而寬的吸收峰,說明新物質(zhì)共價交聯(lián)反應(yīng)出現(xiàn)了新的N—H鍵,導(dǎo)致吸收峰強(qiáng)度增大[26]。魚油在3 012 cm-1及1 465 cm-1處的特征吸收峰經(jīng)過微膠囊化后在魚油微膠囊FTIR圖譜中變得很弱,說明藍(lán)圓鲹魚油可能被3 種混合壁材包埋在內(nèi)部,因此未出現(xiàn)強(qiáng)振動峰,由此可初步確定藍(lán)圓鲹魚油微膠囊的形成[27]。
圖3 FTIR表征魚油微膠囊結(jié)構(gòu)形成過程的變化Fig.3 Changes of structure formation of fi sh oil microcapsule characterized by FTIR
為了進(jìn)一步分析微膠囊化過程中含蛋白質(zhì)的復(fù)合壁材形成過程結(jié)構(gòu)的變化情況,利用去卷積方法對酰胺I帶(1 600~1 700 cm-1)進(jìn)行擬合。結(jié)果表明,明膠的擬合系數(shù)R2=0.994 61,復(fù)合壁材的擬合系數(shù)R2=0.999 48,魚油微膠囊的擬合系數(shù)R2=0.999 18,如圖4所示。
圖4 酰胺I帶的FTIR曲線和高斯曲線擬合圖譜Fig.4 FTIR curves and Gauss curve fi tting of amide I band
表1 酰胺I帶曲線擬合結(jié)果及譜圖指認(rèn)Table1 Fitting results of amide I band curve and identif i cation of secondary structures
由圖4和表1可知,明膠、復(fù)合壁材及微膠囊化魚油產(chǎn)品中均包含β-折疊、α-螺旋、無規(guī)卷曲和β-轉(zhuǎn)角4 種結(jié)構(gòu)。與純明膠相比,明膠經(jīng)過與其他壁材復(fù)配形成復(fù)合壁材后,β-折疊含量增加了4.78%(P<0.05),α-螺旋含量減少了1.94%(P>0.05),無規(guī)卷曲含量減少了2.15%(P<0.05),β-轉(zhuǎn)角含量減少了0.09%(P>0.05)。明膠經(jīng)過與其他壁材復(fù)合,并加入魚油制成魚油微膠囊后,β-折疊含量增加了2.68%(P<0.05);α-螺旋含量減少了1.33%(P>0.05);無規(guī)卷曲含量減少了2.80%(P<0.05);β-轉(zhuǎn)角含量增加了2.63%(P<0.05)。同時,與未添加魚油的復(fù)合壁材相比,添加魚油后,α-螺旋含量增加0.61%,β-折疊含量下降了2.10%、無規(guī)卷曲含量減少了0.65%、β-轉(zhuǎn)角含量增加了2.72%,說明蛋白界面膜的彈性及延展性得到提升。分析其原因可能是魚油中含有較多極性基團(tuán)或烯烴,疏水環(huán)境對于氫鍵的形成沒有影響,可能促進(jìn)α-螺旋結(jié)構(gòu)的形成,減少分子間氫鍵形成,從而有利于改善蛋白界面膜的彈性及延展性[28]。α-螺旋和β-折疊屬于相對規(guī)則的構(gòu)象,多數(shù)存在于蛋白質(zhì)的內(nèi)部,這兩種結(jié)構(gòu)中分布著較多的氫鍵,能與其他基團(tuán)發(fā)生氫鍵鍵合,使得蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)趨于規(guī)則,從而具有一定的剛性;β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲中不存在氫鍵或其他相互作用,使分子表現(xiàn)出較大的柔性;明膠與阿拉伯膠、海藻糖經(jīng)過混合、溶解、均質(zhì)乳化、噴霧干燥后,其剛性結(jié)構(gòu)含量從65.66%分別增加到68.50%、67.41%,柔性結(jié)構(gòu)含量從34.34%分別減少到31.50%、32.59%,說明壁材復(fù)配及魚油微膠囊化后蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)趨于規(guī)則,剛性增加,有利于提高囊壁穩(wěn)定性。同時,研究中發(fā)現(xiàn),純明膠蛋白質(zhì)在微膠囊形成并經(jīng)過噴霧干燥后,酰胺I帶向低波數(shù)方向移動,說明明膠蛋白質(zhì)分子與海藻糖和阿拉伯膠的羥基發(fā)生了氫鍵締合作用,減輕了蛋白質(zhì)受熱脫水作用導(dǎo)致的界面膜或囊壁結(jié)構(gòu)不均勻收縮,有利于維持微膠囊結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性[29-30]。
圖5 模擬消化過程中FFA釋放率隨時間的變化Fig.5 Release rate of free fatty acids during simulated digestion
圖5 為微膠囊化魚油在模擬體外口腔唾液消化10 min、胃液消化120 min后,在腸液中消化產(chǎn)物FFA的釋放曲線。開始時微膠囊產(chǎn)品FFA釋放率增加幅度較大,這可能是微膠囊表面殘留的表面油被消化所導(dǎo)致的;而在隨后相當(dāng)長的一段時間內(nèi),魚油微膠囊的FFA釋放率增速放緩。在腸液中模擬消化120 min后,魚油的FFA釋放率最高僅達(dá)到72.62%,說明魚油微膠囊未能完全溶解釋放。究其原因可能是糖類和蛋白質(zhì)類物質(zhì)交聯(lián)作用組成的壁材具有較致密的結(jié)構(gòu),模擬口腔消化液及胃液對微膠囊囊壁的消化能力有限,而胃液只能初步消化糖類物質(zhì),對蛋白質(zhì)類物質(zhì)的消化能力有限,無法完全破壞微膠囊壁材[23]。因此,復(fù)合壁材具有較強(qiáng)的抗消化能力,能有效保護(hù)魚油直至在腸液中釋放。
LSCM可實(shí)現(xiàn)對特定物質(zhì)的定性及定量觀察,對指定物質(zhì)進(jìn)行熒光染色,經(jīng)過不同激發(fā)態(tài)激光光源的掃描,有利于更加清晰地觀察微膠囊在模擬體外消化實(shí)驗(yàn)中的釋放行為及形態(tài)變化過程。圖6為LSCM反映的魚油微膠囊在模擬消化過程中微膠囊形態(tài)的變化。
圖6 模擬消化過程中魚油微膠囊形態(tài)變化Fig.6 Morphological changes of microcapsules during simulated digestion
如圖6所示,模擬消化前,魚油微膠囊呈完整包埋狀態(tài),表面有少量的綠色熒光。在經(jīng)過唾液消化后,魚油微膠囊發(fā)生一定的溶脹效應(yīng),體積增大,但由于魚油微膠囊在唾液環(huán)境中消化的時間較短,其保持了比較完整的形態(tài),說明其在口腔唾液中穩(wěn)定。經(jīng)過2 h的模擬胃液消化,魚油微膠囊形態(tài)發(fā)生明顯變化,部分顆粒發(fā)生溶脹,油脂外溢在微膠囊壁材的表面。其原因可能是在蛋白酶的作用下微膠囊含有的蛋白成分發(fā)生水解,經(jīng)初步消化,微膠囊出現(xiàn)部分分解,釋放出魚油[26]。圖6d表明,經(jīng)過模擬腸液消化后,魚油微膠囊的粒徑明顯減小,且顯微鏡下微膠囊分布量明顯減少、顆粒變小,說明可能是魚油微膠囊發(fā)生分解,造成了微膠囊蛋白質(zhì)骨架結(jié)構(gòu)的深度降解。模擬消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,微膠囊壁材雖然在模擬胃液、腸液環(huán)境的作用下不斷溶解,但囊壁仍然能保持完整的厚度均勻的結(jié)構(gòu),阻止芯材立即釋放,起到緩釋作用[13];當(dāng)微膠囊進(jìn)入模擬腸液中時,堿性環(huán)境使其平均粒徑逐漸減小,加速壁材結(jié)構(gòu)的瓦解[13]。隨著微膠囊顏色的改變,可以看出壁材保護(hù)結(jié)構(gòu)在逐漸瓦解,魚油由中心向壁材表面遷移擴(kuò)散,魚油逐步釋放。
本實(shí)驗(yàn)制備的微膠囊化藍(lán)圓鲹魚油產(chǎn)品顆粒圓整、表面光滑,為單核的腔體結(jié)構(gòu);通過熒光標(biāo)記油脂和蛋白,更加清晰地顯示了壁材包裹芯材結(jié)構(gòu)的形成。對芯材、復(fù)合壁材FTIR圖譜進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)譜圖中同時出現(xiàn)囊芯和囊壁的特征吸收峰,證明了魚油被包裹在囊壁中。噴霧干燥后蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)趨于規(guī)則,剛性增強(qiáng),β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲中存在氫鍵作用,柔性增強(qiáng),有效地抑制了魚油在干燥成囊及貯存中的擴(kuò)散逃離,有利于微膠囊結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定,對魚油的延緩釋放起到重要作用。體外模擬消化結(jié)果表明微膠囊化能夠有效抵抗口腔唾液、胃液環(huán)境對魚油的消化,提高魚油在腸液中的緩釋能力。用LSCM可觀察到模擬消化過程中微膠囊標(biāo)記物顏色的改變,魚油由中心向壁材表面遷移,魚油逐步釋放。從微觀結(jié)構(gòu)對囊壁形成過程的相互作用及模擬消化特性進(jìn)行系統(tǒng)分析,對于檢驗(yàn)微膠囊包埋效果、產(chǎn)品穩(wěn)定性及生物利用度具有一定意義。