農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機構(gòu)農(nóng)藥殘留檢測能力驗證的方法與技巧

◎ 帥 云，萬宏偉，王 娟，覃事玉

（湖南省常德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心，湖南 常德 415000）

定期對檢驗檢測機構(gòu)開展能力驗證是資質(zhì)認定、機構(gòu)考核等主管農(nóng)產(chǎn)品檢驗檢測機構(gòu)的特定要求[1]。量值溯源尚難實現(xiàn)或無法實現(xiàn)時，可以利用能力驗證來檢測測量結(jié)果的可信性[2]。

2014—2018年，常德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心參加了湖南省農(nóng)委組織的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)檢機構(gòu)檢測能力驗證，均一次通過。通過對2018年能力驗證進行分析總結(jié)，現(xiàn)對檢驗檢測機構(gòu)參加農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測能力驗證提出方法與技巧，以供參考。

1 材料與方法

1.1 考核樣品

此次能力驗證分為必考項目（34項）和選考項目（37項），常德市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心均報名參加，必考項目和選考項目有3項相同，共68種農(nóng)藥。本次能力驗證發(fā)放的樣品為已破碎芹菜樣品，由湖南省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心統(tǒng)一制備，實驗室發(fā)放的樣品在4個100 mL離心管中，其中1個空白樣品、3個平行樣品，每個樣品均為50 g。

1.2 主要儀器和試劑

氣相色譜儀Agilent 7890A ECD檢測器，氣相色譜儀Agilent 7890B FPD檢測器，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC/MS/MS）UPLC-XEVO TQD（美國waters公司）。

乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）、正己烷（色譜純）、甲醇（色譜純）、甲苯（色譜純）、蒸餾水（屈臣氏）。

1.3 檢測方法

采用NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進行檢測。

1.4 檢測項目

（1）必考項目。甲胺磷、氧樂果、甲拌磷、對硫磷、甲基對硫磷、甲基異柳磷、水胺硫磷、樂果、敵敵畏、毒死蜱、乙酰甲胺磷、三唑磷、丙溴磷、殺螟硫磷、二嗪磷、馬拉硫磷、亞胺硫磷、伏殺硫磷、六六六、百菌清、三唑酮、異菌脲、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、氯氰菊酯、氰戊菊酯、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、溴氰菊酯、氟氰戊菊酯、聯(lián)苯菊酯和氟胺氰菊酯，共34種農(nóng)藥。

（2）選考項目。辛硫磷、涕滅威（涕滅威砜、涕滅威亞砜）、克百威（三羥基克百威）、滅多威、甲萘威、三氯殺螨醇、腐霉利、五氯硝基苯、乙烯菌核利、多菌靈、吡蟲啉、氟蟲腈、啶蟲脒、噠螨靈、苯醚甲環(huán)唑、嘧霉胺、烯酰嗎啉、蟲螨腈、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、咪鮮胺、嘧菌酯、二甲戊樂靈、噻蟲嗪、氟啶脲、滅幼脲、阿維菌素、除蟲脲、滅蠅胺、甲霜靈、霜霉威、多效唑、氯吡脲、氯蟲苯甲酰胺、氯菊酯、醚菊酯、蟲酰肼和吡唑醚菌酯，共37種農(nóng)藥。

2 能力驗證結(jié)果

2018年農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測技術(shù)能力驗證結(jié)果見表1，回收率在70%～130%為合格。由表1可知，所有檢測結(jié)果均為合格。

表1 2018年芹菜中農(nóng)藥殘留定性定量檢測結(jié)果表

3 能力驗證的具體方法與技巧

3.1 儀器狀態(tài)與條件

儀器在能力驗證之前，需要進行常規(guī)性的維護，使儀器的靈敏度、重復性和精密度符合要求，確保儀器能正常運行[3-4]。然后把所有考核項目中的農(nóng)藥上機進行檢測，確定農(nóng)藥在儀器上的保留時間和響應值，并通過不斷的調(diào)整儀器參數(shù)，選擇合適的儀器條件，讓結(jié)果更加準確，確保以最好的狀態(tài)迎接能力驗證[5]。

3.2 量具、試劑及標準物質(zhì)

在標準物質(zhì)溶液配制及樣品前處理過程中，所使用的量具會對結(jié)果的準確性造成影響，所以都需要進檢定或校準，包括微量移液器、瓶口分液器、大肚移液管、容量瓶，以確保移取溶液和定容體積的準確性[6]。移液器和大肚移液管的使用要遵守使用規(guī)范，否則會使檢測結(jié)果有誤差。

所用的試劑如乙腈、正己烷、丙酮、甲醇、甲苯要使用色譜純，最好是使用同一廠家生產(chǎn)的試劑，方便排查儀器出現(xiàn)雜質(zhì)峰的問題。

農(nóng)藥標準物質(zhì)溶液要使用有證標準物質(zhì)溶液，使用時注意有效期，最好在能力驗證前再打開安瓿瓶進行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用，確保標準物質(zhì)溶液的濃度準確性。

3.3 樣品前處理

樣品前處理依據(jù)NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》和GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》進行，為了提高實驗得到的數(shù)據(jù)的準確性，可以按以下方法進行。

NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測方法》整個前處理過程主要是由稱取樣品，根據(jù)樣品質(zhì)量添加提取試劑乙腈，勻漿，加入7 g氯化鈉，振蕩，靜置30 min，再分別移取10 mL到2個25 mL燒杯中，水浴蒸發(fā)近干。

一個燒杯做有機磷類前處理，用1～2 mL丙酮淋洗25 mL燒杯2～3次，轉(zhuǎn)移到5 mL容量瓶，丙酮定容，用0.22 μm有機濾膜過濾至樣品瓶中，待測。

另一個燒杯做有機氯和氨基甲酸酯類前處理，先在燒杯中加入2 mL正己烷，然后將弗羅里硅柱用10 mL丙酮+正己烷（10+90）預淋洗，當溶劑液面到達佛羅里硅柱吸附層表面時，立即倒入上述待凈化溶液，用25 mL燒杯接收洗脫液，用丙酮+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗佛羅里硅柱，少量多次，接收的洗脫液約15 mL左右。再將接收洗脫液的25 mL燒杯放在水浴恒溫振蕩器上加熱，蒸發(fā)至5 mL以下，最好到2～3 mL，然后轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，用1～2 mL正己烷淋洗小燒杯轉(zhuǎn)移至容量瓶中，最后用正己烷定容至5 mL，取1～2 mL移入到2 mL進樣瓶中，待測。

GB/T 20769-2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》整個前處理過程主要是由稱取試樣，加入提取試劑乙腈，勻漿提取，加入氯化鈉，再勻漿提取1 min，振蕩，靜置30 min。然后將氨基柱放入固定架上，加樣前先用4 mL乙腈-甲苯（3+1）預洗Sep-Pak氨基柱，用雞心瓶接取濾液，當液面到達氨基柱填充物頂部時，用移液器加入2 mL提取液，再每次用2 mL乙腈-甲苯（3+1）洗滌氨基柱3次。收集所有濾液，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)濃縮近干，加入2 mL甲醇定容，用PTFE濾膜過濾至15 mL離心管中，然后用移液器移取0.2 mL樣品溶液于進樣瓶中，再加入0.8 mL蒸餾水，混勻，用于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC/MS/MS）的測定[7]。

整個前處理過程由一個經(jīng)驗豐富的實驗人員完成，另外一人進行輔助，最大限度的減少隨機誤差。其中有幾個細節(jié)需要注意：①在吸取液體或定容時，盡量用同一方法進行保證準確，如移取10 mL提取液時，統(tǒng)一都用大肚移液管或者微量移液器，不要一個樣品用大肚移液管，另外一個又用微量移液器。②進行有機氯測定前處理和液質(zhì)前處理時，淋洗活化固相萃取柱盡可能保證淋洗液的體積一致。③液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的前處理，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時，雞心瓶中的濾液保留一滴不干，用雞心瓶的余熱蒸干，避免出現(xiàn)農(nóng)藥損失，影響回收率[8-9]。

3.4 定性定量方法

能力驗證要求領(lǐng)樣后3 d之內(nèi)做出結(jié)果并上報，時間比較緊張，為保證能力驗證順利通過，采取以下幾個措施。

（1）樣品完成前處理之后，先將空白樣品和1號樣品上機檢測，確定農(nóng)藥種類和大致濃度，再用空白基質(zhì)提取溶液配成基質(zhì)混合標準工作溶液，添加濃度與能力驗證樣品濃度盡量接近，提高準確度[10]。

（2）液質(zhì)進行定量計算時，是用標準物質(zhì)溶液校準曲線進行計算，樣品上機濃度需要落在校準曲線范圍內(nèi)，提高數(shù)據(jù)的準確度。

（3）由于此次樣品為50 g，提取溶劑為50 mL，計算結(jié)果時，需要用原始計算公式進行計算，不能用簡化公式，防止出現(xiàn)計算錯誤。湖南省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗檢測中心在此次能力驗證中規(guī)定計算結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

式（1）中，ρ-標準溶液中農(nóng)藥的質(zhì)量濃度，單位為mg·L-1；A-樣品溶液中被測農(nóng)藥峰面積；As-農(nóng)藥標準溶液中被測農(nóng)藥的峰面積；V1-提取溶劑總體積，單位為mL；V2-吸取出用于檢測的提取溶液的體積，單位為mL；V3-樣品溶液定容體積，單位為mL；m-試樣的質(zhì)量，單位為g。

（4）在條件允許的情況下，可以進行添加回收率實驗和重復性實驗，進一步提高數(shù)據(jù)和結(jié)果的準確性。

（5）數(shù)據(jù)處理時，處理方法要保持一致，比如積分時，同一農(nóng)藥品種采用同樣的積分方法，提高結(jié)果準確性[11]。避免因為處理方法不一致，對結(jié)果產(chǎn)生影響。

4 小結(jié)

只有熟悉整個能力驗證流程，把控好整個實驗過程，精益求精，才能順利通過能力驗證。